【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物学领域，具体提供了一种针对prrsv nsp7的单克隆抗体制备方法、抗原表位鉴定及应用。
技术介绍
1、猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv)是一种单股正链有囊膜rna病毒，属于尼多病毒目、动脉炎病毒属、动脉炎病毒科。prrsv具有严格的宿主特异性和组织嗜性，主要感染肺泡巨噬细胞和树突状细胞，引起急性或持续性感染。猪肺泡巨噬细胞是prrsv在体内呼吸道感染中复制的主要靶细胞。prrsv基因组约为15kb，包括位于5′端的帽子结构和非翻译区(utr)，以及位于3′端的utr和poly(a)尾。在5′端和3′端之间，prrsv编码至少10个开放阅读框(orfs)，分别为orf1a、orf1b、orf2a、orf2b、orf3～7和orf5a。orf1a和orf1b占病毒基因组的四分之三，主要通过核糖体移码编码复制酶多聚蛋白pp1a、pp1a-nsp2n、pp1a-nsp2tf和pp1ab。这些多聚蛋白被水解加工成至少16种功能性非结构蛋白(nsp)，包括nsp1α、nsp1β、nsp2tf、nsp2n和nsp2～6、nsp7α、nsp7β和nsp8～12，负责病毒基因组的复制和转录。
2、nsp7编码基因全长为777bp，由259个氨基酸(aa)组成，在不同prrsv毒株中高度保守，没有明显的序列差异，在体内可被进一步切割为nsp7α和nsp7β。研究表明，nsp7具有良好的免疫原性，可用于prrsv特异性抗体的血清学检测。猪只感染prrsv后，nsp1、nsp2、nsp7是免疫活性最高的三种非结构蛋白。
3、本专利技术利用细胞融合以及亚克隆筛选，成功获得了一株针对prrsv nsp7的特异性单克隆抗体，并对其识别的抗原表位进行了鉴定，为将来prrsv的基础和应用研究提供了很有价值的工具。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的空白，本专利技术提供了一种猪prrsv nsp7的单克隆抗体及其制备方法与应用。本法的技术方案是：通过将prrsv nsp7的编码序列克隆到pcold-i质粒中构建原核表达载体，利用不同浓度咪唑洗脱的方式纯化蛋白，将纯化后的nsp7作为抗原免疫balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞sp2/0细胞进行融合，制备杂交瘤细胞，用纯化的nsp7包被板子，通过间接elisa筛选能够特异性识nsp7的阳性杂交瘤细胞。
2、具体的，本专利技术的目的是提供了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7(prrsv nsp7)的抗原表位，所述抗原表位为prrsv nsp7的184－192肽段，其氨基酸序列为(184kfwdknsgd192)。
3、本专利技术的另一目的在于提供该猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7(prrsvnsp7)的抗原表位在猪繁殖与呼吸综合征病毒表位疫苗抗原和诊断试剂抗原制备中的应用。
4、本专利技术的另一目的在于提供该猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7(prrsvnsp7)的抗原表位的确定、制备方法。
5、有益效果
6、本专利技术获得了1株可特异性识别prrsv nsp7的单克隆抗体，可用于ifa、westernblotting检测，能够很好地识别nsp7，该单克隆抗体亚型重链为igg2a，轻链为kappa。通过构建截短表达的nsp7以及合成一系列nsp7短肽，最终确定了该单克隆抗体能特异性识别nsp7的184－192肽段，其氨基酸序列为184kfwdknsgd192，如seq id no.1所示。
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1.一种猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7(PRRSV Nsp7)的抗原表位，所述抗原表位为PRRSV Nsp7的184－192肽段，其氨基酸序列为(184KFWDKNSGD192)。
2.根据权利要求1所述一种猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7(PRRSV Nsp7)的抗原表位在猪繁殖与呼吸综合征病毒表位疫苗抗原和诊断试剂抗原制备中的应用。
3.一种抗体制剂，所述抗体制剂包含特异性针对权利要求1中所述的PRRSV Nsp7的抗原表位的抗体，所述抗体是单克隆的；或所述制剂包含所述抗体的片段。
4.一种制备抗血清的方法，所述方法包括将权利要求1所述的抗原表位给药至动物宿主以在所述动物宿主中产生抗体和回收包含在所述动物宿主中产生的抗体的抗血清。
5.一种抗原组合物，所述抗原组合物包含至少一种抗原，其中所述至少一种抗原包含猪PRRSV Nsp7的抗原表位，所述的猪PRRSV Nsp7的抗原表位位于184－192肽段，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示(184KFWDKNSGD192)。
6.权利要求1所述的一种猪PRRS
...【技术特征摘要】
1.一种猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7(prrsv nsp7)的抗原表位，所述抗原表位为prrsv nsp7的184－192肽段，其氨基酸序列为(184kfwdknsgd192)。
2.根据权利要求1所述一种猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7(prrsv nsp7)的抗原表位在猪繁殖与呼吸综合征病毒表位疫苗抗原和诊断试剂抗原制备中的应用。
3.一种抗体制剂，所述抗体制剂包含特异性针对权利要求1中所述的prrsv nsp7的抗原表位的抗体，所述抗体是单克隆的；或所述制剂包含所述抗体的片段。
4.一种制备抗血清的方法，所述方...
【专利技术属性】
技术研发人员：李丽薇，高飞，姜一峰，周艳君，童光志，段宏勇，王树茂，童武，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心，
类型：发明
国别省市：
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