【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，更具体的，涉及一种沙门菌鞭毛蛋白fimh的制备方法及其在elisa检测中的应用。
技术介绍
1、沙门菌ⅰ型菌毛粘附素fimh是先天抗菌反应的有效诱导剂，通过粘膜表面的toll样受体-4(toll-like receptors-4，tlr4)发出不同的信号，参与先天免疫应答的多个过程，还具有粘膜佐剂的能力。fimh是联系宿主抵抗沙门菌先天免疫和适应性免疫的重要因子。所以制备并纯化出fimh蛋白用于沙门菌的检测以及后续沙门菌疫苗制备具有重要意义，但是现有技术还没有纯化出fimh蛋白用于沙门菌的检测以及后续沙门菌疫苗制备。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术中存在的上述问题，提供一种沙门菌鞭毛蛋白fimh的制备方法。
2、本专利技术的第二个目的是提供上述一种沙门菌鞭毛蛋白fimh的应用。
3、本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
4、一种沙门菌鞭毛蛋白fimh的制备方法，包括以下步骤：
5、s1、构建重组阳性转化子：以鸡白痢沙门菌s.p 376的全基因组为模板扩增目的基因fimh，将目的基因fimh与质粒载体重组，后转化筛选得到重组阳性转化子；
6、s2、目的蛋白的表达和纯化：将重组阳性转化子菌株培养进行诱导表达，诱导后的菌体沉淀重悬至含有8m尿素的缓冲液中，经破碎、过滤后纯化；
7、s3、透析复性：将纯化后的蛋白分别在含有6m，4m，2m，1m，0m的透析液的透析袋中
8、由于用原核系统表达出的fimh蛋白是属于包涵体蛋白。一开始用实验室传统的可溶性蛋白的处理方法未能成功表达纯化。后来根据包涵体蛋白的特性进行了多次纯化条件的摸索以及透析复性条件的摸索。在纯化表达透析过程中进行了一下条件的探索，摸索得到上述条件。使得蛋白浓度由20μg/ml增加至386μg/ml。
9、本专利技术还提供上述沙门菌鞭毛蛋白fimh在制备检测沙门菌的试剂中的应用。优选的，所述试剂为elisa检测试剂。
10、更优选的，将获得的蛋白作为elisa检测板的包被抗原，从而用于沙门菌的检测。
11、本专利技术还提供所述沙门菌鞭毛蛋白fimh在制备高免血清中的应用。
12、具体的，是将沙门菌鞭毛蛋白fimh进行免疫接种动物，免疫操作为：第0天注射100ug纯化后的fimh蛋白以及等体积的完全弗氏佐剂；随后第5天，第10天，第15天以同样的方式接种100ug纯化后的fimh蛋白以及等体积的不完全弗氏佐剂。
13、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
14、本专利技术公开了一种沙门菌鞭毛蛋白fimh的制备及其在elisa检测中的应用，本fimh蛋白是沙门菌的鞭毛，通过原核表达系统大肠杆菌bl21(de3)进行表达，接着按照不可溶蛋白的处理方法进行亲和层析纯化，变性，再复性；并对所制备的蛋白用bradford试剂盒进行浓度的测定。最后将获得的蛋白作为elisa检测板的包被抗原。本专利技术中蛋白的制备方法简单，成本低，容易大批量制备，可应用于elisa检测方法中，应用前景好。
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1.一种沙门菌鞭毛蛋白FimH的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.权利要求1所述沙门菌鞭毛蛋白FimH在制备检测沙门菌的试剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂为ELISA检测试剂。
4.权利要求1所述沙门菌鞭毛蛋白FimH在制备高免血清中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，是将沙门菌鞭毛蛋白FimH进行免疫接种动物，免疫操作为：第0天注射100ug纯化后的FimH蛋白以及等体积的完全弗氏佐剂；随后第5天，第10天，第15天以同样的方式接种100ug纯化后的FimH蛋白以及等体积的不完全弗氏佐剂。
【技术特征摘要】
1.一种沙门菌鞭毛蛋白fimh的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.权利要求1所述沙门菌鞭毛蛋白fimh在制备检测沙门菌的试剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂为elisa检测试剂。
4.权利要求1所述沙门菌鞭毛蛋白fimh在制备...
【专利技术属性】
技术研发人员：于洋，郑媚，贺骞，任昊，孙坚，廖晓萍，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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