【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种可特异性结合糖基化i型跨膜蛋白gpnmb的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、gpnmb是一种糖基化i型跨膜蛋白，也被称为骨激活素(oa)、树突状细胞相关的肝素-硫酸蛋白多糖-整合素配体(dc-hil)和造血性生长因子诱导的神经激素-1型(hgfin)。gpnmb细胞外结构域(ecd)包含一个信号肽、一个rgd基序(r-精氨酸，g-甘氨酸，和d-天冬氨酸)、一个免疫球蛋白(ig)样多囊肾疾病(pkd)结构域和一个环状结构域。gpnmb在大多数细胞类型和组织中都有组成性表达，由于gpnmb最初与肿瘤细胞相关，gpnmb在几种类型的癌症中被广泛研究，如黑色素瘤、肺癌、乳腺癌和胃癌。此外，gpnmb蛋白还促进肿瘤生长和肿瘤侵袭转移。因此，对gpnmb蛋白的检测对控制癌细胞增殖、侵袭、迁移和转移有重要意义，而且通过对gpnmb蛋白的调控对潜在的联合疗法方案的确定也至关重要。
2、gpnmb蛋白是一个具有560个氨基酸的跨膜蛋白，与黑素体结构蛋白pmel 17具有显著的氨基酸序列同源性(26％的氨基酸同源性)。它作为一种与黑素体相关的跨膜糖蛋白，在多种细胞类型和肿瘤中发挥重要作用。然而，gpnmb蛋白在不同类型癌症中的确切作用尚不完全清楚。目前，单克隆抗体靶向肿瘤特异性抗原的癌症免疫治疗方法已显示出巨大的潜力，而开发出高特异性、高亲和力的抗人gpnmb单克隆抗体一方面为研究gpnmb蛋白的功能可提供重要工具；另一方面，利用gpnmb蛋白单克隆抗体检测各种肿瘤中gpnmb的浓度，可有助于疾
技术实现思路
1、(一)要解决的技术问题
2、鉴于现有技术的上述缺点、不足，本专利技术提供一种抗糖基化i型跨膜蛋白gpnmb单克隆抗体，与gpnmb蛋白的结合具有特异性和高亲和力，其为研究gpnmb蛋白的功能和检测各种肿瘤中gpnmb的浓度等提供了有力工具。
3、(二)技术方案
4、第一方面，本专利技术提供一种抗糖基化i型跨膜蛋白gpnmb单克隆抗体，其包括：重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)；
5、所述重链可变区包括由seq id no:2氨基酸序列表示的互补决定区h-cdr1，由seqid no:3氨基酸序列表示的互补决定区h-cdr2和由seq id no:4氨基酸序列表示的互补决定区h-cdr3；所述轻链可变区包括由seq id no:6氨基酸序列表示的互补决定区l-cdr1，由seq id no:7氨基酸序列表示的互补决定区l-cdr2和由seq id no:8氨基酸序列表示的互补决定区l-cdr3；或者，
6、所述重链可变区包括由seq id no:10氨基酸序列表示的互补决定区h-cdr1，由seq id no:11氨基酸序列表示的互补决定区h-cdr2和由seq id no:12氨基酸序列表示的互补决定区h-cdr3；所述轻链可变区包括由seq id no:14氨基酸序列表示的互补决定区l-cdr1，由seq id no:15氨基酸序列表示的互补决定区l-cdr2和由seq id no:16氨基酸序列表示的互补决定区l-cdr3。
7、根据本专利技术的较佳实施例，重链可变区(vh)具有seq id no:1所示的氨基酸序列，或者具有seq id no:9所示的氨基酸序列。
8、根据本专利技术的较佳实施例，轻链可变区(vl)具有seq id no:5所示的氨基酸序列，或者具有如seq id no:13所示的氨基酸序列。
9、第二方面，本专利技术提供一种编码抗糖基化i型跨膜蛋白gpnmb单克隆抗体的多核苷酸序列。
10、第三方面，本专利技术提供一种加载有上述多核苷酸序列的表达载体。
11、第四方面，本专利技术提供一种宿主细胞，其由所述表达载体转化得到。
12、通过合成所述编码抗糖基化i型跨膜蛋白gpnmb单克隆抗体的多核苷酸序列，将其插入到载体中以构建得到表达载体，将表达载体转入感受态细胞，得到转化成功的宿主细胞，通过培养所述宿主细胞，从宿主细胞中分离和纯化得到所述抗糖基化i型跨膜蛋白gpnmb单克隆抗体。宿主细胞可以是原核细胞，如大肠杆菌、枯草杆菌、链霉菌属和假单胞菌属，也可是真核细胞，如酵母菌，还可是高等真核细胞，如昆虫细胞。
13、第五方面，本专利技术提供一种检测试剂盒或抗体芯片或抗体探针，其包含上述任一项所记载的抗糖基化i型跨膜蛋白gpnmb单克隆抗体。
14、(三)有益效果
15、本专利技术提供了两种抗糖基化i型跨膜蛋白gpnmb单克隆抗体，与gpnmb蛋白的结合具有特异性，且亲和力高，可有效降低gpnmb蛋白的检测限(两抗体的gpnmb蛋白检测限lod分别为1.23ng/ml和1.27ng/ml)，这为研究gpnmb蛋白的功能和检测各种肿瘤中gpnmb的浓度提供了有力工具。所述两种抗糖基化i型跨膜蛋白gpnmb单克隆抗体半抑制浓度(ic50)分别为1484ng/ml和1409ng/ml，与gpnmb蛋白具有高亲和力，有望提供一种有效的表达gpnmb蛋白的癌症免疫治疗方案。
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1.一种抗糖基化I型跨膜蛋白GPNMB单克隆抗体，其特征在于，其包括重链可变区VH和轻链可变区VL；
2.根据权利要求1所述的抗糖基化I型跨膜蛋白GPNMB单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区VH具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或者具有SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的抗糖基化I型跨膜蛋白GPNMB单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区VL具有SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，或者具有如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
4.一种编码权利要求1-3任一项所述的抗糖基化I型跨膜蛋白GPNMB单克隆抗体的多核苷酸序列。
5.一种加载有权利要求4所述的多核苷酸序列的表达载体。
6.一种宿主细胞，其由权利要求5所述的表达载体转化得到。
7.一种检测试剂盒或抗体芯片或抗体探针，其包含权利要求1-3任一项所述的抗糖基化I型跨膜蛋白GPNMB单克隆抗体。
8.权利要求1-3任一项所述的抗糖基化I型跨膜蛋白GPNMB单克隆抗体在制备检测GPNMB蛋白浓度
...【技术特征摘要】
1.一种抗糖基化i型跨膜蛋白gpnmb单克隆抗体，其特征在于，其包括重链可变区vh和轻链可变区vl；
2.根据权利要求1所述的抗糖基化i型跨膜蛋白gpnmb单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区vh具有seq id no:1所示的氨基酸序列，或者具有seq id no:9所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的抗糖基化i型跨膜蛋白gpnmb单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区vl具有seq id no:5所示的氨基酸序列，或者具有如seq id no:13所示的氨基酸序列。
4.一种编码权利要求1-...
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