一种基于磁性金属有机框架纳米酶和适配体信号放大的奈替米星检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于磁性金属有机框架纳米酶和适配体信号放大的奈替米星检测方法。该检测方法以靶标启动精心设计的发夹DNA结构，启动phi29聚合酶和切刻内切酶Nt.AlwI辅助下的特定DNA片段扩增反应，生成的特定DNA片段可以激活Crispr Cas12a系统的反式切割活性，磁性金属有机框架纳米酶作为信号报告探针，通过单链核苷酸连接的金属有机框架纳米酶在靶标存在下会被激活的Crispr Cas12a系统反式切割，孵育后磁分离收集金属有机框架纳米酶，然后向其中加入TMB/过氧化氢底物显色溶液，孵育后测定其在650nm波长下的吸光度进行奈替米星定量检测，该方法克服了针对奈替米星仪器检测方法中的各项条件限制，操作简单、灵敏度高、特异性强，可通过裸眼进行半定量，结果稳定，可靠。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品安全，具体涉及一种基于磁性金属有机框架纳米酶和适配体信号放大的奈替米星检测方法。

技术介绍

1、奈替米星(net)是一种化学性质稳定的半合成抗生素，主要由西索霉素经发酵转化或化学修饰而得，具有预防、治疗和诊断相关疾病、调节动物生理功能、促进生长发育等作用。目前被广泛用于临床治疗大肠埃希菌，变形杆菌等菌引起的呼吸道和消化道疾病，还用于各种农场动物断奶后多系统消耗综合征引起的泌尿道感染和继发感染。然而，奈替米星由于其稳定的化学结构和水溶性，难以被自然降解或完全去除，高剂量，长时间的体内残留可诱发人体多种毒性反应，包括耳毒性、肾毒性、神经毒性等。如果对其不合理使用，很容易导致奈替米星在环境和食品中蓄积，进而危害人体健康。因此，有必要开发一种可靠、高灵敏度、便携式的检测方法分析环境及食品中残留的奈替米星。

2、目前奈替米星的检测方法主要有毛细管电泳法、高效液相色谱法、液相色谱联用质谱法和共振瑞利散射法。虽然基于这些分析仪器的方法具有高灵敏度和特异性，但由于仪器不便于携带，因此无法用于现场实时检测。此外，检测过程需要复杂的前处理步骤和专本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种奈替米星的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述奈替米星适配体序列选自SEQ IDNO.1-5中任一序列。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述第一序列如SEQ ID NO.11所示，所述crRNA的序列如SEQ ID NO.10所示，所述单链DNA的序列如SEQ ID NO.6所示。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述扩增体系中包括扩增第一序列互补序列的引物、DNA聚合酶、dNTP。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述纳米酶复合物与单链...

【技术特征摘要】

1.一种奈替米星的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述奈替米星适配体序列选自seq idno.1-5中任一序列。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述第一序列如seq id no.11所示，所述crrna的序列如seq id no.10所示，所述单链dna的序列如seq id no.6所示。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述扩增体系中包括扩增第一序列互补序列的引物、dna聚合酶、dntp。

5.根据权利要求1所述的检...

【专利技术属性】
技术研发人员：王周平，江洪涛，齐硕，董效泽，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：