【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物分析检测，尤其涉及一种托曲珠利在血浆中含量的检测方法。
技术介绍
1、球虫病是由球虫引起的一种常见的寄生虫病，病虫主要感染畜禽的消化道，通过破坏消化系统的生理机能而影响畜禽体内营养物质的吸收，球虫诱导强烈的炎症反应，主要表现为精神萎靡不振，食欲废绝，间歇性腹泻、血便和严重贫血等症状。养殖场中球虫病目前已经得到了有效控制，但是一旦发病仍然会影响整体生产效能。球虫病的防治技术仍然是国内外球虫病的研究重点，药物防治仍然是目前最有效的防治手段。
2、托曲珠利(toltrazuril)一种高效抗球虫药,对球虫的两个无性周期均有作用，它能使球虫细胞内部高尔基体和内质网发生膨胀，破坏细胞内部结构，同时抑制球虫呼吸链酶的活性，破坏线粒体磷酸化的过程，因此球虫生理活动受到影响而死亡。
3、传统托曲珠利在血浆中的检测方法繁琐，实验步骤较多，可操作性差，流动相处理方法不当且配制过程复杂。为了能够合理化托曲珠利临床用药，保证用药安全，托曲珠利在血浆样品中含量检测没有现成的检测和分析方法，这种现状使得该药物没有统一的标准，极大地阻碍了该药物的应用和推广。因此，建立一套有效、稳定的血浆样品含量检测方法是十分有必要的，这为该药临床用药提供参考。
技术实现思路
1、针对上述现有技术中存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种托曲珠利在血浆中含量的检测方法。
2、为了实现上述目的，本专利技术采取如下技术方案：
3、一种托曲珠利在血浆中含量的检测方法，包
4、(1)托曲珠利工作曲线的绘制：用色谱级乙腈配制托曲珠利标准品溶液，超声脱气后，用空白血浆梯度稀释托曲珠利标准品溶液配制成体积均为v0的系列血浆样品，所得血浆样品中托曲珠利的浓度为0.1μg/ml～30μg/ml(优选为0.5μg/ml～30μg/ml)；对血浆样品进行进样前处理，制得系列供试品溶液，经高效液相色谱进样检测后，以托曲珠利峰面积与其浓度绘制托曲珠利工作曲线；
5、所述进样前处理的操作为：向血浆样品中加入色谱级乙腈沉淀血浆蛋白，涡旋混匀，离心后取上清液，氮气吹干上清液，再用v0体积的流动相复溶，0.22μm滤膜过滤；
6、(2)取待测含托曲珠利的血浆样品，按步骤(1)方法进行进样前处理操作后在步骤(1)给定色谱条件下进行高效液相色谱检测；
7、(3)将步骤(2)测得的峰面积代入步骤(1)绘制的托曲珠利工作曲线中，得出待测含托曲珠利的血浆样品中托曲珠利的含量。
8、进一步的，步骤(1)中，所述进样前处理的操作为：向血浆样品中加入色谱级乙腈沉淀血浆蛋白，涡旋混匀15s，10000r/min离心10min后取上清液，在40℃，气流流速10l/min条件下使用水浴氮吹浓缩仪氮气吹干上清液，再用v0体积的流动相复溶，0.22μm滤膜过滤；沉淀血浆蛋白所用乙腈的用量为3v0。v0体积优选为500μl。
9、进一步的，步骤(1)中，系列血浆样品中托曲珠利的浓度分别为0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml。
10、进一步的，步骤(1)中，配制托曲珠利标准品溶液的步骤为：精密称取托曲珠利标准品50mg，置于100ml容量瓶中，定容至刻度线，即得。
11、进一步的，步骤(1)中，进行高效液相色谱检测的条件为：
12、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；进一步的，所采用的高效液相色谱仪的型号为agilent 1260；所采用的色谱柱为agilent zorbax sb-c18 5μm×4.6mm×150mm或agilentzorbax sb-c18 5μm×4.6mm×250mm或agilent zorbax eclipse plus c18 5μm×4.6mm×250mm；
13、流动相：用磷酸调节ph＝3.0的0.01mol/l磷酸二氢钠和乙腈按体积比为(50～60)：(40～50)的混合液；优选为用磷酸调节ph＝3.0的0.01mol/l磷酸二氢钠和乙腈按体积比为60：40的混合液；
14、流速：0.8～1.2ml/min；优选为1.0ml/min；
15、紫外器检测波长：230～250nm；优选为240nm；
16、柱温：25～35℃；优选为30℃；
17、进样体积：5～15μl；优选为10μl。
18、进一步的，步骤(1)中，所述空白血浆来自于家禽，例如鸡。
19、进一步的，步骤(2)中，待测含托曲珠利的血浆样品来自于家禽，例如鸡。
20、上述托曲珠利在血浆中含量的检测方法在检测托曲珠利血浆样品中的应用。本专利技术的优点和有益效果是：
21、本专利技术建立了托曲珠利在血浆中高效液相色谱检测方法，方法简单、准确、重复性好、灵敏度高；适用于托曲珠利血浆样品的日常检测，弥补了托曲珠利在血浆中含量检测方法的空白，为临床给药提供指导作用，降低临床用药风险。
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1.一种托曲珠利在血浆中含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述进样前处理的操作为：向血浆样品中加入色谱级乙腈沉淀血浆蛋白，涡旋混匀15s，10000r/min离心10min后取上清液，在40℃，气流流速10L/min条件下使用水浴氮吹浓缩仪氮气吹干上清液，再用V0体积的流动相复溶，0.22μm滤膜过滤。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，沉淀血浆蛋白所用乙腈的用量为3V0；V0体积优选为500μL。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，进行高效液相色谱检测的条件为：
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，进行高效液相色谱检测的条件为：
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，配制托曲珠利标准品溶液的步骤为：精密称取托曲珠利标准品50mg，置于100mL容量瓶中，定容至刻度线，即得。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，系列血浆
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述空白血浆来自于家禽。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，待测含托曲珠利的血浆样品来自于家禽。
10.权利要求1～9任一所述的托曲珠利在血浆中含量的检测方法在检测托曲珠利血浆样品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种托曲珠利在血浆中含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述进样前处理的操作为：向血浆样品中加入色谱级乙腈沉淀血浆蛋白，涡旋混匀15s，10000r/min离心10min后取上清液，在40℃，气流流速10l/min条件下使用水浴氮吹浓缩仪氮气吹干上清液，再用v0体积的流动相复溶，0.22μm滤膜过滤。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，沉淀血浆蛋白所用乙腈的用量为3v0；v0体积优选为500μl。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，进行高效液相色谱检测的条件为：
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，进行高效液相色...
【专利技术属性】
技术研发人员：张卫元，柳沿村，郑春红，王海坤，程开，向光强，郭建云，
申请(专利权)人：武汉回盛生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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