【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及核酸提取，具体为核酸提取裂解结合液、核酸提取试剂盒及提取方法。
技术介绍
1、随着分子生物学技术的发展，基因组水平上的研究已成为热点。在分子遗传学和分子流行病学中，无论是全基因组关联分析( gwas) 、候选 snp 位点基因分型，还是基因组文库的建立，都需要从大批量血液样本中提取基因组dna。所抽提得到的 dna 浓度、纯度和一级结构的完整性都会影响到后续的研究，因此高效、可靠的高通量 dna 提取方法是分子遗传学基础研究迫切需要的。
2、dna的抽提方法有很多，包括传统的酚-氯仿法、盐析法、滤膜离心柱法等。这些方法各有优缺点，但由于人工提取，样本处理同样的不适用于自动化操作，限制了临床的应用。传统抽提法中通常使用磁珠，磁珠法的缺点是所得dna纯度易受磁珠残留影响，裂解时间、样本量和乙醇浓度等因素也都有可能影响dna提取纯度。
3、核酸裂解是核酸提取中最初且最重要的一步，而其效果取决于裂解液的作用，性能优良的裂解液，不仅需要做到快速高效的裂解细胞，还需要实现更高核酸提取纯度的目的，在降低成本的同时保证所提核酸的数量和质量。
技术实现思路
1、本专利技术提供了核酸提取裂解结合液、全血核酸提取试剂盒及提取方法，所述核酸提取裂解结合液，能够高效裂解并分离核酸，在降低成本的同时保证所提核酸的数量和质量。
2、有鉴于此，本专利技术的方案为：
3、本专利技术的第一个方面，提出核酸提取裂解结合液，包括浓度为0.1~2%的生物活性素、
4、进一步地，所述生物活性素选自伊枯菌素（iturin）、地衣素（lichenysin）、表面活性素（surfactin）、棘球白素（echinocandin）中的至少一种。
5、进一步地，所述为四臂-聚乙二醇-氨基分子量为1000~5000，优选为2000~3000；更优选为3000。
6、进一步地，所述高离序盐选自盐酸胍、异硫氰酸胍、硫氰酸钾、尿素、氯化锂和高氯酸盐中的至少一种；
7、和/或，所述第一缓冲液为hepes、醋酸钠-醋酸或tris-hcl缓冲液；
8、和/或，所述表面活性剂选自triton x-100、np-40、tween-20、tween-80、sds或sls中的至少一种。
9、本专利技术的第二个方面在于，提出核酸提取试剂盒，包含第一个方面所述的裂解结合液。
10、进一步地，所述核酸提取试剂盒还包括磁珠溶液、洗涤液、洗脱液及蛋白酶k。
11、优选地，所述洗涤液包括洗涤液一和洗涤液二；所述洗涤液一含有1~3m高离序盐、5~200mm第二缓冲液、1~100mm无机盐离子、20~6%沉淀剂；所述洗涤液二含有5~200mm第二缓冲液、1~100mm无机盐离子、30%~80%沉淀剂。
12、优选地，所述洗脱液含有5~200mm第二缓冲液，1~100mm无机盐离子。
13、优选地，所述第二缓冲液选自hepes、醋酸钠-醋酸或tris-hcl缓冲液中的至少一种；
14、和/或，所述无机盐离子选自氯化钠、氯化钾、醋酸钠或柠檬酸钠中的至少一种；
15、和/或，所述沉淀剂选自乙醇或异丙醇。
16、优选地，磁珠选用超顺磁性氧化硅纳米微球。
17、本专利技术的第三个方面在于，提出一种核酸提取方法，步骤包括：
18、将第一个方面所述的裂解结合液与样本、蛋白酶k和磁珠溶液混合，50~80℃下裂解5~20min，收集磁珠-核酸复合物；
19、用洗涤液洗涤磁珠-核酸复合物，磁吸并收集磁珠-核酸复合物；
20、向磁珠-核酸复合物中加入洗脱液，50~80℃洗脱2~5min，收集核酸。
21、与现有技术相比，本专利技术包括但不限于以下有益效果：
22、本专利技术所述核酸裂解结合液中的生物活性素能够高效裂解细胞，释放核酸，蛋白增溶剂使得蛋白能够更有效地与核酸分离，用于磁珠法核酸提取时能够能够有效提高核酸纯度和得率，保证核酸提取质量。
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1.核酸提取裂解结合液，其特征在于，包括浓度为0.1~2%的生物活性素、浓度为1~5%的四臂-聚乙二醇-氨基、浓度为2~6M的高离序盐、浓度为5~200mM的第一缓冲液及浓度为0.1~1%的表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于，所述生物活性素选自伊枯菌素、地衣素、表面活性素、棘球白素中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于，所述四臂-聚乙二醇-氨基的分子量为1000~5000。
4.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于，所述高离序盐选自盐酸胍、异硫氰酸胍、硫氰酸钾、尿素、氯化锂和高氯酸盐中的至少一种；
5.核酸提取试剂盒，其特征在于，包含权利要求1-4任意一项所述的裂解结合液。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，还包括磁珠溶液、洗涤液、洗脱液及蛋白酶K。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液包括洗涤液一和洗涤液二；所述洗涤液一含有1~3M高离序盐、5~200mM第二缓冲液、1~100mM无机盐离子、20~6%沉淀剂；所述洗涤液二含
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述洗脱液含有5~200mM第二缓冲液，1~100mM无机盐离子。
9.根据权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于，所述第二缓冲液选自HEPES、醋酸钠-醋酸或Tris-HCl缓冲液中的至少一种；
10.一种核酸提取方法，其特征在于，步骤包括：
...【技术特征摘要】
1.核酸提取裂解结合液，其特征在于，包括浓度为0.1~2%的生物活性素、浓度为1~5%的四臂-聚乙二醇-氨基、浓度为2~6m的高离序盐、浓度为5~200mm的第一缓冲液及浓度为0.1~1%的表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于，所述生物活性素选自伊枯菌素、地衣素、表面活性素、棘球白素中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于，所述四臂-聚乙二醇-氨基的分子量为1000~5000。
4.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于，所述高离序盐选自盐酸胍、异硫氰酸胍、硫氰酸钾、尿素、氯化锂和高氯酸盐中的至少一种；
5.核酸提取试剂盒，其特征在于，包含权利要求1-4任意一项所述的裂解结合液。
...
【专利技术属性】
技术研发人员：裴玉伟，
申请(专利权)人：北京瑞贝怡可生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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