一种多能性基因表达水平检验方法技术

本发明专利技术涉及参考品细胞用于检验多能性基因表达水平的用途，其中所述参考品细胞选自所述多能性基因的表达量低且稳定的细胞优选地，所述参考品细胞选自HFF细胞，任选地，所述多能性基因选自OCT4、NANOG。本发明专利技术还涉及OCT4、NANOG的引物和探针。本发明专利技术还涉及多能性基因表达水平检验方法。本发明专利技术进一步涉及所述检验方法在hPSC残留水平检验、hPSC分化过程表征中的用途。本发明专利技术的方法具有简便、稳定、灵敏度高、适用范围广、可及性强等优点，因此易于标准化，能够为细胞多能性基因表达水平的检验提供统一标准。统一标准。统一标准。

【技术实现步骤摘要】
一种多能性基因表达水平检验方法


[0001]本专利技术涉及生物领域，并具体涉及一种多能性基因表达水平检验方法及其相关应用。

技术介绍

[0002]目前，多能性基因表达量检验方法种类繁多，包括免疫杂交技术、RT
‑
PCR及荧光定量PCR技术等。其中，荧光定量PCR技术因其特异性和灵敏度的优势，被行业内普遍接受。但是，荧光定量PCR技术在用于检验多能性基因表达量时仍然存在缺陷，例如缺乏统一参考品。
[0003]CN110573607A涉及一种多能干细胞测定，并具体涉及一种以掺入了多能干细胞(PSC)的参比培养物作对照品的PSC残留水平检验方法。但该方法中的参比培养物制备困难，且仅可用于检测未分化PSC残留的水平，因此，该方法不适用于细胞的一般性多能性基因表达水平检验。
[0004]CN110268056A涉及一种包封的肝组织，并具体涉及一种以人胚干细胞(hESC)作为对照细胞的多能性基因表达水平检验方法。但因hESC较难获取，不易于商业化；且不同培养条件下的hESC多能性基因表达量参差不齐，因而hESC不适宜作参考本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.参考品细胞用于检验多能性基因表达水平的用途，其中所述参考品细胞选自所述多能性基因的表达量低且稳定的细胞，任选地，所述参考品细胞选自人包皮成纤维细胞(HFF)、人皮肤成纤维细胞(HSF)、骨髓间充质干细胞(BMMSC)、脂肪间充质干细胞(ADMSC)、脐带间充质干细胞(UCMSC)以及人原代前脂肪细胞、人脑血管周细胞、人软骨细胞、人原代主动脉平滑肌细胞、人原代成骨细胞，优选地，所述参考品细胞选自HFF细胞，任选地，所述多能性基因选自OCT4、NANOG。2.根据权利要求1所述的用途，其中检验多能性基因表达水平包括选择内部对照，任选地，所述内部对照选自内部阳性对照、内部阴性对照，优选地，所述内部阳性对照选自GAPDH基因。3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述参考品细胞可用于检验人多能干细胞(hPSC)相关制剂中的hPSC残留水平，或者用于表征hPSC分化过程。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的用途，其中所述多能性基因表达水平以2
‑
ΔΔCq
形式进行定量。5.OCT4基因检测剂，其包含OCT4基因正向引物序列、OCT4基因反向引物序列以及任选地OCT4基因探针序列，任选地，所述OCT4基因正向引物序列(5
’‑3’
)为AGGAAGCTGACAACAATGAA，所述OCT4基因反向引物序列(5
’‑3’
)为TTGCCTCTCACTCGGTTC，所述OCT4基因探针序列(5
’‑3’
)为FAM
‑
TTCGCTTTCTCTTTCGGGCCTGCACG
‑
BHQ1。6.NANOG基因检测剂，其包含NANOG基因正向引物序列、NANOG基因反向引物序列以及任选地NANOG基因探针序列，任选地，所述NANOG基因正向引物序列(5
’‑3’
)为AACTCTCCAACATCCTGAACCT，所述NANOG基因反向引物序列(5
’‑3’
)为CTGCGTCACACCATTGCTATT，所述NANOG基因探针序列(5
’...

【专利技术属性】
技术研发人员：张愚，甘一迪，张帅，罗艳超，徐然然，王淑艳，
申请(专利权)人：北京泽辉辰星生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：