一种分离毛白杨胚珠及珠心的方法技术

本发明专利技术公开了一种分离毛白杨胚珠及珠心的方法，采用将毛白杨的雌花摘下放在胶块上，在解剖镜下将雌花的苞片、花盘分别除去，然后沿子房侧壁上的背缝线将子房纵向剖开，即可将珠柄和胚珠从心皮上分离下来；分离珠心时，可将分离出的珠柄和胚珠仍放在胶块上，从胚珠与珠柄的交界处，向上将胚珠的珠被纵向划开，并由下至上挑开、掀起，重复操作划开、挑开、掀起珠被的步骤，就可以逐步暴露出珠心，最后在珠心与珠被的连接处割断，即可将珠心从珠被上完全分离下来。本方法既可避免酶法分离对植物材料的培养性能和发育性能的影响，又可减小因非酶法分离带来的损伤，极好的维持了待分离材料的原有形态。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种分离毛白杨胚珠的方法，同时还涉及一种分离毛白杨珠心的方法，属于植物显微观察

技术介绍
毛白杨的胚珠微小，手工分离其胚珠及珠心比较困难，采用非酶解技术分离出的 珠心很难维持其原有形态。目前，多是借助于纤维素酶和果胶酶等的酶解技术，完成植物珠 心、胚囊、卵细胞和合子等微小结构的人工分离(周嫦等1982年发表的论文被子植物胚囊 酶法分离的研究固定材料的分离技术与显微观察、杨弘远等1998年发表的论文被子植 物离体受精与合子培养研究进展)。由于胚囊和合子经酶处理后，可能对其存活、发育及 人工培养等产生不良的影响，杨弘远等学者提出应在卵细胞等的分离过程中减少酶的影响 (杨弘远等1998年发表的论文被子植物离体受精与合子培养研究进展、何玉池等2004年发表的论文烟草合子离体培养再生可育植株)。因此，研究操作简单的分离珠心等微小 结构的新方法仍具有比较重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种分离毛白杨胚珠的方法，不仅可以维持分离结构的完 整性，而且可以避免酶法分离过程中酶对细胞结构的影响等问题。 本专利技术的目的还在于提供一种分离毛白杨珠心的方法，不仅可以维持分离结构的 完整性，而且可以避免酶法分离过程中酶对细胞结构的影响等问题。 为了实现上述目的，本专利技术的技术方案采用了一种分离毛白杨胚珠的方法，包括 将毛白杨的雌花从雌花序上摘下，放在胶块上；在解剖镜下，将雌花的苞片、花盘分别除去， 然后沿子房侧壁上的背缝线将子房纵向剖开，可看到子房室内着生在心皮上的胚珠，将珠 柄和胚珠从心皮上分离下来即可。 所述的胶块是口香糖去除糖分后形成的胶块，也可以使用泡泡糖、口香糖胶基等能达到分离所需的粘度、且方便固定分离材料的胶性材料均可。 本专利技术的技术方案还采用了一种分离毛白杨珠心的方法，包括以下步骤 毛白杨胚珠的分离将毛白杨的雌花从雌花序上摘下，分离出胚珠及珠柄； 毛白杨珠心的分离将分离出的珠柄和胚珠放在胶块上，并使珠柄粘在胶块上；在胚珠与珠柄的交界处，向上将胚珠的珠被轻轻地纵向划开，然后在割缝处将珠被由下至上轻轻挑开、掀起，逐步暴露出胚珠内的珠心；最后在珠心与珠被的连接处割断，即可将珠心从珠被上完全分离出来。 所述的胶块是口香糖去除糖分后形成的胶块，也可以使用泡泡糖、口香糖胶基等 能达到分离所需的粘度、且方便固定分离材料的胶性材料均可。 在毛白杨雌花(如图l所示)中，雌蕊由2个心皮构成，在其子房的左、右侧壁上 各有一条纵向的凹沟，即为背缝线。在分离毛白杨胚珠时，可用解剖针(或镊子的一个尖头)沿着子房侧壁上的一条背缝线将子房纵向剖开，把剖开的子房壁掀开并将其粘在胶块 上(如图2所示)；也可以分别沿着子房左、右侧壁上的两条背缝线将子房纵向剖开，并将 剖开的两片子房壁由上至下掀开(或进一步将其外壁粘在胶块上)(如图3所示)，即可观 察到胚珠与心皮的位置和着生关系。子房室内一般有两个胚珠着生，偶而也会出现三个胚 珠，三个胚珠等大或其中一个胚珠体积很小，等大的三个胚珠与正常的胚珠无形态上的差异(如图4所示)，三个胚珠不等大时，体积较小的胚珠的珠柄细长，可能是退化的不育胚 珠(如图5所示)。分离出的胚珠经染色、透明后可观察到珠心与珠被之间存在着狭窄的 间隙(如图6所示)，如果将染色后的胚珠在透明液中浸泡过夜，可使珠心强烈收縮，珠心与 珠被之间的间隙以及珠孔道均显著增大(如图7所示)，倒生胚珠的特征十分明显，这为珠 心的手工分离提供了依据，需要注意的是用于珠心分离的胚珠应是新分离出的未经染色的 胚珠。本专利技术方法分离出的胚珠可以清楚的观察到经水培的雌花中绒毛的着生位置，对开 花后的雌枝水培数天，即可在子房室内看到珠柄的表面生出细长而密集的绒毛(如图8所 示)，将胚珠和珠柄从心皮上分离出来后，可以发现细长的绒毛是由珠柄的表面生出(如图 9所示)。 本专利技术的优势在于本专利技术方法既可避免酶法分离对植物材料的培养性能和发育 性能的影响，又可减小非酶法分离带来的损伤，极好的维持了待分离材料的原有形态；利用 胶块辅助分离，可替代手的部分操作，能缓冲用力、灵巧施力，减轻手和脑的操作压力；无需 使用倒置显微镜等特殊仪器，即使在实验设施较差的实验室内也能完成，而且能够应用整 体染色与透明技术对珠心内的胚囊结构进行观察，或者将所分离出的珠心进一步地用于胚 囊等微小结构的分离。附图说明 图1为毛白杨雌花的结构示意图； 图2为着生在心皮上的胚珠的结构示意图，沿着一条背缝线将子房纵向剖开； 图3为着生在心皮上的胚珠的结构示意图，沿着二条背缝线将子房纵向剖开； 图4为子房室内有三个胚珠着生情况的示意图； 图5为子房室内有三个胚珠着生情况的示意图，胚珠已染色； 图6为仅经常规染色和短时间透明的胚珠的结构示意图； 图7为经过夜透明的胚珠的结构示意图； 图8为子房室内绒毛的着生情况示意图； 图9为着生在株柄上的绒毛的示意图； 图10为连着珠被的珠心的结构示意图； 图11为珠心的结构示意图，其中①为胚囊中的次生核，②为胚囊中的卵细胞。具体实施方式 实施例1 本实施例分离毛白杨胚珠的方法包括以下步骤 胶块的制备取2块口香糖放入温水中揉搓、浸洗多次，以充分洗去口香糖中的糖 分等物质，将洗好的胶块揉成团，粘放在解剖镜的视野中央备用； 毛白杨胚珠的分离将毛白杨的雌花从雌花序上摘下，粘放在胶块上，在解剖镜下 将雌花的苞片和斜杯状的花盘除去，沿着一条背缝线将子房壁纵向剖开，然后掀开并将其 外壁粘在胶块上，可见子房室内有两个胚珠着生(如图2所示)，胚珠下的珠柄长而粗壮，将 珠柄和胚珠从心皮上分离下来即可。 实施例2 本实施例分离毛白杨胚珠的方法包括以下步骤 胶块的制备取3块口香糖放入温水中揉搓、浸洗多次，以充分洗去口香糖中的糖 分等物质，将洗好的胶块揉成团，粘放在解剖镜的视野中央备用； 毛白杨胚珠的分离将毛白杨的雌花从雌花序上摘下，粘放在胶块上，在解剖镜下 将雌花的苞片和斜杯状的花盘除去，沿着两条背缝线将子房纵向剖开，并将两片子房壁掀 开粘在胶块上，便观察到每个胚珠下的珠柄分别着生于两个心皮的基部(如图3所示)，每 个珠柄的一侧游离，一侧与心皮贴生，将珠柄和胚珠从心皮上分离下来即可。 实施例3 本实施例分离毛白杨珠心的方法包括以下步骤 采用常规分离方法分离毛白杨胚珠； 对分离出的胚珠采用稀释的代氏苏木精进行染色，并在体积比为1 : l的无水乙 醇和二甲苯的混合液中进行透明，在凹玻片上制片后观察，以了解胚珠的结构特征(如图6 所示)； 然后将新分离的胚珠及珠柄粘放在上胶块，固定后，在胚珠与珠柄的交界处，用解剖针向上将胚珠的珠被轻轻地纵向划开，再在其附近按照同样的方法选择一至数处由下至上将胚珠的珠被轻轻划开，用解剖针将两个割缝之间的珠被由下至上轻轻挑开、掀起，将掀起的珠被外壁粘在胶块上，就可以逐步暴露出胚珠内的珠心，最后在珠心下部用解剖针将珠心与珠被的连接处(即合点处)割断，就可以将珠心从珠被上完全分离下来。 实施例4 本实施例分离毛白杨珠心的方法包括以下步骤 步骤(1)和步骤(2)的方法同实施例1的方法； 对分离出的胚珠采用稀释的代氏苏木精进行染色，染色后，将其转移到凹玻片上， 经过体积比为IO : l的无水乙醇和二甲苯的混合液透本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离毛白杨胚珠的方法，其特征在于：所述方法包括将毛白杨的雌花从雌花序上摘下，放在胶块上；在解剖镜下，将雌花的苞片、花盘分别除去，然后沿子房侧壁上的背缝线将子房纵向剖开，可看到子房室内着生在心皮上的胚珠，将珠柄和胚珠从心皮上分离下来即可。

【技术特征摘要】
一种分离毛白杨胚珠的方法，其特征在于所述方法包括将毛白杨的雌花从雌花序上摘下，放在胶块上；在解剖镜下，将雌花的苞片、花盘分别除去，然后沿子房侧壁上的背缝线将子房纵向剖开，可看到子房室内着生在心皮上的胚珠，将珠柄和胚珠从心皮上分离下来即可。2. 根据权利要求1所述的一种分离毛白杨胚珠的方法，其特征在于所述的胶块是口 香糖去除糖分后形成的胶块。3. —种分离毛白杨珠心的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤 (1) 毛白杨胚...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪亚平，张亚冰，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]