一种依赖于RdRp的非洲猪瘟taRNA疫苗及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种依赖于RdRp的非洲猪瘟taRNA疫苗及其构建方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术提供的taRNA疫苗的构建方法包括如下步骤：构建表达JEV RdRp的复制型mRNA质粒pJEV‑T7‑NS5；构建表达非洲猪瘟病毒p30、p54和B602L蛋白的核苷酸序列P2A‑p30‑T2A、P2A‑p54‑T2A和P2A‑B602L‑T2A；用上述序列替代所述pJEV‑T7‑NS5中的NS5序列，得到相应质粒；体外转录上述质粒制备相应的线性mRNA；将所述线性mRNA添加疫苗佐剂制备成非洲猪瘟taRNA疫苗。该疫苗能够有效的刺激小鼠产生相应的体液免疫和细胞免疫应答。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药，尤其涉及一种依赖于rdrp的非洲猪瘟tarna疫苗及其构建方法和应用。

技术介绍

1、非洲猪瘟(african swine fever，asf)是由非洲猪瘟病毒(asfv)引起的高度传染性的出血性猪传染病，其特征是高热、出血、共济失调和抑郁，并且在家猪中死亡率高，接近100％。asfv是一种具有正二十面体结构的双链dna病毒，是asfivirus属和asfarviridae家族的唯一成员，也是唯一已知的dna虫媒病毒。asf的爆发给养猪业造成了巨大的经济损失，严重威胁着全球养猪业的发展。然而，目前尚无有效的asf疫苗。asf的控制主要取决于早期诊断和消除感染动物，同时也有赖于养殖人员加强对该病预防的生物安全措施。非洲猪瘟病毒具有170～190kb的双链dna基因组，并且编码大约150～200种结构和非结构蛋白，这些病毒蛋白参与病毒复制、病毒-宿主相互作用和宿主先天免疫反应的调节，但是超过一半的asfv蛋白功能仍然未知，其中50多种是结构蛋白，包括p72、p54、p30、b602l和cd2v等。

2、p30蛋白也称为p32本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种依赖于RdRp的非洲猪瘟taRNA疫苗的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述pJEV-T7-NS5质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)所述核苷酸序列P2A-p30-T2A、P2A-p54-T2A和P2A-B602L-T2A分别如SEQ ID NO.3～5所示。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述疫苗佐剂包括可电离脂质、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG-脂质；所述可电离脂质、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇...

【技术特征摘要】

1.一种依赖于rdrp的非洲猪瘟tarna疫苗的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述pjev-t7-ns5质粒的核苷酸序列如seq id no.1所示。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)所述核苷酸序列p2a-p30-t2a、p2a-p54-t2a和p2a-b602l-t2a分别如seq id no.3～5所示。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述疫苗佐剂包括可电离脂质、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇和peg-脂质；...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏建超，马志永，张妍，夏琦琦，张海龙，邱亚峰，李宗杰，刘珂，李蓓蓓，邵东华，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心，
类型：发明
国别省市：