一种用于合成5-羟基-L-高亮氨酸的Fe(II)/α-KG双加氧酶突变体及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于合成5‑羟基‑L‑高亮氨酸的Fe(II)/α‑KG双加氧酶突变体及应用，属于生物工程技术领域。本发明专利技术通过理性蛋白质工程对BlAH的蛋白质结构进行改造，克服了野生型BlAH对L‑高亮氨酸C4的高催化活性，成功实现利用突变体酶进行5‑羟基‑L‑高亮氨酸的生物合成，其中该突变体催化活性是野生型的27倍。以100mM L‑高亮氨酸为底物规模化制备5‑羟基‑L‑高亮氨酸，对应产物摩尔浓度为97.6mM，产物转化率为97.6％，为基于天然氨基酸底物合成多样化的非天然氨基酸提供新的合成方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于合成5-羟基-l-高亮氨酸的fe(ii)/α-kg双加氧酶突变体及应用，属于生物工程。

技术介绍

1、氨基酸是一类重要的有机小分子，是制药工业中珍贵的基石。如利用非天然氨基酸l-高亮氨酸合成的谷氨酰胺拮抗剂6-重氮-5-氧代-l-正亮氨酸具有抗癌活性。鉴于氨基酸分子的重要性，亟待开发简单高效的方法合成新的氨基酸分子，扩充自然界中的氨基酸分子库，为新药开发、新物质合成提供构建砌块。

2、l-高亮氨酸中存在活泼的氨基和羧基基团，以及侧链多个化学性质相似的c-h键，使得其侧链c-h键的羟基化反应难以发生。由于氨基酸中氨基和羧基的保护和脱保护，以及侧链多个c-h键的位点选择性问题，至今未有相关的化学合成方法进行羟基高亮氨酸的合成。

3、fe(ii)/α-kg双加氧酶(2og-fe(ii)oxygenase)是一类以分子氧和亚铁离子为催化辅因子，对氨基酸c-h键进行功能化的多功能酶，被认为是氨基酸不对称催化的重要催化剂之一。目前，在羟基-l-高亮氨酸的合成中，仅christian r.zwick在2018年报道了一种fe本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于合成5-羟基-L-高亮氨酸的Fe(II)/α-KG双加氧酶突变体，其特征在于，所述突变体将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的Fe(II)/α-KG双加氧酶(BlAH)的第237位和第67位的氨基酸中的至少一个进行突变。

2.编码权利要求1所述突变体的基因。

3.携带权利要求1所述突变体或权利要求2所述基因的重组质粒。

4.携带权利要求2所述基因或权利要求3所述重组质粒的微生物细胞。

5.根据权利要求4所述的微生物细胞，其特征在于，以细菌或真菌为宿主。

6.一种催化剂，其特征在于，含有权利要求1所述突变体，或，权...

【技术特征摘要】

1.一种用于合成5-羟基-l-高亮氨酸的fe(ii)/α-kg双加氧酶突变体，其特征在于，所述突变体将氨基酸序列如seq id no.1所示的fe(ii)/α-kg双加氧酶(blah)的第237位和第67位的氨基酸中的至少一个进行突变。

2.编码权利要求1所述突变体的基因。

3.携带权利要求1所述突变体或权利要求2所述基因的重组质粒。

4.携带权利要求2所述基因或权利要求3所述重组质粒的微生物细胞。

5.根据权利要求4所述的微生物细胞，其特征在于，以细菌或真菌为宿主。

6.一种催化剂，其特征在于，含有权利要求1所述突变体，或，权利要求3或4所述微生物细胞。

7.一种合成5-羟基-l-高亮氨酸的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘立明，郑晨妮，魏婉清，宋伟，吴静，刘佳，陈修来，高聪，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：