【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，尤其涉及一种coro1a作为靶点用于制备调控胞外囊泡分泌的用途。
技术介绍
1、所有细胞，包括原核和真核细胞，都释放胞外囊泡(extracellular vesicles,evs)，evs可以大致分为微泡和外泌体。微泡是通过向外出芽从质膜(pm)表面脱落的囊泡，直径范围为100～1000nm。外泌体是一种内体起源的ev，直径范围为30～150nm(平均为100nm)。
2、evs含有大量来自亲本细胞的蛋白质、核酸、脂质和代谢物，在不同细胞间的信息交流中起着重要作用。一方面，evs具有重要的生理功能，如胎盘evs和肠道evs可分别介导胎儿免疫逃逸和维持肠道免疫平衡；另一方面，evs参与多种疾病的发展，包括神经退行性疾病、心血管疾病和代谢性疾病。此外，evs在肿瘤发展，特别是肿瘤免疫抑制中具有关键作用。肿瘤细胞来源胞外囊泡(tevs)能深刻影响几乎所有免疫效应细胞的激活。有报道称，tevs-pd-l1可诱导全身免疫抑制。因此，靶向tev的产生是一种增强抗肿瘤免疫的前瞻性策略，这需要进一步了解ev生物发生的机制。
3、微泡起源于质膜的向外突起，被剪切并脱落到细胞外。tsg101被募集到pm上，参与vps4依赖性微泡的产生。此外，包括cd9和cd81在内的四联体跨膜蛋白也参与了微泡的生物发生。外泌体则是通过内体依赖途径形成的，pm内陷形成早期内体，作为外泌体生物发生的第一步。在成熟过程中，内体膜向内出芽形成富含腔内囊泡(ilvs)的多囊泡体(mvbs)。
4、mvbs主要有
5、snare复合体在介导膜融合过程中起着重要作用。snare复合体由一个v-snare(vesicle-membrane snare)蛋白和三个t-snare(target-membrane snare)蛋白组成。t-snare复合体通过snare基序的n端与v-snare相互作用，引发囊泡膜融合。已经证明snare复合体可以调节ev的生物发生。如v-snare vamp-3，t-snare syntaxin-3(stx-3)和snap-23，据报道参与ev的生物发生；在骨髓间充质干细胞中，fas/fap-1/caveolin-1级联介导由snap-25和vamp-5组成的snare的形成；由vamp-7、syntaxin-4(stx-4)和snap-23组成的snare在mt1-mmp阳性晚期内体融合到侵袭性伪足的过程中具有重要作用。然而，除了snare复合体的亚基外，完整的snare复合体如何调控ev的生物发生，以及在mvbs和pm融合过程中如何调节snare复合体的组装，在很大程度上仍然未知。
6、tevs是肿瘤微环境中的关键免疫调节因子。它们重塑免疫微环境，并通过具有免疫抑制效应的内含物阻止抗肿瘤免疫反应，从而影响癌症对治疗的反应。有趣的是，癌细胞利用各种策略，如基因异常表达、蛋白质翻译后修饰和信号通路改变，来调节tevs的生物发生、组成和最终功能，以促进癌症的进展。首先，胞外囊泡调控机制的某些元素本身是癌基因或肿瘤抑制因子。虽然目前报道有相当多机制涉及ev的生物发生，但是，针对特定的细胞类型和内容物，在ev生物发生的调控机制上存在差异，因此，研究具有调控多种来源的tev生物发生能力的靶点是增强抗肿瘤免疫的重要策略。
7、泛素-蛋白酶体系统在调节真核生物的生理和病理过程中起着关键作用，e3泛素连接酶由于其对底物的特异性识别而成为该系统的核心组成部分。ring finger(rnf)蛋白家族是一组具有rnf结构域的e3泛素连接酶。近年来，rnf蛋白家族成员参与了肿瘤的发生和发展。rnf128是淋巴细胞能量相关基因(grail)，是参与t细胞能量诱导的rnf蛋白家族e3泛素连接酶。有研究表明，rnf128缺乏可促进cd8+t细胞簇的抗肿瘤免疫反应。此外，rnf128与p53相互作用，可以激活egfr/mapk/mmp-2通路，提高食管鳞状细胞的侵袭性和迁移能力。而在黑色素瘤中，rnf128通过与cd44泛素化有关的机制，调节wntβ-catenin信号传导，抑制上皮-间质转化(emt)。除此之外，有研究显示，rnf128表达下调与尿路癌和膀胱癌不良预后有关。有研究表明，在失能t细胞和hek293细胞中，rnf128可以作为coro1a的e3泛素连接酶介导coro1a的泛素化。那么能否通过泛素化修饰靶向coro1a，调节tev的生物发生进而影响肿瘤进展，在肿瘤进展中coro1a与rnf128的相关性，以及coro1a与rnf128的水平与肿瘤预后的关系仍然未知。
8、本课题组此前已发表专利cn 113262305 b，讨论coro1a基因作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用，但是没有揭示关于coro1a基因抗肿瘤的机理，抗肿瘤的机理在肿瘤治疗上很重要，需要根据抗肿瘤机理来针对性地进行靶向治疗方案的设计，因此coro1a作为靶点的抗肿瘤机理及其作用通路亟待更进一步研究，此外coro1a的其它相关作用，例如rnf128与coro1a的关联以及与肿瘤预后的关联、泛素化修饰靶向coro1a调节tev的生物发生等，也亟待更进一步研究与发现。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提出了一种coro1a作为靶点用于制备调控胞外囊泡分泌的用途，通过探究非类泛素化修饰的coro1a在胞外囊泡分泌中的调控作用，揭示了调控胞外囊泡分泌的新机制；通过将coro1a蛋白与调控胞外囊泡分泌的关键蛋白可溶性n-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(snare)复合体联系起来，为调控胞外囊泡分泌和肿瘤临床治疗提供的新的治疗靶点；发现肿瘤进展中促进coro1a泛素化修饰的e3连接酶，揭示其在调控肿瘤细胞胞外囊泡分泌中的功能，丰富coro1a蛋白在肿瘤进展过程中的调控功能及其分子机制，由此可得到多种靶点，能够调控胞外囊泡分泌和抗肿瘤免疫，应用前景广泛。
2、在本专利技术中所提到的evs主要指的是外泌体。本专利技术证实，coro1a正调控evs生物发生。通过促进mv本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.Coro1a作为靶点用于制备抑制多囊泡体和质膜融合从而治疗肿瘤的试剂的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述靶点包括Coro1a基因或Coro1a蛋白，所述Coro1a基因具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，所述Coro1a蛋白具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述Coro1a通过促进PKM2介导的SNAP-23磷酸化，诱导STX-12-SNAP-23-VAMP-7复合体的形成，来促进多囊泡体和质膜融合，所述SNAP-23蛋白具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，所述STX-12-SNAP-23-VAMP-7复合体中的STX-12蛋白具有如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，所述STX-12-SNAP-23-VAMP-7复合体中的VAMP-7蛋白具有如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述试剂包括抑制Coro1a蛋白活性的物质，或抑制Coro1a基因表达的物质，或Coro1a抗体，或抑制STX-12-SN
5.Coro1a作为靶点用于制备抑制STX-12-SNAP-23-VAMP-7复合体的组装从而治疗肿瘤的试剂的用途。
6.Coro1a作为靶点用于制备抑制SNAP-23磷酸化从而治疗肿瘤的试剂的用途。
7.Coro1a作为靶点用于制备抑制PKM2的介导SNAP-23磷酸化功能从而治疗肿瘤的试剂的用途。
8.RNF128作为靶点用于制备降低Coro1a水平从而治疗肿瘤的试剂的用途。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述靶点包括：RNF128基因或RNF128蛋白，所述RNF128基因具有如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列，所述RNF128蛋白具有如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。
10.如权利要求9所述用途，其特征在于，所述试剂包括促进RNF128蛋白活性的物质，或促进RNF128基因表达的物质，或抑制RNF128蛋白降解的物质。
...【技术特征摘要】
1.coro1a作为靶点用于制备抑制多囊泡体和质膜融合从而治疗肿瘤的试剂的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述靶点包括coro1a基因或coro1a蛋白，所述coro1a基因具有如seq id no.1所示的核苷酸序列，所述coro1a蛋白具有如seq id no.2所示的氨基酸序列。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述coro1a通过促进pkm2介导的snap-23磷酸化，诱导stx-12-snap-23-vamp-7复合体的形成，来促进多囊泡体和质膜融合，所述snap-23蛋白具有如seq id no.3所示的氨基酸序列，所述stx-12-snap-23-vamp-7复合体中的stx-12蛋白具有如seq id no.5所示的氨基酸序列，所述stx-12-snap-23-vamp-7复合体中的vamp-7蛋白具有如seq id no.6所示的氨基酸序列。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述试剂包括抑制coro1a蛋白活性的物质，或抑制coro1a基因表达的物质，或coro1a抗体，或抑制stx...
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