【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种核酸提取-扩增方法。
技术介绍
1、核酸作为一种分子标志物已被广泛的用于疾病诊断，食品安全检测和环境监测领域。核酸检测过程包括了核酸样本的提取纯化、扩增以及检测信号的产生等主要步骤。常规的检测技术中这些步骤需要分别在独立的操作空间内完成，对检测场地和人员的要求较高，存在成本昂贵，耗时耗力等缺点。同时，在进行多个样本检测时，核酸提取和扩增步骤采取并行处理方式，容易引起不同样本之间的交叉污染、核酸扩增产物的逸散等，导致检测结果的偏差。
2、国内现有的磁珠法提取试剂，其磁珠的制备方法繁琐复杂，合成的磁珠在用于核酸提取时需要结合、孵育至少两次以上，才能用于下一步检测。磁珠往往因其影响后期反应的进行而不能跟随核酸样本进入扩增阶段，需要在此之前加入特定溶液洗脱使得目标核酸与磁珠脱离，并进一步清洗杂质，过程繁琐，程序复杂，并不能真正减少核酸提取过程的时间，且易造成交叉污染，影响后续检测。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种核酸提取-扩增方法，以解决核酸在提取、扩增过程中需要多次移管和污染核酸的问题。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
3、本专利技术提供了一种核酸提取-扩增方法，包括如下具体步骤：
4、步骤一：将待测核酸样品加入混合有磁珠的裂解液中，混匀，室温静置5-10分钟；将离心管放置在磁力架上，磁吸固定磁珠，除去裂解液；
5、步骤二：将离心管从磁力架上取下，将洗涤液加入离
6、步骤三：最后将pcr反应液加入离心管中，混匀，置于pcr仪器中，进行扩增反应；
7、上述磁珠通过如下步骤制备：
8、步骤s1：在0℃下，将4-醛基苯甲酸、4-二甲氨基吡啶、催化剂和壳聚糖/醋酸溶液加入二氯甲烷中，置于冰水浴中搅拌，升温至室温搅拌，离心过滤，真空干燥得到改性壳聚糖；
9、步骤s2：将fecl3·6h20、feso4·7h20和改性壳聚糖/乙酸溶液加入氢氧化钠溶液中，氮气保护，50℃下反应，磁性分离，洗涤；加入戊二醛溶液中继续反应，洗涤，真空干燥得到磁珠。
10、进一步地，催化剂为二环己基碳二亚胺、n-羟基丁二酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐中的一种。
11、进一步地，步骤s1中4-醛基苯甲酸、4-二甲氨基吡啶、催化剂、壳聚糖/醋酸溶液和二氯甲烷的用量比为0.5g：0.1g：1.5g：15ml：30ml。
12、进一步地，步骤s2中fecl3·6h20、feso4·7h20、改性壳聚糖/乙酸溶液、氢氧化钠溶液和戊二醛溶液的用量比为1.5g：0.6g：15m：60ml：50ml。
13、进一步地，步骤s1中壳聚糖/醋酸溶液，壳聚糖和醋酸溶液的用量比为1g：30ml。
14、本专利技术的有益效果：
15、本专利技术首先通过席夫碱反应，在壳聚糖上接枝了4-醛基苯甲酸，使其壳聚糖具有一定的疏水效果，避免团聚现象使壳聚糖很好地分散在溶剂中，进一步增强壳聚糖对核酸的吸附效应，提高核酸提取、扩增的效率；且席夫碱反应中产生的动态亚胺键，使得壳聚糖具有一定的自愈合效果，延长其在核酸提取-扩增反应体系中的使用时间。
16、本方法中使用改性壳聚糖包覆磁珠在应用于核酸的提取过程中，可以直接将吸附有核酸的磁珠进行扩增反应，无需进行洗脱步骤，不仅大大地缩短了核酸提取的时间，也有效地避免了样本之间交叉污染的可能性以及扩增产物的逸散，而且降低了核酸在洗脱过程中的损失，极大地简化了整个提取流程，提高了检测结果的准确性。
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1.一种核酸提取-扩增方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种核酸提取-扩增方法，其特征在于，催化剂为二环己基碳二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种核酸提取-扩增方法，其特征在于，步骤S1中4-醛基苯甲酸、4-二甲氨基吡啶、催化剂、壳聚糖/醋酸溶液和二氯甲烷的用量比为0.5g：0.1g：1.5g：15mL：30mL。
4.根据权利要求1所述的一种核酸提取-扩增方法，其特征在于，步骤S2中FeCl 3·6H20、FeSO4·7H20、改性壳聚糖/乙酸溶液、氢氧化钠溶液和戊二醛溶液的用量比为1.5g：0.6g：15m：60mL：50mL。
5.根据权利要求1所述的一种核酸提取-扩增方法，其特征在于，步骤S1中壳聚糖/醋酸溶液，壳聚糖和醋酸溶液的用量比为1g：30mL。
【技术特征摘要】
1.一种核酸提取-扩增方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种核酸提取-扩增方法，其特征在于，催化剂为二环己基碳二亚胺、n-羟基丁二酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种核酸提取-扩增方法，其特征在于，步骤s1中4-醛基苯甲酸、4-二甲氨基吡啶、催化剂、壳聚糖/醋酸溶液和二氯甲烷的用量比为0.5g：0.1g...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘宗文，雍金贵，刘奇，高恩，潘红，
申请(专利权)人：安徽瑞拜药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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