一种提纯柑橘果肉有色体的方法技术

本发明专利技术属于植物生化领域。具体涉及应用密度梯度离心提纯柑橘果肉有色体的方法。步骤是：１）将甜橙果实加缓冲液Ａ榨汁，过滤；滤液离心，取上清，离心，得沉淀；用缓冲液Ａ稀释，得样品；２）取离心管，用灭菌牛血清涂匀内壁；用缓冲液Ａ将３０％的缓冲液Ｂ稀释为梯度液，取样品Ⅰ加到密度梯度上面，离心；富集重量体积比为１５％有色体层，将沉淀稀释，离心得沉淀，沉淀用缓冲液Ａ稀释，得样品Ⅱ；３）取离心管，用灭菌牛血清涂匀内壁；用缓冲液Ａ将３０％的缓冲液Ｂ稀释成梯度稀释液；取样品Ⅱ加到梯度上面，离心，富集７．５％的有色体层，稀释，离心，去上清并将沉淀稀释，离心，得样品Ⅲ；４）取样品Ⅲ，重复３）；将７．５％有色体沉淀，稀释，离心，得柑橘果肉有色体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物生物化学
，具体涉及一种应用密度梯度离心技术提纯柑 橘果肉有色体的方法。
技术介绍
质体是仅存在于植物和藻类细胞中的主要细胞器。质体参与光合作用，贮藏各种 各样的产物，以及合成植物细胞基本构架及功能所需的关键分子。和线粒体一样，质体由一 对同心膜组成的被膜包被。质体在半自主性上也与线粒体类似，具有合成一些自身蛋白所 需的遗传机制。质体具有显著的分化、去分化及再分化的能力。质体包括前质体，叶绿体， 白色体，有色体，造粉体。质体是植物特有的细胞器，在生物合成及代谢功能中起着重要作 用，其中包括光合作用的C固定、氨基酸、脂酸、淀粉以及次生代谢物的合成。有色体是一种 特殊的质体，因为它是来自于果实成熟或花粉发育中的叶绿体。有色体的主要功能是类胡 萝卜素合成和贮藏，使果实和花粉呈现各种色彩。叶绿体向有色体的转变总是伴随着叶绿 体的类囊体膜的降解。有色体类胡萝卜素的生化特性在不同植物中有相当大的区别虽然质 体有着重要生物学意义，但我们对质体的了解却是相当有限。因此，为了更好的研究柑橘有 色体，第一要务是分离提纯有色体。梯度离心是质体提纯主要，有效，且节省的方法。一个理想本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提纯柑橘果肉有色体的方法，其特征在于，用海碘醇配成的溶液为梯度液，进行三次密度梯度离心，得到提纯的有色体；　　其步骤包括：　　（１）取甜橙果实，剥皮并去掉种子，将果肉切成块状，称重８０克样品，加入３００ｍｌ缓冲液Ａ，用榨汁机榨汁８－１０秒，将得到的果肉混合样品通过两层米拉滤布过滤，得到滤液；将滤液倒入离心管中，用离心机以４００ｇ离心５ｍｉｎ，去沉渣后，得到上清液；将上清液用离心机的水平转头以６０００ｇ，离心１０ｍｉｎ，得到沉淀；将富集的沉淀加入１２ｍｌ缓冲液Ａ稀释，得到待用的样品Ⅰ，待用；　　（２）取１０ｍｌ的离心管，用灭菌过的牛血清将内壁涂匀；用缓冲液Ａ将重量体积比为３０％的缓冲液Ｂ分别...

【技术特征摘要】
一种提纯柑橘果肉有色体的方法，其特征在于，用海碘醇配成的溶液为梯度液，进行三次密度梯度离心，得到提纯的有色体；其步骤包括(1)取甜橙果实，剥皮并去掉种子，将果肉切成块状，称重80克样品，加入300ml缓冲液A，用榨汁机榨汁8 10秒，将得到的果肉混合样品通过两层米拉滤布过滤，得到滤液；将滤液倒入离心管中，用离心机以400g离心5min，去沉渣后，得到上清液；将上清液用离心机的水平转头以6000g，离心10min，得到沉淀；将富集的沉淀加入12ml缓冲液A稀释，得到待用的样品Ⅰ，待用；(2)取10ml的离心管，用灭菌过的牛血清将内壁涂匀；用缓冲液A将重量体积比为30％的缓冲液B分别稀释成重量/体积为24％，20％，15％的梯度稀释液，体积分别为1.5ml、2.0ml、2.2ml、2.0ml配制成不连续密度梯度，取步骤(1)待用的样品2ml加到密度梯度上面；用离心机在水平转头下以6750g，离心45min；吸取第一层即重量体积比为15％的有色体层，并将沉淀稀释10倍，用离心机角转头以6000g离心7min得到沉淀，并将沉淀用2ml缓冲液A稀释，得到待用样品Ⅱ，待用；(3)取10ml的离心管，用灭菌过的牛血清将内壁涂匀；用缓冲液A将重量体积比为30％的缓冲液B分别稀释成重量/体积为12...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓秀新，曾云流，潘志勇，徐强，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]