一种胶原蛋白肽中特征三肽总含量的检测方法技术

技术编号：41208901 阅读：2 留言：0更新日期：2024-05-09 23:30

本发明专利技术公开了一种胶原蛋白肽中特征三肽总含量的检测分析方法，本发明专利技术公开的方法基于四级杆串联质谱母离子扫描模式，分别采用碰撞能10~20 V和20~40 V，特征碎片离子[Gly‑Pro−46]<supgt;+</supgt;（m/z 127）和[Gly‑Hyp−46]<supgt;+</supgt;（m/z 143），母离子扫描范围230~336 m/z和246~352 m/z，标准品Gly‑Pro‑Hyp和Gly‑Hyp‑Ala，进行Gly‑Pro‑Yaa和Gly‑Hyp‑Yaa两种类型特征三肽总含量的半定量分析。本发明专利技术可以测得胶原蛋白肽样品中特征三肽的总含量，该指标相比于某种或者某些具体特征肽段的含量，能够更加准确地反映各种原料来源和生产工艺获得的胶原蛋白肽产品的技术水平，且该指标在不同生产批次间相对更加稳定，非常适合作为胶原蛋白肽产品的技术指标。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品检测，具体涉及一种基于串联质谱母离子扫描模式检测胶原蛋白肽中gly-pro-yaa和gly-hyp-yaa两种类型特征三肽总含量的液质联用分析方法。

技术介绍

1、胶原蛋白是一种由gly-x-y重复序列(x和y分别常为脯氨酸和羟脯氨酸)构成的结缔组织结构蛋白，在畜禽鱼肉中含量丰富(约占总蛋白10％-25％)，但经日常膳食摄入后不易被人体消化吸收。胶原蛋白经水解加工后可生成具有保护关节、皮肤、骨骼和心血管作用的生物活性肽。胶原蛋白分子量越低，越易被消化吸收而发挥其生物活性。因此，胶原低聚肽已成为一种重要的功能性食品原料。

2、胶原三肽原指胶原蛋白结构中gly-x-y三肽序列单元，2001年日本酒井康夫博士首次在研究论文中提出胶原三肽产品的概念，自此以后，胶原三肽(也称胶原蛋白三肽)作为一种高技术、高品质和高附加值的胶原蛋白肽产品出现在国内外大健康市场。一项韩国学者的研究表明，相比于平均分子量2000da的胶原蛋白肽，胶原三肽(平均分子量246da)口服入血含羟脯氨酸二/三肽的暴露量增加了十几倍，因此，胶原三肽的生物效价远高于较高分子量胶原蛋白肽。

3、不同动物来源和生产工艺获得的胶原蛋白肽产品中特征三肽的组成和含量差异很大，甚至不同生产批次样品中特征三肽的组成和含量也不稳定。目前行业普遍采用某一种或者几种特征肽段的含量来作为胶原三肽产品的一项重要技术指标，但在应用过程中发现，不同厂家、批次、原料和工艺之间指标差异很大，难以取得行业共识，不利于相关行业标准的建立。

4、本专利技术

技术实现思路

1、本专利技术的目的是实现胶原蛋白肽中特征三肽总含量的测定，从而提供一项可以准确反映胶原三肽产品质量和技术水平的指标，为胶原三肽产品质量标准的建立提供技术支持。

2、为实现上述专利技术目的，本专利技术采取的技术方案是：

3、采用液质联用分析技术，基于串联质谱母离子扫描模式，以2条典型肽段作为标准品，进行gly-pro-yaa和gly-hyp-yaa两种类型特征三肽的半定量分析。

4、上述的方法中，所述的gly-pro-yaa和gly-hyp-yaa两种类型特征三肽，其特征在于，gly代表甘氨酸，pro代表脯氨酸，hyp代表羟脯氨酸，yaa代表任意一种氨基酸。

5、上述的方法中，所述的液质联用检测方法，其特征在于，液相色谱条件为：色谱柱：atlantis t3 c18色谱柱(15cm×2.1mm,5μm)或其它性能相当的色谱柱；柱温：40℃；流动相：a相为0.1％甲酸水溶液(v/v)，b相为含0.1％甲酸的95％乙腈水溶液；流速：0.35ml/min；洗脱程序：0～5min 0％b，5～10.0min由0％b线性升至20％b，10.0～15.0min由20％b线性升至40％b，15.0～17.0min由40％b线性升至80％b，保持2.0min，然后回到初始流动相平衡4.0min，准备下一次进样；进样量：5.00μl。

6、上述的方法中，所述的液质联用检测方法，其特征在于，质谱条件为：离子源：电喷雾离子源(正离子扫描)；喷雾电压：4.0kv；干燥气温度：300℃；喷雾压力：35psi；干燥气流速：8l/分钟；扫描模式：母离子扫描(precursor scan)；碰撞能：gly-pro-yaa类型选用10～20v，gly-hyp-yaa类型选用20～40v；特征碎片离子：gly-pro-yaa类型选用[gly-pro-46]+(m/z 127)，gly-hyp-yaa类型选用[gly-hyp-46]+(m/z 143)；母离子扫描范围：gly-pro-yaa类型选用230～336m/z，gly-hyp-yaa类型选用246～352m/z。

7、上述的方法中，所述的典型肽段标准品，其特征在于，gly-pro-yaa类型选用gly-pro-hyp作为标准品，gly-hyp-yaa类型选用gly-hyp-ala作为标准品。

8、与现有技术相比，本专利技术的技术优势在于：

9、1)能够实现胶原蛋白肽样品中特征三肽总含量的测定。目前行业普遍采用串联质谱多反应监测(mrm)模式，进行某一种或者几种特征肽段的定量测定，难以做到特征肽总量的测定。本专利技术首次通过母离子扫描模式，分别选用[gly-pro-46]+和[gly-hyp-46]+作为特征碎片离子，典型肽段gly-pro-hyp和gly-hyp-ala作为标准品，实现了gly-pro-yaa和gly-hyp-yaa两种类型特征三肽总量的半定量分析。

10、2)目前行业普遍采用某一种或者几种特征肽段含量来作为胶原三肽产品的一项重要技术指标，但在应用过程中发现，不同厂家、批次、原料和工艺之间指标差异很大，难以取得行业共识，不利于相关行业标准的建立。gly-pro-yaa和gly-hyp-yaa两种类型特征三肽总含量作为胶原三肽产品技术指标，能够更加准确地反映各种原料来源和生产工艺获得产品的质量和技术水平，且该指标在不同生产批次间相对更加稳定，故非常适合作为胶原三肽产品质量标准的技术指标。

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【技术保护点】

1. Gly-Pro-Yaa和Gly-Hyp-Yaa两种类型特征三肽总含量在反应胶原蛋白肽产品技术指标上的应用。

2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Gly-Pro-Yaa和Gly-Hyp-Yaa两种类型特征三肽中， Gly代表甘氨酸，Pro代表脯氨酸，Hyp代表羟脯氨酸，Yaa代表任意一种氨基酸。

3.一种胶原蛋白肽中特征三肽总含量的检测方法，其特征在于，所述检测方法是基于液相色谱串联质谱母离子扫描模式检测胶原蛋白肽中的液质联用分析方法。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，液相色谱条件为：

5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，质谱条件为：

6.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，Gly-Pro-Yaa类型选用Gly-Pro-Hyp作为标准品，Gly-Hyp-Yaa类型选用Gly-Hyp-Ala作为标准品。

【技术特征摘要】

1. gly-pro-yaa和gly-hyp-yaa两种类型特征三肽总含量在反应胶原蛋白肽产品技术指标上的应用。

2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述gly-pro-yaa和gly-hyp-yaa两种类型特征三肽中， gly代表甘氨酸，pro代表脯氨酸，hyp代表羟脯氨酸，yaa代表任意一种氨基酸。

3.一种胶原蛋白肽中特征三肽总含量的检测方法，其特征在于，所述检测方法是...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴浩浩，白明凯，张梅超，郭红星，赵子方，
申请(专利权)人：中国海洋大学三亚海洋研究院，
类型：发明
国别省市：

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