一种基于RPA-CRISPR/Cas12a检测大别山病毒的引物组及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测大别山病毒的引物组及其应用。本发明专利技术设计检测大别山病毒的引物组，利用SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物，不依赖大型仪器，恒温条件进行DNA扩增，利用SEQ ID NO.3所示的Cas12a结合引物结合Cas12a酶，对扩增后的产物进行识别和切割，同时还会激活其切割非特性单链DNA(ssDNA)切割活性，并对非特异性单链DNA(即探针)进行切割，利用试纸条对切割后产物进行检测即可判断是否存在大别山病毒。本发明专利技术提供的引物组能同时保证检测的灵敏度与特异性，快速检测大别山病毒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种基于rpa-crispr/cas12a检测大别山病毒的引物组及其应用。

技术介绍

1、大别山病毒(大别山汉坦病毒dabieshan orthohantavirus，dbsv)是新型蜱传病毒，属于布尼亚病毒科、汉坦病毒属，因其与汉坦病毒(hantan virus,htnv)亲缘关系较近，最初被认为是汉坦病毒的一个亚型，于2015年被国际病毒分类委员会(ictv)正式命名。近年来，新型蜱传病毒因其能诱发严重的人类疾病而受到了社会上的广泛关注。虽然dbsv对人类和动物的致病性尚不清楚，但dbsv可以进行跨物种传播，且dbsv与htnv亲缘性较近，所以人们怀疑dbsv参与了人类的发热性疾病。因此，迫切需要建立分子生物学和血清学检测方法对蜱虫及人畜群体中dbsv的流行情况进行调查研究。目前针对大别山病毒检测技术主要有以下三种：

2、(1)聚合酶链式反应(pcr)技术：目前检测dbsv所使用的pcr方法包括普通pcr，巢式pcr，实时荧光定量pcr。但pcr技术在应用上仍有一定的局限。pcr作为目前的确诊手段，必须在具有复杂本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于RPA-CRISPR/Cas12a检测大别山病毒的引物组，其特征在于，所述引物组包括上游引物、下游引物、Cas12a结合引物以及探针；

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述探针的核苷酸序列包括5’-TTATTATT-3’；所述荧光标记包括FAM或FITC。

3.权利要求1或2所述的引物组在制备检测大别山病毒的试剂盒中的应用。

4.一种检测大别山病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的引物组，还包括Cas12a酶、逆转录酶、醋酸镁溶液和缓冲液中的一种或多种。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的...

【技术特征摘要】

1.一种基于rpa-crispr/cas12a检测大别山病毒的引物组，其特征在于，所述引物组包括上游引物、下游引物、cas12a结合引物以及探针；

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述探针的核苷酸序列包括5’-ttattatt-3’；所述荧光标记包括fam或fitc。

3.权利要求1或2所述的引物组在制备检测大别山病毒的试剂盒中的应用。

4.一种检测大别山病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的引物组，还包括cas12a酶、逆转录酶、醋酸镁溶液和缓冲液中的一种或多种。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的上游引物的独立浓度为10μm；所述下游引物的独立浓度为10μm；所述cas12a结合引物的独立浓度为1μm；所述探针的独立浓度为1.5μm。

6.一种非诊断目的的检测大别山病毒的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈泽良，韩小虎，范首东，崔扬书翰，张燚，焦洋，祁安东，
申请(专利权)人：东沃同泰凤城生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：