酶活性提高的Bst DNA聚合酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术在野生型Bst‑LF的基础上进行一个或多个不同位点的氨基酸突变，得到的Bst DNA聚合酶突变体具有更高的DNA聚合酶活性和/或链置换活性。Bst DNA聚合酶突变体的DNA聚合酶活性最高可提高至216％，链置换活性最高可提高至255％，在本发明专利技术的实施例中，65℃RT‑LAMP最高可提前约15个Ct值。本发明专利技术的DNA聚合酶活性和/或链置换活性提高的Bst DNA聚合酶突变体具有更优秀的应用性能，能满足更快捷、更灵敏的检测需求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术专利涉及一种酶活性提高的bst dna聚合酶突变体及其应用，属于生物。

技术介绍

1、1958年kornberg于从大肠杆菌中发现了dna聚合酶i，随后关于dna聚合酶的研究便如雨后春笋，各种dna聚合酶被从原核生物和真核生物中分离，并进行了详细地表征和应用开发。dna聚合酶具有5’-3’dna聚合酶活性，能在体外快速进行dna扩增，在极短时间内即可获得指数级的扩增产物，因而获得了生物医学界广泛的关注和应用。

2、bst dna聚合酶来源于嗜热土芽孢杆菌(geobacillus stearothermophilus,bst)，能被水解为两个片段，大片段具有5’-3’dna聚合酶活性和链置换活性，也被称为klenow片段；另一个片段则具有5’-3’dna外切酶活性。bst dna聚合酶大片段因其同时具备5’-3’dna聚合酶活性和较强的链置换活性，被广泛应用于恒温扩增实验，比如环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，lamp)、多重链置换扩增(multipledisplacement本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种酶活性提高的Bst DNA聚合酶突变体，其特征在于为如下a1-a4中任一所述的蛋白质：

2.根据权利要求1所述的Bst DNA聚合酶突变体，其特征在于所述突变为D119N、Q128G、R133Y、V281I、L320P、T321A、T323A、S328V、R339C、Q348L、I359L、Y429W、R439C、E461K、K468E或N、T487N、N503S、E552G中任意一种或至少两种的组合。

3.根据权利要求1所述的Bst DNA聚合酶突变体，其特征在于为如下b1-b3中任一所述的蛋白质：

4.根据权利要求1所述的Bst DNA聚合...

【技术特征摘要】

1.一种酶活性提高的bst dna聚合酶突变体，其特征在于为如下a1-a4中任一所述的蛋白质：

2.根据权利要求1所述的bst dna聚合酶突变体，其特征在于所述突变为d119n、q128g、r133y、v281i、l320p、t321a、t323a、s328v、r339c、q348l、i359l、y429w、r439c、e461k、k468e或n、t487n、n503s、e552g中任意一种或至少两种的组合。

3.根据权利要求1所述的bst dna聚合酶突变体，其特征在于为如下b1-b3中任一所述的蛋白质：

4.根据权利要求1所述的bst dna聚合酶突变体，其特征在于为如下c1-c3中任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘想，唐琼卫，朱思思，张增平，余玺玺，
申请(专利权)人：镁孚泰生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：