体内监测ＨＢＶ特异性ＣＴＬｓ功能的报告基因标记的小鼠模型及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种体内监测ＨＢＶ特异性ＣＴＬｓ功能的报告基因标记的小鼠模型及其构建方法与应用。其构建方法包括以下步骤：１）载体构建：构建包括ＨＢＶ启动子、报告基因和ＨＢＶ全基因组的重组表达载体；２）将步骤１）构建的重组表达载体转染到小鼠体内，得到体内监测ＨＢＶ特异性ＣＴＬｓ功能的报告基因标记的小鼠模型。本发明专利技术建立了一种简便易行，稳定可重复的可视化小鼠模型，该模型可用于监测ＨＢＶ特异性ＣＴＬｓ的杀伤性和非杀伤性功能。此外，本发明专利技术用成年小鼠采用水动力转染方法建立小鼠模型，不需要特殊仪器，具有研究周期短、花费小、目的基因在肝脏特异长期稳定表达，且具有表达量高等优点，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
中的动物模型及其构建方法，特别是涉及一种体内监 测HBV特异性CTLs功能的报告基因标记的小鼠模型及其构建方法与其在监测HBV特异性 CTLs的杀伤性和非杀伤性功能中的应用。
技术介绍
乙型肝炎病毒Ofepatitis B Virus, HBV)的感染严重影响着人类的健康，它能够 引起急、慢性病毒性肝炎。急性感染后，有5-10%的成年人发展为持续感染，最终可以导致 慢性肝炎、肝硬化和肝癌。目前，全球约有3. 5亿乙型肝炎病毒慢性感染者，尽管现有的疫 苗能够有效的预防乙型肝炎病毒，但不能治疗已经感染的患者。已有的研究表明机体针对病毒所产生的特异性细胞免疫应答可能是清除机体内 病毒的重要因素。目前认为机体内病毒特异性细胞毒T淋巴细胞清除乙肝病毒主要是通 过两条途径实现即胞毒途径和非溶胞途径。胞毒途径是指机体针对HBV编码产物所产生 的特异性T淋巴细胞借助其分泌的穿孔素、颗粒酶、α肿瘤坏死因子及其表面表达的Fas配 体等介质摧毁感染病毒的靶细胞。在这条途径中特异性T淋巴细胞在清除病毒的同时也将 导致靶细胞的裂解。非溶胞途径是指机体针对HBV编码产物所产生的特异性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体内监测ＨＢＶ特异性ＣＴＬｓ功能的报告基因标记的小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：　　１）载体构建：构建包括ＨＢＶ启动子、报告基因和ＨＢＶ全基因组的重组表达载体；　　２）将步骤１）构建的重组表达载体转染到小鼠体内，得到体内监测ＨＢＶ特异性ＣＴＬｓ功能的报告基因标记的小鼠模型。

【技术特征摘要】
一种体内监测HBV特异性CTLs功能的报告基因标记的小鼠模型的构建方法，包括以下步骤1)载体构建构建包括HBV启动子、报告基因和HBV全基因组的重组表达载体；2)将步骤1)构建的重组表达载体转染到小鼠体内，得到体内监测HBV特异性CTLs功能的报告基因标记的小鼠模型。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于所述步骤1)中的HBV启动子为四个 基本启动子spl、sp2、核心启动子(cp)、xp与HBV两个增强子(EnhI和EnhII)的所有可能的 组合；所述报告基因为可活体成像的所有已知报告基因，如荧光素酶报告基因Flue、GLuc ； 所述HBV全基因组为HBV 1. 2倍、1. 3倍、1. 5倍、2. 0倍基因组。3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于所述步骤1)中的HBV全基因组 位于报告基因的下游。4.根据权利要求1或2或3或4所述的构建方法，其特征在于所述步骤1)中 用于构建重组表达载体的出发载体为真核表达载体PGL3、pQE或pCI-neo ；以pGL3为 出发载体，构建的携带HBV启动子、Fluc报告基因和HBV全基因组的重组表达载体为 pGL3-CP-Fluc-HBVl. 2，其序列如序列表中序列1所示。5.根据权利要求1或2或3或4所述的构建方法，其特征在于所述步骤2)将重组表 达载体转染小鼠前还包括对重组表达载体进行纯化的步骤。6.根据权利要求1或2或3或4或5所述的构建方法，其特征在于所述步骤2)中的 小...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹林盛，杜娟，梁声强，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所，
类型：发明
国别省市：11[]