一种工程改造的盐单胞菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种工程改造的盐单胞菌及其构建方法和应用，所述的盐单胞菌中引入非氧化糖酵解通路(Non‑oxidative glycolysis,NOG)，和/或，所述的盐单胞菌中引入苹果酰辅酶A‑甘油酸(Malyl‑CoA‑glycerate,MCG)通路，优选的，所述的盐单胞菌表达非氧化糖酵解通路的酶，和/或，所述的盐单胞菌表达苹果酰辅酶A‑甘油酸通路的酶。本发明专利技术获得的盐单胞菌增强了葡萄糖分解代谢效率，减少葡萄糖合成变为乙酰辅酶A时释放的二氧化碳，有利于乙酰辅酶A衍生物的高效生产，有效解决了碳原料的浪费和温室气体排放等问题，对于微生物生长及工业微生物产业的发展具有重要的意义和实用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及代谢工程，尤其是一种增强盐单胞菌葡萄糖分解代谢效率的代谢调控策略以及工程改造的盐单胞菌。

技术介绍

1、代谢工程是一门重新连接细胞代谢以增强天然代谢物的产生或赋予细胞产生新产品的能力的科学。代谢工程改造技术的发展使多种化工产品的生产成为可能，包括燃料、化学品、食品、饲料和药品的生产。对微生物的代谢工程改造需要基因编辑技术的发展，以pseva321为载体构建的系列质粒可用于大肠杆菌，嗜盐单胞菌和假单胞菌等微生物的基因过表达，位点特异性重组技术可用于将大片段基因整合到嗜盐单胞菌的基因组中，crispr/aid可用于大肠杆菌和嗜盐单胞菌的基因敲除，自杀质粒可用于大肠杆菌和嗜盐单胞菌以及假单胞菌等微生物的基因插入和敲除。

2、乙酰辅酶a是细胞内的构建单体，多种细胞内的物质都由乙酰辅酶a合成。在乙酰辅酶a的合成中，需由丙酮酸脱去一份子的二氧化碳得到。这一过程中会损失1/3的碳原子，造成了碳原料的浪费和温室气体的排放。在乙酰辅酶a的下游利用上，生物体内大量物质都由乙酰辅酶a合成。如脂肪酸、聚羟基脂肪酸、氨基酸等多种生物分子。

3、本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种工程改造的盐单胞菌(Halomonas)，其特征在于，所述的盐单胞菌中引入非氧化糖酵解通路，和/或，所述的盐单胞菌中引入苹果酰辅酶A-甘油酸通路。

2.根据权利要求1所述的盐单胞菌，其特征在于，所述的盐单胞菌表达非氧化糖酵解通路的酶，和/或，所述的盐单胞菌表达苹果酰辅酶A-甘油酸通路的酶。

3.根据权利要求2所述的盐单胞菌(Halomonas)，其特征在于，所述的非氧化糖酵解通路的酶包括6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、果糖-1,6-二磷酸酶、磷酸酮醇酶、转醛醇酶、转酮醇酶、核酮糖-5-磷酸差向异构酶、核糖-5-磷酸异构酶、磷酸丙糖异构酶或果糖-1,6-二磷酸醛缩酶...

【技术特征摘要】

1.一种工程改造的盐单胞菌(halomonas)，其特征在于，所述的盐单胞菌中引入非氧化糖酵解通路，和/或，所述的盐单胞菌中引入苹果酰辅酶a-甘油酸通路。

2.根据权利要求1所述的盐单胞菌，其特征在于，所述的盐单胞菌表达非氧化糖酵解通路的酶，和/或，所述的盐单胞菌表达苹果酰辅酶a-甘油酸通路的酶。

3.根据权利要求2所述的盐单胞菌(halomonas)，其特征在于，所述的非氧化糖酵解通路的酶包括6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、果糖-1,6-二磷酸酶、磷酸酮醇酶、转醛醇酶、转酮醇酶、核酮糖-5-磷酸差向异构酶、核糖-5-磷酸异构酶、磷酸丙糖异构酶或果糖-1,6-二磷酸醛缩酶中的一种或两种以上。

4.根据权利要求2所述的盐单胞菌(halomonas)，其特征在于，所述的苹果酰辅酶a-甘油酸通路的酶包括磷酸烯醇丙酮酸羧化酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸硫激酶、苹果酰-coa裂解酶、乙醛酸聚醛酶、羟基丙二酸半醛还原酶、甘油酸激酶、烯醇化酶或乙醇酸脱氢酶中的一种或两种以上。

5.根据权利要求2所述的盐单胞菌(halomonas)，其特征在于，所述的盐单胞菌(halomonas)表达6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、果糖-1,6-二磷酸酶和磷酸酮醇酶，和/或，所述的盐单胞菌(halomonas)表达苹果酸硫激酶、苹果酰-coa裂解酶和磷酸烯醇丙酮酸羧化酶。

6.根据权利要求5所述的盐单胞菌(halomonas)，其特征在于，所述的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶来源于埃希氏菌属(escherichia)、明串珠菌属(leuconostoc)或甲基菌属(methylobacillus)中的一种或两种以上；所述的果糖-1,6-二磷酸酶来源于埃希氏菌属(escherichia)、弧菌属(vibrio)或酵母菌属(saccharomyces)中的一种或两种以上；所述的磷酸酮醇酶来源于双歧杆菌属(bifidobacterium)、明串珠菌属(leuconostoc)或梭菌属(clostridium)中的一种或两种以上。

7.根据权利要求5所述的盐单胞菌(halomonas)，其特征在于，所述的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的氨基酸序列包含seq id no：9，所述的果糖-1,6-二磷酸酶的氨基酸序列包含seqid no：8，所述的磷酸酮醇酶的氨基酸序列包含seq id no：7。

8.根据权利要求5所述的盐单胞菌(halomonas)，其特征在于，所述的苹果酸硫激酶来源于甲基球菌属(methylococcus)；所述的苹果酰-coa裂解酶来源于甲基杆菌属(methylobacterium)；所述的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶来源于埃希氏菌属(escherichia)。

9.根据权利要求5所述的盐单胞菌(halomonas)，其特征在于，所述的苹果酸硫激酶的氨基酸序列包含seq id no：10或seq id no：13中的一种或两种，所述的苹果酰-coa裂解酶的氨基酸序列包含seq id no：11，所述的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶的氨基酸序列包括seq idno：12。

10.根据权利要求1所述的盐单胞菌(halomonas)，其特征在于，所述的盐单胞菌包含外源基因，所述的外源基因包括非氧化糖酵解通路的酶的编码基因，和/或，所述的外源基因包括苹果酰辅酶a-甘油酸通路的酶的编码基因；优选的，所述的外源基因包括6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶编码基因、果糖-1,6-二磷酸酶编码基因、磷酸酮醇酶编码基因、转醛醇酶编码基因、转酮醇酶编码基因、核酮糖-5-磷酸差向异构酶编码基因、核糖-5-磷酸异构酶编码基因、磷酸丙糖异构酶编码基因或果糖-1,6-二磷酸醛缩酶编码基因中的一种或两种以上，和/或，所述的外源基因包括磷酸烯醇丙酮酸羧化酶编码基因、苹果酸脱氢酶编码基因、苹果酸硫激酶编码基因、苹果酰-coa裂解酶编码基因、乙醛酸聚醛酶编码基因、羟基丙二酸半醛还原酶编码基因、甘油酸激酶编码基因、烯醇化酶编码基因或乙醇酸脱氢酶编码基因中的一种或两种以上；进一步优选的，所述的外源基因包括6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶编码基因、果糖-1,6-二磷酸酶编码基因和磷酸酮醇酶编码基因，和/或，所述的外源基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈国强，张忠楠，邵明威，张戈，刘絮，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：