【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开提供了fcrγ链表达缺陷的工程化自然杀伤(nk)细胞(g-nk细胞)，并且还包括重组嵌合抗原受体(car)及其组合物。本公开还提供了含有工程化nk细胞的组合物以及制造和使用工程化nk细胞的方法。
技术介绍
1、人们已经频繁将基于抗体的疗法用于治疗癌症和其他疾病。对抗体疗法的响应通常集中于这些抗体对肿瘤细胞的直接抑制作用(例如，抑制生长因子受体以及随后诱导细胞凋亡)，但是这些抗体的体内作用可能更复杂，并且可能涉及宿主免疫系统。自然杀伤(nk)细胞是免疫效应细胞，当fc受体(cd16；fcγriii)结合至与携带抗原的细胞结合的抗体的fc部分时，该免疫效应细胞介导抗体依赖性细胞毒性。nk细胞，包括其特定的特化亚群，可用于治疗方法，包括用于改善对抗体疗法的响应。对于涉及nk细胞的治疗用途，需要改进的方法。本文提供了满足此类需要的实施方案。
技术实现思路
1、本文描述了fcrγ链表达缺陷的工程化自然杀伤(nk)细胞(g-nk细胞)，并且还包括重组嵌合抗原受体(car)及其组合物。本文还描述了含有工程化nk细胞的组合物以及制造和使用工程化nk细胞的方法。
2、在一些方面，本文提供了fcrγ链表达缺陷的工程化自然杀伤(nk)细胞(g-nk细胞)，并且该nk细胞包含编码嵌合抗原受体(car)的异源核酸。
3、在一些方面，本文提供了fcrγ链表达缺陷的工程化自然杀伤(nk)细胞(g-nk细胞)，并且该nk细胞包含编码免疫调节剂的异源核酸。
4、在一些方面，
5、在一些实施方案中，car包括1)抗原结合结构域；2)柔性连接子；3)跨膜区域；和4)胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，抗原结合结构域靶向肿瘤抗原。在一些实施方案中，抗原结合结构域为单链可变片段(scfv)。在一些实施方案中，胞内信号传导结构域包括主要信号传导结构域和共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，胞内信号传导结构域包括cd3ζ、dap10、dap12、cd28、4-1bb或ox40中的一个或多个信号传导结构域。在一些实施方案中，胞内信号传导结构域包括cd3ζ、dap10、dap12、cd28、4-1bb或ox40中的两个或更多个信号传导结构域。在一些实施方案中，胞内信号传导结构域包括含有cd3ζ信号传导结构域的主要信号传导结构域以及共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，共刺激信号传导结构域是cd28或4-1bb信号传导结构域。
6、在一些实施方案中，编码car的异源核酸被稳定整合到细胞的基因组中。在一些实施方案中，编码car的异源核酸被瞬时表达。
7、在一些实施方案中，免疫调节剂是免疫抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节剂是免疫激活剂。在一些实施方案中，免疫调节剂是细胞因子。在一些实施方案中，细胞因子可从工程化nk细胞分泌。在一些实施方案中，可分泌细胞因子是il-2或其生物部分；il-15或其生物部分；或il-21或其生物部分；或它们的组合。在其他实施方案中，细胞因子是膜结合的。在一些实施方案中，膜结合细胞因子是膜结合il-2(mbil-2)；膜结合il-15(mbil-15)；膜结合il-21(mbil-21)；或它们的组合
8、在一些实施方案中，编码免疫调节剂的异源核酸被稳定整合到细胞的基因组中。在一些实施方案中，编码免疫调节剂的异源核酸被瞬时表达。
9、在一些实施方案中，g-nk细胞具有cd16阳性/cd57阳性/cd7微弱/阴性/cd161阴性的表面表型。在一些实施方案中，g-nk细胞还具有nkg2a阴性/cd161阴性的表面表型。在一些实施方案中，g-nk细胞还为cd38阴性。在一些实施方案中，g-nk细胞具有进一步为cd45阳性/cd3阴性/cd56阳性的表面表型。在一些实施方案中，g-nk细胞包括cd16 158v/v(v158)。在一些实施方案中，g-nk细胞为cd16 158v/f。
10、在一些实施方案中，存在包括多种来自上述实施方案中的任一个实施方案的工程化g-nk细胞的组合物。
11、在一些实施方案中，组合物中大于50％或大于约50％的nk细胞或总细胞是g-nk细胞。在一些实施方案中，组合物中大于60％或大于约60％的nk细胞或总细胞是g-nk细胞。在一些实施方案中，组合物中大于70％或大于约70％的nk细胞或总细胞是g-nk细胞。在一些实施方案中，组合物中大于80％或大于约80％的nk细胞或总细胞是g-nk细胞。在一些实施方案中，组合物中大于90％或大于约90％的nk细胞或总细胞是g-nk细胞。在一些实施方案中，组合物中大于95％或大于约95％的nk细胞或总细胞是g-nk细胞。
12、在一些实施方案中，该多种工程化g-nk细胞包括大于20％或大于约20％的包含编码car的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，该多种工程化g-nk细胞包括大于30％或大于约30％的包含编码car的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，该多种工程化g-nk细胞包括大于40％或大于约40％的包含编码car的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，该多种工程化g-nk细胞包括大于50％或大于约50％的包含编码car的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，该多种工程化g-nk细胞包括大于60％或大于约60％的包含编码car的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，该多种工程化g-nk细胞包括大于70％或大于约70％的包含编码car的异源核酸的g-nk细胞。
13、在一些实施方案中，总组合物包括大于20％或大于约20％的包含编码car的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，总组合物包括大于30％或大于约30％的包含编码car的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，总组合物包括大于40％或大于约40％的包含编码car的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，总组合物包括大于50％或大于约50％的包含编码car的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，总组合物包括大于60％或大于约60％的包含编码car的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，总组合物包括大于70％或大于约70％的包含编码car的异源核酸的g-nk细胞。
14、在一些实施方案中，该多种工程化g-nk细胞包括大于20％或大于约20％的包含编码免疫调节剂的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，该多种工程化g-nk细胞包括大于30％或大于约30％的包含编码免疫调节剂的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，该多种工程化g-nk细胞包括大于40％或大于约40％的包含编码免疫调节剂的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，该多种工程化g-nk细胞包括大于50％或大于约50％的包含编码免疫调节剂的异源核酸的g-nk细胞。在一些实施方案中，该多种工程化g-nk细本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种FcRγ链表达缺陷的工程化自然杀伤(NK)细胞(g-NK细胞)，并且所述工程化NK细胞包含编码嵌合抗原受体(CAR)的异源核酸。
2.一种FcRγ链表达缺陷的工程化自然杀伤(NK)细胞(g-NK细胞)，并且所述工程化NK细胞包含编码免疫调节剂的异源核酸。
3.一种FcRγ链表达缺陷的工程化自然杀伤(NK)细胞(g-NK细胞)，并且所述工程化NK细胞包含编码嵌合抗原受体(CAR)的异源核酸和编码免疫调节剂的异源核酸。
4.根据权利要求1或权利要求3所述的工程化NK细胞，其中所述CAR包含1)抗原结合结构域；2)柔性连接子；3)跨膜区域；和4)胞内信号传导结构域。
5.根据权利要求4所述的工程化NK细胞，其中所述抗原结合结构域靶向肿瘤抗原。
6.根据权利要求4或权利要求5所述的工程化NK细胞，其中所述抗原结合结构域是单链可变片段(scFv)。
7.根据权利要求4至6中任一项所述的工程化NK细胞，其中所述胞内信号传导结构域包含主要信号传导结构域和共刺激信号传导结构域。
8.根据权利要求4至7中任
9.根据权利要求4至7中任一项所述的工程化NK细胞，其中所述胞内信号传导结构域包含CD3ζ、DAP10、DAP12、CD28、4-1BB或OX40的两个或更多个信号传导结构域。
10.根据权利要求4至9中任一项所述的工程化NK细胞，其中所述胞内信号传导结构域包含含有CD3ζ的信号传导结构域的主要信号传导结构域以及共刺激信号传导结构域。
11.根据权利要求10所述的工程化NK细胞，其中所述共刺激信号传导结构域是CD28或4-1BB的信号传导结构域。
12.根据权利要求1或3至11中任一项所述的工程化NK细胞，其中编码所述CAR的所述异源核酸被稳定地整合到所述细胞的基因组中。
13.根据权利要求1或3至11中任一项所述的工程化NK细胞，其中编码所述CAR的所述异源核酸被瞬时表达。
14.根据权利要求2或权利要求3所述的工程化NK细胞，其中所述免疫调节剂是免疫抑制剂。
15.根据权利要求2或权利要求3所述的工程化NK细胞，其中所述免疫调节剂是免疫激活剂。
16.根据权利要求2、3或15中任一项所述的工程化NK细胞，其中所述免疫调节剂是细胞因子。
17.根据权利要求16所述的工程化NK细胞，其中所述细胞因子可从所述工程化NK细胞分泌。
18.根据权利要求17所述的工程化NK细胞，其中所述可分泌的细胞因子是IL-2或其生物部分；IL-15或其生物部分；或IL-21或其生物部分；或它们的组合。
19.根据权利要求16所述的工程化NK细胞，其中所述细胞因子是膜结合的。
20.根据权利要求19所述的工程化NK细胞，其中所述膜结合细胞因子是膜结合IL-2(mbIL-2)；膜结合IL-15(mbIL-15)；膜结合IL-21(mbIL-21)；或它们的组合。
21.根据权利要求2至20中任一项所述的工程化NK细胞，其中编码所述免疫调节剂的所述异源核酸被稳定地整合到所述细胞的所述基因组中。
22.根据权利要求2至21中任一项所述的工程化NK细胞，其中编码所述免疫调节剂的所述异源核酸被瞬时表达。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的工程化NK细胞，其中所述g-NK细胞具有CD16阳性/CD57阳性/CD7微弱/阴性/CD161阴性的表面表型。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的工程化NK细胞，其中所述g-NK细胞还具有NKG2A阴性/CD161阴性的表面表型。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的工程化NK细胞，其中所述g-NK细胞还是CD38阴性。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的工程化NK细胞，其中所述g-NK细胞还具有CD45阳性/CD3阴性/CD56阳性的表面表型。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的工程化NK细胞，其中所述g-NK细胞包含CD16158V/V(V158)
28.根据权利要求1至26中任一项所述的工程化NK细胞，其中所述g-NK细胞是CD16158V/F。
29.一种组合物，所述组合物包含多种根据权利要求1、3至13或23至28中任一项所述的工程化g-NK细胞。
30.一种组合物，所述组合物包含多种根据权利要求2...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种fcrγ链表达缺陷的工程化自然杀伤(nk)细胞(g-nk细胞)，并且所述工程化nk细胞包含编码嵌合抗原受体(car)的异源核酸。
2.一种fcrγ链表达缺陷的工程化自然杀伤(nk)细胞(g-nk细胞)，并且所述工程化nk细胞包含编码免疫调节剂的异源核酸。
3.一种fcrγ链表达缺陷的工程化自然杀伤(nk)细胞(g-nk细胞)，并且所述工程化nk细胞包含编码嵌合抗原受体(car)的异源核酸和编码免疫调节剂的异源核酸。
4.根据权利要求1或权利要求3所述的工程化nk细胞，其中所述car包含1)抗原结合结构域；2)柔性连接子；3)跨膜区域；和4)胞内信号传导结构域。
5.根据权利要求4所述的工程化nk细胞，其中所述抗原结合结构域靶向肿瘤抗原。
6.根据权利要求4或权利要求5所述的工程化nk细胞，其中所述抗原结合结构域是单链可变片段(scfv)。
7.根据权利要求4至6中任一项所述的工程化nk细胞，其中所述胞内信号传导结构域包含主要信号传导结构域和共刺激信号传导结构域。
8.根据权利要求4至7中任一项所述的工程化nk细胞，其中所述胞内信号传导结构域包含cd3ζ、dap10、dap12、cd28、4-1bb或ox40的一个或多个信号传导结构域。
9.根据权利要求4至7中任一项所述的工程化nk细胞，其中所述胞内信号传导结构域包含cd3ζ、dap10、dap12、cd28、4-1bb或ox40的两个或更多个信号传导结构域。
10.根据权利要求4至9中任一项所述的工程化nk细胞，其中所述胞内信号传导结构域包含含有cd3ζ的信号传导结构域的主要信号传导结构域以及共刺激信号传导结构域。
11.根据权利要求10所述的工程化nk细胞，其中所述共刺激信号传导结构域是cd28或4-1bb的信号传导结构域。
12.根据权利要求1或3至11中任一项所述的工程化nk细胞，其中编码所述car的所述异源核酸被稳定地整合到所述细胞的基因组中。
13.根据权利要求1或3至11中任一项所述的工程化nk细胞，其中编码所述car的所述异源核酸被瞬时表达。
14.根据权利要求2或权利要求3所述的工程化nk细胞，其中所述免疫调节剂是免疫抑制剂。
15.根据权利要求2或权利要求3所述的工程化nk细胞，其中所述免疫调节剂是免疫激活剂。
16.根据权利要求2、3或15中任一项所述的工程化nk细胞，其中所述免疫调节剂是细胞因子。
17.根据权利要求16所述的工程化nk细胞，其中所述细胞因子可从所述工程化nk细胞分泌。
18.根据权利要求17所述的工程化nk细胞，其中所述可分泌的细胞因子是il-2或其生物部分；il-15或其生物部分；或il-21或其生物部分；或它们的组合。
19.根据权利要求16所述的工程化nk细胞，其中所述细胞因子是膜结合的。
20.根据权利要求19所述的工程化nk细胞，其中所述膜结合细胞因子是膜结合il-2(mbil-2)；膜结合il-15(mbil-15)；膜结合il-21(mbil-21)；或它们的组合。
21.根据权利要求2至20中任一项所述的工程化nk细胞，其中编码所述免疫调节剂的所述异源核酸被稳定地整合到所述细胞的所述基因组中。
22.根据权利要求2至21中任一项所述的工程化nk细胞，其中编码所述免疫调节剂的所述异源核酸被瞬时表达。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的工程化nk细胞，其中所述g-nk细胞具有cd16阳性/cd57阳性/cd7微弱/阴性/cd161阴性的表面表型。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的工程化nk细胞，其中所述g-nk细胞还具有nkg2a阴性/cd161阴性的表面表型。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的工程化nk细胞，其中所述g-nk细胞还是cd38阴性。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的工程化nk细胞，其中所述g-nk细胞还具有cd45阳性/cd3阴性/cd56阳性的表面表型。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的工程化nk细胞，其中所述g-nk细胞包含cd16158v/v(v158)
28.根据权利要求1至26中任一项所述的工程化nk细胞，其中所述g-nk细胞是cd16158v/f。
29.一种组合物，所述组合物包含多种根据权利要求1、3至13或23至28中任一项所述的工程化g-nk细胞。
30.一种组合物，所述组合物包含多种根据权利要求2或14至28中任一项所述的工程化g-nk细胞。
31.一种组合物，所述组合物包含多种根据权利要求3至28中任一项所述的工程化g-nk细胞。
32.根据权利要求29至31中任一项所述的组合物，其中所述组合物中大于50％或大于约50％的所述nk细胞或总细胞或者大于60％或大于约60％的所述nk细胞或总细胞是g-nk细胞。
33.根据权利要求29至31中任一项所述的组合物，其中所述组合物中大于70％或大于约70％的所述nk细胞或总细胞是g-nk细胞。
34.根据权利要求29至31中任一项所述的组合物，其中所述组合物中大于80％或大于约80％的所述nk细胞或总细胞是g-nk细胞。
35.根据权利要求29至31中任一项所述的组合物，其中所述组合物中大于90％或大于约90％的所述nk细胞或总细胞是g-nk细胞。
36.根据权利要求29至31中任一项所述的组合物，其中所述组合物中大于95％或大于约95％的所述nk细胞或总细胞是g-nk细胞。
37.根据权利要求29或31至36中任一项所述的组合物，其中所述多种工程化g-nk细胞包含大于20％或大于约20％、大于30％或大于约30％、大于40％或大于约40％、大于50％或大于约50％、大于60％或大于约60％、或者大于70％或大于约70％的包含编码所述car的异源核酸的g-nk细胞。
38.根据权利要求29或31至37中任一项所述的组合物，其中所述总组合物包含大于20％或大于约20％、大于30％或大于约30％、大于40％或大于约40％、大于50％或大于约50％、大于60％或大于约60％、或者大于70％或大于约70％的包含编码所述car的异源核酸的g-nk细胞。
39.根据权利要求30至36中任一项所述的组合物，其中所述多种工程化g-nk细胞包含大于20％或大于约20％、大于30％或大于约30％、大于40％或大于约40％、大于50％或大于约50％、大于60％或大于约60％、或者大于70％或大于约70％的包含编码所述免疫调节剂的异源核酸的g-nk细胞。
40.根据权利要求30至36或39中任一项所述的组合物，其中所述总组合物包含大于20％或大于约20％、大于30％或大于约30％、大于40％或大于约40％、大于50％或大于约50％、大于60％或大于约60％、或者大于70％或大于约70％的包含编码所述免疫调节剂的异源核酸的g-nk细胞。
41.根据权利要求31至36中任一项所述的组合物，其中所述多种工程化g-nk细胞包含大于20％或大于约20％、大于30％或大于约30％、大于40％或大于约40％、大于50％或大于约50％、大于60％或大于约60％、或者大于70％或大于约70％的包含编码所述car的异源核酸和编码所述免疫调节剂的异源核酸的g-nk细胞。
42.根据权利要求31至36或41中任一项所述的组合物，其中所述总组合物包含大于20％或大于约20％、大于30％或大于约30％、大于40％或大于约40％、大于50％或大于约50％、大于60％或大于约60％、或者大于70％或大于约70％的包含编码所述car的异源核酸和编码所述免疫调节剂的所述异源核酸的g-nk细胞。
43.根据权利要求29至42中任一项所述的组合物，其中大于70％或大于约70％的所述g-nk细胞对穿孔素呈阳性，并且大于70％或大于约70％的所述g-nk细胞对颗粒酶b呈阳性。
44.根据权利要求29至43中任一项所述的组合物，其中大于80％或大于约80％的所述g-nk细胞对穿孔素呈阳性，并且大于80％或大于约80％的所述g-nk细胞对颗粒酶b呈阳性。
45.根据权利要求29至44中任一项所述的组合物，其中大于90％或大于约90％的所述g-nk细胞对穿孔素呈阳性，并且大于90％或大于约90％的所述g-nk细胞对颗粒酶b呈阳性。
46.根据权利要求29至45中任一项所述的组合物，其中大于95％或大于约95％的所述g-nk细胞对穿孔素呈阳性，并且大于95％或大于约95％的所述g-nk细胞对颗粒酶b呈阳性。
47.根据权利要求43至46中任一项所述的组合物，其中：
48.根据权利要求29至47中任一项所述的组合物，其中任选地通过cd107a表达测量，所述组合物中大于10％的所述细胞能够针对肿瘤靶细胞脱颗粒，任选地其中所述脱颗粒是在针对所述肿瘤靶细胞的抗体的不存在下测量的。
49.根据权利要求29至48中任一项所述的组合物，其中所述组合物中大于10％的所述细胞还能够产生针对肿瘤靶细胞的干扰素-γ或tnf-α，任选地其中所述干扰素-γ或tnf-α是在针对所述肿瘤靶细胞的抗体的不存在下测量的。
50.根据权利要求29至49中任一项所述的组合物，其中在所述组合物中的所述细胞中，在表达靶抗原的细胞(靶细胞)和针对所述靶抗原的抗体(抗靶抗体)的存在下，大于15％或大于约15％、大于20％或大于约20％、大于30％或大于约30％、大于40％或大于约40％、或者大于50％或大于约50％的细胞产生效应细胞因子。
51.根据权利要求29至50中任一项所述的组合物，其中在所述组合物中的所述总细胞中或在所述组合物中的所述g-nk细胞中，大于30％或大于约30％的细胞对nkg2c呈阳性(nkg2c阳性)和/或大于50％或大于约50％的细胞对nkg2a呈阴性或低水平(nkg2a阴性)。
52.根据权利要求29至51中任一项所述的组合物，其中在所述组合物中的所述总细胞中或在所述组合物中的所述g-nk细胞中，大于35％或大于约35％的细胞对nkg2c呈阳性(nkg2c阳性)和/或大于60％或大于约60％的细胞对nkg2a呈阴性或低水平(nkg2a阴性)。
53.根据权利要求29至52中任一项所述的组合物，其中在所述组合物中的所述总细胞中或在所述组合物中的所述g-nk细胞中，大于40％或大于约40％的细胞对nkg2c呈阳性(nkg2c阳性)和/或大于70％或大于约70％的细胞对nkg2a呈阴性或低水平(nkg2a阴性)。
54.根据权利要求29至52中任一项所述的组合物，其中在所述组合物中的所述总细胞中或在所述组合物中的所述g-nk细胞中，大于45％或大于约45％的细胞对nkg2c呈阳性(nkg2c阳性)和/或大于80％或大于约80％的细胞对nkg2a呈阴性或低水平(nkg2a阴性)。
55.根据权利要求29至52中任一项所述的组合物，其中在所述组合物中的所述总细胞中或在所述组合物中的所述g-nk细胞中，大于50％或大于约50％的细胞对nkg2c呈阳性(nkg2c阳性)和/或大于85％或大于约85％的细胞对nkg2a呈阴性或低水平(nkg2a阴性)。
56.根据权利要求29至52中任一项所述的组合物，其中在所述组合物中的所述总细胞中或在所述组合物中的所述g-nk细胞中，大于55％或大于约55％的细胞对nkg2c呈阳性(nkg2c阳性)和/或大于90％或大于约90％的细胞对nkg2a呈阴性或低水平(nkg2a阴性)。
57.根据权利要求29至52中任一项所述的组合物，其中在所述组合物中的所述总细胞中或在所述组合物中的所述g-nk细胞中，大于60％或大于约60％的细胞对nkg2c呈阳性(nkg2c阳性)和/或大于95％或大于约95％的细胞对nkg2a呈阴性或低水平(nkg2a阴性)。
58.根据权利要求29至57中任一项所述的组合物，其中在所述组合物中的所述总细胞中或在所述组合物中的所述g-nk细胞中，大于50％或大于约50％、大于60％或大于约60％、大于70％或大于约70％、大于80％或大于约80％、或者大于90％或大于约90％的细胞是cd38阴性。
59.根据权利要求29至57中任一项所述的组合物，其中在所述组合物中的所述总细胞中或在所述组合物中的所述g-nk细胞中，大于50％或大于约50％、大于60％或大于约60％、大于70％或大于约70％、大于80％或大于约80％、或者大于90％或大于约90％的细胞是cd16阳性/cd57阳性/cd7微弱/阴性/cd161阴性。
60.根据权利要求29至57中任一项所述的组合物，其中在所述组合物中的所述总细胞中或在所述组合物中的所述g-nk细胞中，大于50％或大于约50％、大于60％或大于约60％、大于70％或大于约70％、大于80％或大于约80％、或者大于90％或大于约90％的细胞是nkg2a阴性/cd161阴性。
61.根据权利要求29至60中任一项所述的组合物，其中所述多种g-nk细胞是cd16158v/v(v158)。
62.根据权利要求29至60中任一项所述的组合物，其中所述多种g-nk细胞是cd16158v/f。
63.根据权利要求29至62中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含至少108个细胞或至少约108个细胞。
64.根据权利要求29至63中任一项所述的组合物，其中所述组合物中g-nk细胞的数量为108至1012个细胞或为约108至约1012个细胞、为108至1011个细胞或为约108至约1011个细胞、为108至1010个细胞或为约108至约1010个细胞、为108至109个细胞或为约108至约109个细胞、为109个细胞至1012个细胞或为约109个细胞至约1012个细胞、为109至1011个细胞或为约109至约1011个细胞、为109至1010个细胞或为约109至约1010个细胞、为1010至1012个细胞或为约1010至约1012个细胞、为1010至1011个细胞或为约1010至约1011个细胞、或者为1011至1012个细胞或为约1011至约1012个细胞。
65.根据权利要求29至64中任一项所述的组合物，其中所述组合物中g-nk细胞的所述数量为或为约5×108个细胞、为或为约1×109个细胞、为或为约5×1010个细胞、或者为或为约1×1010个细胞。
66.根据权利要求29至65中任一项所述的组合物，其中所述组合物的体积在50ml与500ml之间或在约50ml与约500ml之间，任选地为200ml或为约200ml。
67.根据权利要求29至66中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述细胞来自单个供体受试者，所述细胞已经从相同生物样本被扩增。
68.根据权利要求29至67中任一项所述的组合物，其中所述组合物是药物组合物。
69.根据权利要求29至68中任一项所述的组合物，所述组合物包含药学上可接受的赋形剂。
70.根据权利要求29至69中任一项所述的组合物，其中所述组合物在包含冷冻保护剂的无血清冷冻保存培养基中配制。
71.根据权利要求70所述的组合物，其中所述冷冻保护剂是dmso并且所述冷冻保存培养基为5％至10％dmso(v/v)。
72.根据权利要求71所述的组合物，其中所述冷冻保护剂为或为约10％dmso(v/v)。
73.根据权利要求29至72中任一项所述的组合物，所述组合物是无菌的。
74.一种无菌袋，所述无菌袋包含根据权利要求29至73中任一项所述的组合物。
75.根据权利要求74所述的无菌袋，其中所述袋是冷冻保存相容的袋。
76.一种产生遗传工程化g-nk细胞的方法，所述方法包括将编码嵌合抗原受体(car)的异源核酸引入fcrγ链表达缺陷的nk细胞(g-nk细胞)中。
77.一种产生遗传工程化g-nk细胞的方法，所述方法包括将编码免疫调节剂的异源核酸引入所述g-nk细胞中，从而产生遗传工程化g-nk细胞。
78.一种产生遗传工程化g-nk细胞的方法，所述方法包括：
79.根据权利要求76或权利要求78所述的方法，其中所述car包含1)抗原结合结构域；2)柔性连接子(间隔子)；3)跨膜区域；和4)胞内信号传导结构域。
80.根据权利要求79所述的方法，其中所述抗原结合结构域靶向肿瘤抗原。
81.根据权利要求79或80所述的方法，其中所述抗原结合结构域是单链可变片段(scfv)。
82.根据权利要求79至81中任一项所述的方法，其中所述胞内信号传导结构域包含来自cd3ζ、dap10、dap12、cd28、4-1bb或ox40的一个或多个信号传导结构域。
83.根据权利要求79至82中任一项所述的方法，其中所述胞内信号传导结构域包含来自cd3ζ、dap10、dap12、cd28、4-1bb或ox40的两个或更多个信号传导结构域。
84.根据权利要求79至83中任一项所述的方法，其中所述胞内信号传导结构域包含含有cd3ζ的信号传导结构域的主要信号传导结构域以及共刺激信号传导结构域。
85.根据权利要求84所述的方法，其中所述共刺激信号传导结构域是cd28或4-1bb的信号传导结构域。
86.根据权利要求76或78至85中任一项所述的方法，其中在稳定整合到所述g-nk细胞的基因组的条件下引入编码所述car的所述异源核酸。
87.根据权利要求76或78至86中任一项所述的方法，其中编码所述car的所述异源核酸包含在病毒载体中，并通过转导引入所述g-nk细胞中。
88.根据权利要求87所述的方法，其中所述病毒载体是慢病毒载体。
89.根据权利要求76或78至85中任一项所述的方法，其中在所述g-nk细胞中瞬时表达的条件下引入编码所述car的所述核酸。
90.根据权利要求76、78至85或89中任一项所述的方法，其中通过非病毒递送引入编码所述car的所述核酸。
91.根据权利要求76、78至85或89至90中任一项所述的方法，其中经由脂质纳米颗粒将编码所述car的所述核酸引入所述g-nk细胞中。
92.根据权利要求76或78至91中任一项所述的方法，其中编码所述car的所述核酸是dna。
93.根据权利要求76、78至85或89至91中任一项所述的方法，其中编码所述car的所述核酸是rna。
94.根据权利要求93所述的方法，其中所述rna是mrna。
95.根据权利要求94所述的方法，其中所述rna是自扩增mrna。
96.根据权利要求76、78至85或89至95中任一项所述的方法，其中经由电穿孔将所述核酸引入所述g-nk细胞中。
97.根据权利要求77或权利要求78所述的方法，其中所述免疫调节剂是免疫抑制剂。
98.根据权利要求77或权利要求78中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂是免疫激活剂。
99.根据权利要求77、78或权利要求98所述的方法，其中所述免疫调节剂是细胞因子。
100.根据权利要求99所述的方法，其中所述细胞因子可从所述工程化nk细胞分泌。
101.根据权利要求100所述的方法，其中所述可分泌细胞因子是il-2或其生物活性部分；il-15或其生物活性部分；il-21或其生物活性部分；或它们的组合。
102.根据权利要求99所述的方法，其中所述细胞因子是膜结合的。
103.根据权利要求102所述的方法，其中所述膜结合细胞因子是膜结合il-2(mbil-2)；膜结合il-15(mbil-15)；或膜结合il-21(mbil-21)；或它们的组合。
104.根据权利要求77至103中任一项所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·迪皮埃罗，A·比格雷，
申请(专利权)人：因达普塔治疗公司，
类型：发明
国别省市：
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