一种从陈旧福尔马林固定组织提取ＤＮＡ的方法技术

本发明专利技术公开了一种从陈旧福尔马林固定组织提取ＤＮＡ的方法。该发明专利技术的基本原理是利用微波热效应以水分子快速移除固定组织中的福尔马林，并消除福尔马林醛基引起的ＤＮＡ－蛋白质交联，使ＤＮＡ结构得以全部或部分恢复，从而获得较好质量的ＤＮＡ。本发明专利技术是一种以微波热修复为基础的简单、高效的陈旧福尔马林固定组织ＤＮＡ抽提方法，所获得的ＤＮＡ质量较高（片段大、纯度高），可用于多重荧光ＰＣＲ－毛细管电泳（ＦＭ－ＣＥ）、变性高效液相色谱（ＤＨＰＬＣ）分析、直接ＤＮＡ测序等分子生物学方法分析。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从陈旧福尔马林固定组织提取DNA的方法，用于分子生物学检
技术介绍
随着人类基因组与单倍体计划的完成，生命科学研究已经进入功能基因组学的新 阶段。在癌症基因组学、药物基因组学等为代表的新兴学科为实现癌症等人类重大疾病的 个体化预防和治疗带来美好前景。但是，这些大规模基因组学检测的首要条件是获得质量 良好的DNA样本。新鲜组织标本是理想的DNA样本来源，但是取样与运输均比较困难，且 有可能影响病人的最终病理诊断而影响医疗质量，因此难以常规开展。石蜡包埋组织(蜡 块)常规保存于医院病理科，总量很大。但是，就单个病例而言，蜡块数量有限并受医疗质 量管理条例的限制，供提取的组织量极为有限，而且受切片和组织处理的影响，通常难以获 得高质量的DNA样本。因此，石蜡包埋组织从质与量上均难以满足大规模基因组学检测的 要求。外科手术标本均需要在福尔马林(4%甲醛)中固定数月至数年，以保证病人的诊断 与充分。通常情况下，这些标本大多统一销毁。在病人知情同意的前提下，这些标本应该成 为基因组学研究的可靠DNA来源。但是，常规抽提方法难以获得高质量的DNA，而且DNA抽 提效率不高。目前本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从陈旧福尔马林固定组织提取ＤＮＡ的方法，其特征在于包括如下步骤：　　１）取４５～５５ｍｇ组织，放入干净的５ｍｌ试管中，在试管内加入２．５～３ｍｌ的ｄｄＨ↓［２］Ｏ，将试管放入烧杯中，在烧杯中加入水，水的量以刚好超过试管液面高度为准，微波５００Ｗ功率加热３ｍｉｎ，更换试管内的水，再以５００Ｗ功率微波加热２ｍｉｎ，取出组织；　　２）将组织剪成碎块，滤纸吸干，并依次用梯度浓度的乙醇浸泡：７０％２小时；８０％０．５小时；９０％０．５小时；９５％０．５小时；１００％０．５小时；３）再以０．５×磷酸盐缓冲液浸泡０．５小时两次，滤纸将磷酸盐缓冲液液吸净；　　４）加入６００～１０００μｌ普通组织裂解液，研...

【技术特征摘要】
一种从陈旧福尔马林固定组织提取DNA的方法，其特征在于包括如下步骤1)取45～55mg组织，放入干净的5ml试管中，在试管内加入2.5～3ml的ddH2O，将试管放入烧杯中，在烧杯中加入水，水的量以刚好超过试管液面高度为准，微波500W功率加热3min，更换试管内的水，再以500W功率微波加热2min，取出组织；2)将组织剪成碎块，滤纸吸干，并依次用梯度浓度的乙醇浸泡70％ 2小时；80％0.5小时；90％0.5小时；95％0.5小时；100％0.5小时；3)再以0.5×磷酸盐缓冲液浸泡0.5小时两次，滤纸将磷酸盐缓冲液液吸净；4)加入600～1000μl普通组织裂解液，研磨成匀浆，移入2ml离心管，加20mg/ml浓度的蛋白酶K15～20μl，55℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕炳建，钱昕，盛弘强，来茂德，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]