【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物领域，并具体涉及人多能干细胞来源类间充质干细胞产生的外泌体在脑卒中治疗中的应用。
技术介绍
1、脑卒中缺血再灌注的病理生理过程中，缺血缺氧条件下神经细胞糖代谢方式由有氧氧化向无氧酵解转变，导致脑组织内乳酸等酸性物质累积ph值降低，组织酸化激活在神经系统中广泛存在的酸敏感离子通道蛋白asic1，介导由组织酸化诱发的“离子型门控”死亡机制和/或“代谢门控型”神经元死亡。有研究表明，抑制asic1通道的活性或敲除该基因可减轻缺血缺氧性细胞和动物模型中酸毒性所致的细胞损伤，但目前尚缺乏针对该靶点的有效药物应用于临床。
2、体内外研究均表明，多种成体组织来源的间充质干细胞产生的外泌体可通过递送mirna有效保护缺血性脑组织，明显改善脑卒中缺血再灌注的病理生理过程，促进神经细胞再生和神经功能恢复。但具体有效成分和分子机制尚未阐明；另外不同组织来源、不同培养工艺的间充质干细胞纯化所得的外泌体存在质量差异，难以保证恒定的有效成分的含量，临床疗效难以保证，阻碍临床应用进程。
3、因此，本领域仍然存在对能够有效治疗脑卒中的药物的需要。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种多能干细胞来源的类间充质干细胞的外泌体，应用于脑卒中的治疗。
2、本专利技术发现类间充质干细胞外泌体可以显著减少脑卒中缺血再灌注损伤导致的神经元死亡。
3、本专利技术发现类间充质干细胞外泌体可以显著提升脑中动脉栓塞受损脑组织的细胞活力。
4、本专利技
5、利用本专利技术的诱导分化工艺生产的类间充质干细胞(induced mesenchymal stemcells,imsc)分泌的外泌体能够有效提升氧糖剥夺条件下的神经元的存活率。
6、本专利技术将imsc来源的外泌体加入神经元氧糖剥夺细胞模型中，对受损神经细胞的转录组产生了影响，与神经细胞死亡和功能相关的通路发生了改变。
7、本专利技术的imsc来源的外泌体中对神经元起到保护作用的有效成分是 mirna。
8、本专利技术的imsc来源的外泌体中含有的具有潜在治疗作用的mirna 能够挽救氧糖剥夺导致的神经细胞死亡。
9、本专利技术的类间充质干细胞外泌体和mirna靶向抑制asic1，从而对遭受缺血、缺氧、酸毒性的神经元具有保护作用。
10、本专利技术的imsc来源的外泌体中含有的具有潜在治疗作用的mirna 能够有效提升脑中动脉栓塞受损脑组织细胞活力。
11、本专利技术的imsc来源的外泌体内容物中包含的有潜在治疗作用的 mirna种类和含量相对恒定。相比于其它成体组织来源的mirna具有特异性并且含量丰富。
12、本专利技术可以用多能干细胞来源的类间充质干细胞为纯生物合成的方法生成集中的有效成分mirna到外泌体中，抑制脑卒中过程中对神经元损伤起到关键作用的膜的酸感受器asic1蛋白的表达含量，从而减轻该离子通道蛋白激活所介导的神经元死亡。
13、因此，在一方面，本专利技术提供一种质量均一稳定且有效成分明确的外泌体，其包括靶向抑制asic1表达的microrna，任选地，其中 microrna包含hsa-mir-21-5p和/或hsa-mir-125b-5p，任选地，所述外泌体的批次稳定性r2超过0.90，进一步任选地，所述外泌体的批次稳定性 r2大于0.99。
14、在一个实施方案中，本专利技术的外泌体的有效成分包括占总microrna 含量的80％以上的前十种mirna家族，任选地，所述前十种mirna家族为mir-199-3p、let-7-5p/98-5p、mir-122-5p、mir-423-5p、mir-125- 5p、mir-15-5p/16-5p/195-5p/424-5p/497-5p、mir-99-5p/100-5p、mir- 221-3p/222-3p、mir-320、mir-21-5p/590-5p。
15、在另一个实施方案中，本专利技术的外泌体由人多能干细胞来源类间充质干细胞分泌。
16、在另一方面，本专利技术提供一种药物组合物，其包含本专利技术的外泌体和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
17、在又一方面，本专利技术提供本专利技术的外泌体在制备用于治疗脑卒中或提升脑中动脉栓塞受损脑组织细胞活力的药物中的用途。
18、在另一方面，本专利技术提供本专利技术的外泌体在制备用于抑制asic1基因从而治疗与asic1基因相关疾病或病症的药物中的用途，任选地，其中所述抑制是抑制asic1基因的mrna水平表达量、抑制asic1基因的蛋白水平表达量或抑制asic1基因的mrna水平表达量和蛋白水平表达量。
19、在又一方面，本专利技术提供本专利技术的外泌体在制备用于保护神经细胞的药剂中的用途，任选地，所述神经细胞是神经元细胞，进一步任选地，所述神经元细胞遭受缺血、缺氧和/或酸毒性，再进一步任选地，所述保护神经细胞是挽救氧糖剥夺导致的神经细胞死亡。
20、在另一方面，本专利技术提供一种制备外泌体的方法，其包括：
21、i)提供人多能干细胞来源类间充质干细胞；
22、ii)获得所述人多能干细胞来源类间充质干细胞的培养上清；
23、iii)任选地进行外泌体质量控制检测。
24、在一个实施方案中，其中在i)中，提供人多能干细胞来源类间充质干细胞包括诱导人多能干细胞形成类间充质干细胞。
25、在另一个实施方案中，其中在i)中，提供人多能干细胞来源类间充质干细胞包括分离类间充质干细胞，并且任选地包括鉴定类间充质干细胞。
26、在又一方面，本专利技术提供一种药物组合物，其包含hsa-mir-21-5p和/ 或hsa-mir-125b-5p以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
27、在另一方面，本专利技术提供hsa-mir-21-5p和/或hsa-mir-125b-5p在制备用于治疗脑卒中或提升脑中动脉栓塞受损脑组织细胞活力的药物中的用途。
28、在又一方面，本专利技术提供hsa-mir-21-5p和/或hsa-mir-125b-5p在制备用于抑制asic1基因从而治疗与asic1基因相关疾病或病症的药物中的用途，任选地，其中所述抑制是抑制asic1基因的mrna水平表达量、抑制asic1基因的蛋白水平表达量或抑制asic1基因的mrna水平表达量和蛋白水平表达量。
29、在另一方面，本专利技术提供hsa-mir-21-5p和/或hsa-mir-125b-5p在制备用于保护神经细胞的药剂中的用途，任选地，所述神经细胞是神经元细胞，进一步任选地，所述神经元细胞遭受缺血、缺氧和/或酸毒性，再进一步任选地，所述保护神经细胞是挽救氧糖剥夺导致的神经细胞死亡。
30、在又一方面，本专利技术提供一种制备用于产生本专利技术的外泌体的类间充质本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种质量均一稳定且有效成分明确的外泌体，其包括靶向抑制ASIC1表达的microRNA，任选地，其中microRNA包含hsa-mir-21-5p和/或hsa-mir-125b-5p，任选地，所述外泌体的批次稳定性R2超过0.90，进一步任选地，所述外泌体的批次稳定性R2大于0.99。
2.根据权利要求1所述的外泌体，其有效成分包括占总microRNA含量的80％以上的前十种miRNA家族，任选地，所述前十种miRNA家族为miR-199-3p、let-7-5p/98-5p、miR-122-5p、miR-423-5p、miR-125-5p、miR-15-5p/16-5p/195-5p/424-5p/497-5p、miR-99-5p/100-5p、miR-221-3p/222-3p、miR-320、miR-21-5p/590-5p。
3.根据权利要求1或2所述的外泌体，其由人多能干细胞来源类间充质干细胞分泌。
4.一种药物组合物，其包含权利要求1至3中任一项所述的外泌体和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
5.权利要求1至3中任
6.权利要求1至3中任一项所述的外泌体在制备用于抑制Asic1基因从而治疗与Asic1基因相关疾病或病症的药物中的用途，任选地，其中所述抑制是抑制Asic1基因的mRNA水平表达量、抑制Asic1基因的蛋白水平表达量或抑制Asic1基因的mRNA水平表达量和蛋白水平表达量。
7.权利要求1至3中任一项所述的外泌体在制备用于保护神经细胞的药剂中的用途，任选地，所述神经细胞是神经元细胞，进一步任选地，所述神经元细胞遭受缺血、缺氧和/或酸毒性，再进一步任选地，所述保护神经细胞是挽救氧糖剥夺导致的神经细胞死亡。
8.一种制备权利要求1至3中任一项所述的外泌体的方法，其包括：
9.根据权利要求8所述的方法，其中在i)中，提供人多能干细胞来源类间充质干细胞包括诱导人多能干细胞形成类间充质干细胞。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其中在i)中，提供人多能干细胞来源类间充质干细胞包括分离类间充质干细胞，并且任选地包括鉴定类间充质干细胞。
11.一种药物组合物，其包含hsa-mir-21-5p和/或hsa-mir-125b-5p以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
12.hsa-mir-21-5p和/或hsa-mir-125b-5p在制备用于治疗脑卒中或提升脑中动脉栓塞受损脑组织细胞活力的药物中的用途。
13.hsa-mir-21-5p和/或hsa-mir-125b-5p在制备用于抑制Asic1基因从而治疗与Asic1基因相关疾病或病症的药物中的用途，任选地，其中所述抑制是抑制Asic1基因的mRNA水平表达量、抑制Asic1基因的蛋白水平表达量或抑制Asic1基因的mRNA水平表达量和蛋白水平表达量。
14.hsa-mir-21-5p和/或hsa-mir-125b-5p在制备用于保护神经细胞的药剂中的用途，任选地，所述神经细胞是神经元细胞，进一步任选地，所述神经元细胞遭受缺血、缺氧和/或酸毒性，再进一步任选地，所述保护神经细胞是挽救氧糖剥夺导致的神经细胞死亡。
15.一种制备用于产生权利要求1至3中任一项所述的外泌体的类间充质干细胞的方法，其包括：
...【技术特征摘要】
1.一种质量均一稳定且有效成分明确的外泌体，其包括靶向抑制asic1表达的microrna，任选地，其中microrna包含hsa-mir-21-5p和/或hsa-mir-125b-5p，任选地，所述外泌体的批次稳定性r2超过0.90，进一步任选地，所述外泌体的批次稳定性r2大于0.99。
2.根据权利要求1所述的外泌体，其有效成分包括占总microrna含量的80％以上的前十种mirna家族，任选地，所述前十种mirna家族为mir-199-3p、let-7-5p/98-5p、mir-122-5p、mir-423-5p、mir-125-5p、mir-15-5p/16-5p/195-5p/424-5p/497-5p、mir-99-5p/100-5p、mir-221-3p/222-3p、mir-320、mir-21-5p/590-5p。
3.根据权利要求1或2所述的外泌体，其由人多能干细胞来源类间充质干细胞分泌。
4.一种药物组合物，其包含权利要求1至3中任一项所述的外泌体和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
5.权利要求1至3中任一项所述的外泌体在制备用于治疗脑卒中或提升脑中动脉栓塞受损脑组织细胞活力的药物中的用途。
6.权利要求1至3中任一项所述的外泌体在制备用于抑制asic1基因从而治疗与asic1基因相关疾病或病症的药物中的用途，任选地，其中所述抑制是抑制asic1基因的mrna水平表达量、抑制asic1基因的蛋白水平表达量或抑制asic1基因的mrna水平表达量和蛋白水平表达量。
7.权利要求1至3中任一项所述的外泌体在制备用于保护神经细胞的药剂中的用途，任选地，所述神经细胞是神经元...
【专利技术属性】
技术研发人员：张愚，王淑艳，李炳男，甘一迪，于越，李鑫，
申请(专利权)人：北京泽辉辰星生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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