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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体领域,具体为人源cd25单克隆抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、cd25是il-2受体的α链,与il-2结合后促进cd122(il2rβ)和cd132(il2rγ)的异二聚化,最终形成四聚体(il2rα/β/γ和il-2),并触发jak/stat5、pi3k/akt/和mapk信号通路,在细胞的生长、存活、分化和免疫中起重要作用。
2、cd25在大部分调节性t细胞(tregs)中高表达,是tregs的标志物。treg细胞具有显著免疫抑制作用,既能防御人体发生自身免疫性疾病,又能促使肿瘤细胞发生免疫逃逸,间接加快肿瘤细胞的增殖,treg细胞的耗竭直接促进肿瘤消退,cd25是实现treg耗竭的潜在靶点,可用于开发新的免疫治疗方法。
3、单克隆抗体技术是在1975年由英国科学家milstein和kohler所专利技术的,其原理是:b淋巴细胞能够产生抗体,但在体外不能进行无限分裂;而瘤细胞虽然可以在体外进行无限传代,但不能产生抗体,将这两种细胞融合后得到的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性,单克隆抗体的获得过程包括动物免疫、细胞融合、细胞筛选、克隆化和特征鉴定等,能够识别特定的单一抗原表位,具有高度的特异性。
4、对于人cd25,目前仍缺少能够高效与其结合并适用于流式细胞术等检测的人cd25抗体。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供人源cd25单克隆抗体及其制备方法和应用,以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为
3、本专利技术提供抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段的重链互补决定区cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3的氨基酸序列如seq id no.1所示,轻链互补决定区cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3的氨基酸序列如seq id no.2所示。
4、以上所述的抗体或其抗原结合片段能够特异性地识别并结合人源cd25蛋白和表达人源cd25蛋白的细胞(cd25+细胞),具有较高的亲和力。
5、优选地,所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示或与如seq id no.3所示的氨基酸序列具有至少80%的相似性,轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.4所示或与如seq id no.4所示的氨基酸序列具有至少80%的相似性。
6、在本专利技术的一些实施方式中,所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示,轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.4所示。
7、在具有以上所述的重链互补决定区cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3和轻链互补决定区cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3的情况下,重链可变区的氨基酸序列为与如seq id no.3所示的氨基酸序列具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.5%的序列相似性的氨基酸序列,且轻链可变区的氨基酸序列为与如seq idno.4所示的氨基酸序列具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.5%的序列相似性的氨基酸序列对应的抗体或其抗原结合片段也在本专利技术的保护范围内。
8、以上所述的抗体或其抗原结合片段为选自单克隆抗体、fab、fab'、f(ab')2、fd、fv、dab、互补决定区片段、单链抗体中的任意一种。
9、其中,单克隆抗体包括动物源抗体(例如鼠源抗体)、嵌合抗体或人源化抗体等。
10、本专利技术提供包含以上所述的抗体或其抗原结合片段的双特异性抗体或多特异性抗体。
11、本专利技术提供一种核酸分子,所述核酸分子编码以上所述的抗体或其抗原结合片段。
12、根据以上所述的抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列和密码子规则,本领域技术人员能够获得编码上述抗体或其抗原结合片段的核酸分子的核苷酸序列。由于密码子的简并性,编码上述抗体或其抗原结合片段的核酸分子的核苷酸序列并不唯一,所有能够编码产生上述抗体或其抗原结合片段的核酸分子均在本专利技术的保护范围内。
13、本专利技术提供包含以上所述的核酸分子的生物材料,所述生物材料为表达盒、载体或宿主细胞。
14、以上所述的核酸分子与启动子、终止子等调控元件可操作性地连接可得到所述表达盒。
15、以上所述的载体包括但不限于质粒载体、病毒载体等。
16、以上所述的宿主细胞包括微生物细胞或动物细胞。其中微生物细胞包括但不限于大肠杆菌、酵母等,动物细胞包括但不限于cho细胞、293t细胞等。
17、本专利技术提供一种抗体偶联物,其为将以上所述的抗体或其抗原结合片段或所述双特异性抗体或多特异性抗体与标记物或蛋白偶联得到。
18、优选地,所述标记物选自化学发光染料标记、酶标记、生物素标记、荧光染料标记、胶体金标记、放射性标记中的一种或多种。
19、本专利技术提供的抗体或其抗原结合片段可采用本领域常规方法制备得到,包括:化学合成、宿主表达等。
20、本专利技术提供以上所述的抗体或其抗原结合片段的制备方法,所述方法包括:培养能够表达所述抗体或其抗原结合片段的宿主细胞,经分离得到所述抗体或其抗原结合片段。
21、本专利技术提供以上所述的抗体或其抗原结合片段或所述双特异性抗体或多特异性抗体或所述核酸分子或所述生物材料或所述抗体偶联物的以下任一种应用:
22、(1)在制备用于检测人源cd25蛋白或表达人源cd25蛋白的细胞在样品中的存在或其水平的产品中的应用;
23、(2)在检测人源cd25蛋白在样品中的存在或其水平中的应用;
24、(3)在检测表达人源cd25蛋白的细胞在样品中的存在或其水平中的应用;
25、上述(1)中,所述产品可为检测试剂或试剂盒。
26、上述(1)、(2)、(3)中,所述样品可以是来自有生命的人或动物的样品(包括血液等),也可以是体外培养的细胞或细胞培养液等并非来自有生命的人或动物的样品。
27、对于上述(2)、(3),优选为非疾病诊断和治疗目的检测。
28、上述(1)、(2)、(3)所述应用中,利用本专利技术提供的抗体或其抗原结合片段进行检测的方法优选为流式细胞术。
29、本专利技术提供一种产品,所述产品包含以上所述的抗体或其抗原结合片段,或包含所述双特异性抗体或多特异性抗体,或包含所述抗体偶联物;所述产品为检测试剂或药物组合物。
30、本专利技术的有益效果在于:本专利技术提供的人源cd25抗体能够特异地识别并结合人源cd25蛋白和cd25+细胞,具有本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或其抗原结合片段的重链互补决定区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述抗体或其抗原结合片段的轻链互补决定区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示或与如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列具有至少80%的相似性,轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示或与如SEQ IDNO.4所示的氨基酸序列具有至少80%的相似性。
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或其抗原结合片段为选自单克隆抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体中的任意一种。
4.包含权利要求1~3任一项所述的抗体或其抗原结合片段的双特异性抗体或多特异性抗体。
5.核酸分子,其特征在于,所述核酸分子编码权利要求1~3任
6.生物材料,其特征在于,所述生物材料包含权利要求5所述的核酸分子,所述生物材料为表达盒、载体或宿主细胞。
7.抗体偶联物,其特征在于,其为将权利要求1~3任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求4所述的双特异性抗体或多特异性抗体与标记物或蛋白偶联得到,所述标记物选自化学发光染料标记、酶标记、生物素标记、荧光染料标记、胶体金标记、放射性标记中的一种或多种。
8.权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段的制备方法,其特征在于,所述方法包括:培养能够表达所述抗体或其抗原结合片段的宿主细胞,经分离得到所述抗体或其抗原结合片段。
9.权利要求1~3任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求4所述的双特异性抗体或多特异性抗体或权利要求5所述的核酸分子或权利要求6所述的生物材料或权利要求7所述的抗体偶联物的以下任一种应用:
10.一种产品,其特征在于,所述产品包含权利要求1~3任一项所述的抗体或其抗原结合片段,或包含权利要求4所述的双特异性抗体或多特异性抗体,或包含权利要求7所述的抗体偶联物,所述产品为检测试剂或药物组合物。
...【技术特征摘要】
1.抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或其抗原结合片段的重链互补决定区cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3的氨基酸序列如seq id no.1所示,所述抗体或其抗原结合片段的轻链互补决定区cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3的氨基酸序列如seq id no.2所示。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示或与如seq id no.3所示的氨基酸序列具有至少80%的相似性,轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.4所示或与如seq idno.4所示的氨基酸序列具有至少80%的相似性。
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或其抗原结合片段为选自单克隆抗体、fab、fab'、f(ab')2、fd、fv、dab、互补决定区片段、单链抗体中的任意一种。
4.包含权利要求1~3任一项所述的抗体或其抗原结合片段的双特异性抗体或多特异性抗体。
5.核酸分子,其特征在于,所述核酸分子编码权利要求1~3任一项所述的抗体或其...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘鸿君,王倩,刘勇,李忠鹏,王福润,卢南南,
申请(专利权)人:汇智和源生物技术苏州有限公司,
类型:发明
国别省市:
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