【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白质领域，具体涉及一种含重组蛋白的药物组合物的制备方法及生产设备，尤其是含抗体或凝血多肽的组合物的制备方法及生产设备。
技术介绍
1、蛋白的不稳定性包括化学不稳定性和物理不稳定性。化学不稳定性包括形成或破坏共价键，产生新的化学实体。相反，物理不稳定性指的是化学成分并不发生改变，而蛋白的物理状态发生改变，例如变性、聚集、沉淀以及吸附作用等。其中蛋白质聚集已成为蛋白质稳定性领域中辩论度最高、研究范围最广的主题之一。
2、血液凝结现象包含涉及凝血因子的级联反应，凝血因子用从ⅰ至ⅹⅲ的数字表示，除了参与凝血反应最后一步的因子ⅹⅲ外，其他因子以与它们编号相反的顺序参与凝血，每种因子都以无活性的前体形式和用字母a表示的活化形式存在。血液凝结涉及两种途径：内源性途径和外源性途径。其中内源性途径包括血液循环中存在的因子，且凝血过程从血管内开始。外源性途径涉及的凝血因子并非全部存在于血液中，还涉及在血管损伤中释放的组织因子。外源性途径涉及因子ⅶ(fⅶ)的干预，活化的因子ⅶa是参与血凝机制的因子之一，具有约50kda的分子量。fⅶa能与组织因子结合，引发后续凝血因子的活化，产生凝血级联反应。即使在不存在因子ⅷ或ⅸ的情况下，fⅶa也能在局部发挥作用。
3、丹麦诺和诺德公司开发的novoseven rt为重组人凝血因子viia，在结构上类似于人血浆衍生的因子viia。其已获批用于a型/b型血友病患者、先天性vii因子缺乏患者及血小板功能不全患者的出血事件和围手术期管理，以及用于获得性血友病患者的出血事件和围手术期
4、作为一种蛋白类药物，fⅶa在溶液态时，稳定性较差，容易在外界因素的作用下发生物理化学变化，影响药品的有效性和安全性。由诺和诺德公司开发和生产的novosevenrt是通过冷冻干燥的方式保持产品的长期稳定性。然而，在制剂生产时，在除菌过滤及灌装的过程中，管罐与料液接触的界面稳定性、气泡的产生与破碎、传输过程中的剪切力等，都可能造成蛋白的聚集，产生亚可见及可见的微粒，增加治疗过程中不良免疫原性反应的可能性。
5、以pd-1抑制剂nivolumab(纳武利尤抗体)为代表的igg4抗体药物在制剂生产时也存在类似的蛋白聚集的稳定性问题。这可能是因为igg4抗体在结构上区别于其他亚型的抗体，导致其在搅拌和高温条件下的聚集速率较快而且其在与不锈钢储液罐、eva等材质的储液袋接触时也会形成较多的亚可见微粒。
6、传统的车间生产配制过滤采用不锈钢管罐系统，将原液在不锈钢罐中混合，经压缩空气加压将原液经两级0.22μm孔径滤器除菌过滤压至不锈钢储液罐中，罐体之间使用不锈钢管道连接。除菌过滤后的料液储存在不锈钢罐中，采用压缩空气加压传输料液至不锈钢缓冲罐后，用蠕动泵进行灌装。采用这种系统，不锈钢管罐中的金属离子可能催化蛋白氧化，使蛋白变得不稳定；料液与管罐接触的固液界面作用也可能会导致蛋白质不稳定，产生聚集；而使用压缩空气加压会导致气泡的大量产生，气泡的产生与破碎会导致气液界面大大增加，气液界面作用同样可能会破坏蛋白结构导致蛋白聚集。使用该传统技术进行生产，一旦过滤后料液中蛋白发生聚集产生亚可见及可见的微粒，分装至西林瓶再进行冻干，会导致冻干后制剂成品中微粒增多。微粒注入人体，可能产生免疫原性反应，甚至堵塞血管，对使用者可能产生危害。
7、目前一次性过滤灌装系统被越来越多地用于生物药的生产中，该技术使用高分子聚合物材质的储液袋代替了不锈钢罐，用硅胶软管代替了不锈钢管道，使用蠕动泵传输料液代替了压缩空气。这种技术相对于传统技术，降低了不锈钢影响的风险，减少了气泡的产生。然而，针对某些稳定性较差，受疏水作用力影响较大的蛋白(例如fⅶa、igg4抗体)，与内表面疏水的储液袋接触仍然可能产生聚集，这样的料液直接灌装至西林瓶冻干，会导致成品可见微粒较多。
8、研究发现，fⅶa及igg4抗体的原液在经过除菌过滤后微粒很少，符合中国药典标准，但在经过不锈钢储液管罐(或储液袋)并灌装至西林瓶后，料液的微粒明显增多。急需一种新的制剂生产设备和工艺可以降低fⅶa及igg4抗体等稳定性较差的蛋白在灌装后的微粒含量，提高其质量及安全性。
9、重组蛋白的制剂生产中都是将灌装用蠕动泵与灌装针直接相连。我们尝试了在储液袋(4)与分液器(5)之间或者分液器(5)与灌装用蠕动泵(6)之间加装一个滤器，以实现在灌装之前的再次过滤，然而以上两种改进都没有根本地解决灌装后产品的可见微粒问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的包括提供一种重组蛋白组合物的生产设备和制备方法。
2、一方面，本专利技术提供了一种重组蛋白组合物的生产设备。具体地，本专利技术是在一次性过滤灌装系统的基础上进行了改进：在分液器(5)后所连接的灌装用蠕动泵(6)之后分别加装一个后端滤器(7)，即每个灌装用蠕动泵(6)分别依次连接一个后端滤器(7)，一个灌装针头(8)。
3、在一些方案中，所述生产设备包括以下元件：原液储液袋或原液冻融袋，前端蠕动泵，滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵、和/或灌装针等。其中原液储液袋或原液冻融袋用于储存重组蛋白组合物的原液，其为高分子聚合物材质，蠕动泵用于提供过滤或灌装的动力，滤器用于过滤重组蛋白组合物的料液，中间储液袋是用于储存过滤后的重组蛋白组合物料液，分液器用于对重组蛋白组合物或重组蛋白药物进行分液，灌装针用于将重组蛋白组合物料液灌装于西林瓶中。
4、在一些具体实施方式中，所述各元件之间由管道连接，例如可以由硬材质的管道或软材质的管道连接，优选由硅胶软管连接。
5、在一些方案中，所述生产设备包括隔离器，所述隔离器的内部为一个无菌环境。
6、在一些方案中，所述生产设备包括相连通的元件，具体地，包括原液储液袋或原液冻融袋，前端蠕动泵，2个或2个以上的前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，和/或灌装针等。在一些方案中，所述原液储液袋或原液冻融袋依次与前端蠕动泵、2个前端滤器和中间储液袋连接，中间储液袋与之后的分液器连接，分液器再依次与灌装用蠕动泵和灌装针相连。在一些具体实施方案中，灌装针之后连接西林瓶，以实现蛋白质组合物料液的灌装。在一个具体实施方案中，分液器位于中间储液袋的下方，形成高度差，以实现利用重力作用将储液袋中的料液传输至分液器中。在一些具体实施方案中，1个前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，和/或灌装针位于隔离器中。
7、在一些方案中，所述生产设备包括相连通的元件，具体地，包括1个或多个原液储液袋或原液冻融袋，1个或多个前端蠕动泵，2个或多个前端滤器，1个或多个中间储液袋，1个或多个分液器，1个或多个灌装用蠕动泵，和/或，1个或1个以上的灌装针等。
8、在一些方案中，每一套生产设备至少由1个原液储液袋或原液冻融袋，1个前端蠕动泵，2个串联的前端滤器，1个中间储液袋，1个分液器，n个并联的灌装用蠕动泵构成，每个灌装用蠕动泵再分别连接一个灌装针。其中，n为1-24的整数，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组蛋白组合物的生产设备，其包括以下元件：用于储存重组蛋白组合物原液的原液储液袋或冻融袋(1)，前端蠕动泵(2)，前端滤器(3)，中间储液袋(4)，分液器(5)，灌装用蠕动泵(6)，灌装针(8)。
2.根据权利要求1所述的设备，其特征在于：原液储液袋或冻融袋(1)，前端蠕动泵(2)，两个前端滤器，中间储液袋(4)，分液器(5)，灌装用蠕动泵(6)，灌装针(8)，各元件依次连接。
3.根据权利要求1-2任一项所述的设备，其特征在于：所述分液器(5)与互相并联的n个灌装用蠕动泵(6)相连，每个灌装用蠕动泵(6)再分别连接一个灌装针(8)，其中n为1-24的整数，例如n可以是1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，n优选为1-12的整数，例如n可以是1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，最优选n＝6。
4.根据权利要求1-3任一项所述的设备，其特征在于：所述依次连接的原液储液袋或原液冻融袋(1)，前端蠕动泵(2)，两个前端滤器，中间储液袋(4
5.根据权利要求1-4任一项所述的设备，其特征在于：所述前端滤器孔径为0.1μm-1μm，优选为0.1μm，0.22μm，0.45μm，最优选为0.22μm；和/或，所述后端滤器的孔径为0.1μm-1μm，优选为0.1μm，0.22μm，0.45μm，最优选为0.22μm。
6.一种制备重组蛋白组合物的方法，所述方法包括灌装重组蛋白组合物，所述灌装重组蛋白组合物包括：i)使用滤器过滤重组蛋白组合物，ii)使用灌装针将所述组合物灌装入西林瓶。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述滤器为后端滤器，其直接与灌装针通过管道连接。
8.根据权利要求6-7任一项所述的方法，其特征在于使用权利要求1-5任一项所述的设备进行重组蛋白组合物的制备。
9.根据权利要求6-8任一项所述的方法，其特征在于：所述重组蛋白选自凝血因子或IgG4抗体，优选为重组人凝血因子VIIa或纳武利尤单抗。
10.权利要求1-5任一项的设备在制备，灌装，包装和/或生产重组蛋白药物组合物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种重组蛋白组合物的生产设备，其包括以下元件：用于储存重组蛋白组合物原液的原液储液袋或冻融袋(1)，前端蠕动泵(2)，前端滤器(3)，中间储液袋(4)，分液器(5)，灌装用蠕动泵(6)，灌装针(8)。
2.根据权利要求1所述的设备，其特征在于：原液储液袋或冻融袋(1)，前端蠕动泵(2)，两个前端滤器，中间储液袋(4)，分液器(5)，灌装用蠕动泵(6)，灌装针(8)，各元件依次连接。
3.根据权利要求1-2任一项所述的设备，其特征在于：所述分液器(5)与互相并联的n个灌装用蠕动泵(6)相连，每个灌装用蠕动泵(6)再分别连接一个灌装针(8)，其中n为1-24的整数，例如n可以是1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，n优选为1-12的整数，例如n可以是1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，最优选n＝6。
4.根据权利要求1-3任一项所述的设备，其特征在于：所述依次连接的原液储液袋或原液冻融袋(1)，前端蠕动泵(2)，两个前端滤器，中间储液袋(4)，分液器(5)，灌装用蠕动泵(6)，和/或灌装针(8)的每两个元件之间或两端还可以插入或增加其...
【专利技术属性】
技术研发人员：程艳菊，孔令婕，赵伟，朱友伟，李建文，
申请(专利权)人：正大天晴药业集团南京顺欣制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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