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【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生命科学和生物,特别涉及检测prrt2基因移码突变的引物,采用普通pcr结合sanger测序技术,可用于快速检测基因组dna的prrt2基因移码突变情况。
技术介绍
1、prrt2基因包含4个外显子,其中2、3、4外显子编码具有特殊拓扑结构的ii型跨膜蛋白,由340个氨基酸组成,n端富含脯氨酸,含2个氨基酸残基的c端位于胞外,还存在2个跨膜区域和1小段的胞内区域。prrt2蛋白是一种中枢神经系统特异表达的膜蛋白,主要表达于中枢神经系统神经元的突触前膜。提到prrt2基因通常考虑肌张力不全(dystonia,dyt),发作性运动障碍(pkd,paroxysmal kinesigenic dyskinesia)、良性家族性婴儿癫痫(bfie)、婴儿惊厥伴阵发性舞蹈症(icca)、散发性良性婴儿癫痫(bie)、热性惊厥(fs,febrile seizures)和幼儿肌阵挛性癫痫(ecme)等疾病,主要由于prrt2基因的突变导致snare复合物(soluble n-ethylmaleimide-sensitive factor attachment proteinreceptor)调节功能的丧失,使神经递质释放失调,导致各种异常。
2、另外有大量报导prrt2基因和癌症相关。dna错配修复(mmr)系统在癌症中有重要地位,因为这个系统正常的情况下能纠正dna复制错误从而维持基因组的稳定性。mmr缺乏在胆管癌中有观察到,但其对这些肿瘤基因组的影响尚不清楚。为了识别胆管癌中mmr相关突变情况对基因组进行了全基因组测
3、sanger测序法是基因检测的主要手段之一,也是基因检测的金标准。通过测序法对prrt2基因突变进行检测可发现prrt2基因已知和未知的全部类型的异常,为临床治疗、用药提供依据。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种检测prrt2基因的c.748c位点移码突变的引物,采用pcr技术,可用于快速检测基因组dna的prrt2基因移码突变情况。所述检测prrt2基因的c.748c位点移码突变的引物,包括:
2、扩增prrt2基因的c.748c位点的引物,其碱基序列为:
3、seq1-f:agacaggaatgtggcccaa
4、seq1-r:ccagaggctctattgcagcg;
5、进一步地,还包括测序引物,其碱基序列为:
6、seq2-f:tgtaaaacgacggccagt
7、seq2-r:aacagctatgaccatg;
8、本专利技术还提供了检测检测prrt2基因的c.748c位点移码突变的方法,包括以下步骤:
9、1.抽提外周血中的基因组dna;
10、2.用pcr扩增步骤1中提取的dna;
11、3.对步骤2中的扩增产物进行测序;
12、4.对测序结果进行判断,确定检测prrt2基因的c.748c位点是否发生移码突变;
13、其中pcr扩增引物为:
14、扩增prrt2基因的c.748c位点的引物,其碱基序列为:
15、seq1-f:agacaggaatgtggcccaa
16、seq1-r:ccagaggctctattgcagcg;
17、进一步地,还包括测序引物,其碱基序列为:
18、seq2-f:tgtaaaacgacggccagt
19、seq2-r:aacagctatgaccatg;
20、本专利技术还提供了一种检测prrt2基因的c.748c位点的试剂盒,包括:
21、(i)血液基因组dna抽提试剂;
22、(ii)检测体系pcr扩增反应液:包括扩增prrt2基因的c.748c位点的引物,其碱基序列为:
23、seq1-f:agacaggaatgtggcccaa
24、seq1-r:ccagaggctctattgcagcg;
25、(iii)测序体系试剂:包括测序引物,其碱基序列为:
26、seq2-f:tgtaaaacgacggccagt
27、seq2-r:aacagctatgaccatg;
28、(iv)阳性对照品和阴性对照品。
29、本专利技术还提供了一种引物在制备检测prrt2基因的c.748c位点移码突变的试剂盒中的应用,所述引物包括:
30、seq1-f:agacaggaatgtggcccaa
31、seq1-r:ccagaggctctattgcagcg。
32、进一步地,还包括测序引物,其碱基序列为:
33、seq2-f:tgtaaaacgacggccagt
34、seq2-r:aacagctatgaccatg。
35、有益效果:本专利技术只用1对引物,检测prrt2基因c.748delc突变,高效简便。其中还发现了c.748delc是一个新突变(未见文献报道,属首次发现),在本次检测中胆管癌样本都出现了这个改变而正常对照样本中没有发现,并且由于c.748delc突变导致其后的氨基酸发生移码突变。本专利技术采用pcr技术,通过调整引物浓度、退火温度等反应条件,可使扩增效率达到最佳,构建了稳定的扩增体系。相比较荧光定量pcr法降低了检测的成本和难度,荧光定量pcr法要针对不同的突变类型设计探针,成本高,检测难度大。
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1.一种引物在制备检测PRRT2基因的c.748C位点移码突变的试剂盒中的应用,其特征在于,包括:
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,还包括测序引物,其碱基序列为:SEQ2-F:TGTAAAACGACGGCCAGT
3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述试剂盒包括:
【技术特征摘要】
1.一种引物在制备检测prrt2基因的c.748c位点移码突变的试剂盒中的应用,其特征在于,包括:
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,...
【专利技术属性】
技术研发人员:王淑一,王彪,
申请(专利权)人:福州艾迪康医学检验实验室有限公司,
类型:发明
国别省市:
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