【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种基于crispr/cas13a的abo血型基因型鉴定方法及所用组合物。
技术介绍
1、卡尔-兰德斯坦纳(karl landsteiner)在20世纪初提出的abo血型是人类发现的第一个血液遗传标记系统。abo基因包含7个外显子和1062个碱基对序列，位于9号染色体9q34.1—34.2处，编码一种糖基转移酶(组织血型abo系统转移酶)，可催化碳水化合物向h抗原的转移。abo血型抗原有三种等位形式，即a、b和o。a等位基因和b等位基因的不同之处在于核苷酸的替换，而o等位基因与a等位基因的不同之处在于261位的鸟嘌呤缺失。从遗传学上讲，每个孩子都从父母那里获得三个等位基因中的一个，从而产生六种可能的基因型(aa、ao、bb、bo、oo和ab)和四种可能的表型(a、b、o和ab)。abo血型系统不仅在输血中很重要，而且还与肿瘤、心血管疾病等有关。此外，abo是一种遗传标记，在关联分析和个体识别中发挥着重要作用。
2、基于簇状规则间距短回文重复的诊断(crispr-dx)测定法已在核酸、小分子、蛋白质和其他靶标的应用中彻底改变了诊断方法。crispr-dx系统由crispr相关(cas)蛋白和设计用于特异性识别靶标的引导rna(grna)分子组成。cas9、cas12和cas13是广泛应用于crispr-dx的cas蛋白。cas9依靠由反式激活crispr rna(tracrrna)和crispr rna(crrna)组成的复杂grna，而cas12和cas13只使用单一的crrna。
3、abo血型分型有多种方法。血清学血型鉴定方法在临床实践中主要用作金标准。其中，标准抗a和抗b血清用于鉴定受试者红细胞上的抗原，而标准a和b红细胞则用于鉴定受试者血清中的抗体。血清学分型很简单，但需要可靠的分型抗血清，而且需要抽血，不适合其他来源的样本。随着分子生物学技术的发展，越来越多的技术被用于abo血型分型，包括pcr-限制性片段长度多态性、pcr-单链构象多态性、pcr-扩增产物长度多态性、消耗等位基因特异性引物分析、诱变分离pcr、实时定量pcr、dna芯片和测序。然而，由于电泳、复杂的酶裂解或探针的精密设计等原因，这些检测也可能耗费大量时间，并可能需要专业人员和笨重、精密的仪器。因此，有必要根据a、b和o等位基因之间的单核苷酸多态性(snps)来可靠地确定abo血型基因型。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是如何快速高效的鉴定abo血型基因型。
2、为了解决上述问题，本专利技术提供了用于血型基因分型检测的组合物。
3、本专利技术提供的用于血型基因分型检测的组合物，包含特异于待检测核酸的引物组a和引物组b、特异于待检测核酸的crrna组1和crrna组2、cas13a蛋白和荧光报告探针；所述引物组a由引物abo-6-t7-f1、引物abo-6-r1组成；所述引物组b由引物abo-7-t7-f1、引物abo-7-r1组成；所述crrna组1由crrna-6-261-g2、crrna-6-261-d3组成；所述crrna组2由crrna-7-796-c1、crrna-7-796-a3组成；所述荧光报告探针是一端连有荧光基团，另一端连有淬灭基团的单链rna；
4、所述引物abo-6-t7-f1为如下(b1)或(b2)：
5、(b1)序列表的序列2所示的单链dna分子；
6、(b2)将序列2经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的dna分子；
7、所述引物abo-6-r1为如下(b3)或(b4)：
8、(b3)序列表的序列7所示的单链dna分子；
9、(b4)将序列7经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的dna分子；
10、所述引物abo-7-t7-f1为如下(b5)或(b6)：
11、(b5)序列表的序列19所示的单链dna分子；
12、(b6)将序列19经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列19具有相同功能的dna分子；
13、所述引物abo-7-r1为如下(b7)或(b8)：
14、(b7)序列表的序列27所示的单链dna分子；
15、(b8)将序列27经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列27具有相同功能的dna分子；
16、所述待检测核酸的crrna-6-261-g2为如下(c1)或(c2)：
17、(c1)序列表的序列13所示的单链dna分子；
18、(c2)将序列13经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列13具有相同功能的dna分子；
19、所述待检测核酸的crrna-6-261-d3为如下(c3)或(c4)：
20、(c3)序列表的序列17所示的单链dna分子；
21、(c4)将序列17经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列17具有相同功能的dna分子；
22、所述待检测核酸的crrna-7-796-c1为如下(c5)或(c6)：
23、(c5)序列表的序列35所示的单链dna分子；
24、(c6)将序列35经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列35具有相同功能的dna分子；
25、所述待检测核酸的crrna-7-796-a3为如下(c7)或(c8)：
26、(c7)序列表的序列40所示的单链dna分子；
27、(c8)将序列40经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列40具有相同功能的dna分子；
28、所述荧光报告探针的单链rna的核苷酸序列为序列表中的序列fam-uuuuu-bhq1。
29、上文中，所述组合物还包括进行核酸扩增的试剂。
30、本专利技术还提供了用于血型基因分型检测的试剂盒，所述试剂盒包括前文所述的组合物。
31、在一个具体的实施例中，所述试剂盒的成分包含如下：可只由特异于待检测核酸的crrna、cas13蛋白和荧光报告探针组成；也可含有下述至少一种物质：cas13蛋白、t7 rna聚合酶、rna酶抑制剂、rntp、rna报告探针、向导rna、引物组a和引物组b、cas13a缓冲液。
32、(1)具体地，所述cas13蛋白为lwacas13a蛋白，浓度为5-50pmol/μl，优选10pmol/μl。
33、(2)具体地，所述t7 rna聚合酶浓度为10-100本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于血型基因分型检测的组合物，其特征在于，所述组合物包含特异于待检测核酸的引物组A和引物组B、特异于待检测核酸的crRNA组1和crRNA组2、Cas13a蛋白和荧光报告探针；所述引物组A由引物ABO-6-T7-F1、引物ABO-6-R1组成；所述引物组B由引物ABO-7-T7-F1、引物ABO-7-R1组成；所述crRNA组1由crRNA-6-261-G2、crRNA-6-261-D3组成；所述crRNA组2由crRNA-7-796-C1、crRNA-7-796-A3组成；所述荧光报告探针是一端连有荧光基团，另一端连有淬灭基团的单链RNA；
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述组合物还包括进行核酸扩增的试剂。
3.用于血型基因分型检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的组合物。
4.权利要求1或2所述的组合物在如下任一中的应用：
5.权利要求3所述的试剂盒在如下任一中的应用：
6.权利要求1或2中所述的crRNA组1和crRNA组2。
7.权利要求1或2中所述的引物组A或引
8.一种血型基因分型的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述引物组A和引物组B的含量配比为2:8。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述CRISPR-Cas13a检测体系还包括Cas13a蛋白、Cas13a缓冲液和荧光报告探针。
...【技术特征摘要】
1.用于血型基因分型检测的组合物，其特征在于，所述组合物包含特异于待检测核酸的引物组a和引物组b、特异于待检测核酸的crrna组1和crrna组2、cas13a蛋白和荧光报告探针；所述引物组a由引物abo-6-t7-f1、引物abo-6-r1组成；所述引物组b由引物abo-7-t7-f1、引物abo-7-r1组成；所述crrna组1由crrna-6-261-g2、crrna-6-261-d3组成；所述crrna组2由crrna-7-796-c1、crrna-7-796-a3组成；所述荧光报告探针是一端连有荧光基团，另一端连有淬灭基团的单链rna；
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述组合物还包括进行核酸扩增的试剂。
3.用于血型...
【专利技术属性】
技术研发人员：王升启，魏红娟，荣振，陈红，刘丽艳，王运祥，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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