与CD116和CD131结合的双特异性抗体制造技术

技术编号：40948443 阅读：4 留言：0更新日期：2024-04-18 20:22

本发明专利技术的目的在于提供一种对于GM‑CSF受体具有激动剂活性的双特异性抗体、该双特异性抗体片段。本发明专利技术涉及一种双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其包含第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域，上述第一抗原结合结构域和上述第二抗原结合结构域中的任意一者为与CD116结合的抗原结合结构域，另一者为与CD131结合的抗原结合结构域。

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【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本专利技术涉及一种包含与cd116和cd131结合的抗原结合结构域的双特异性抗体、该双特异性抗体片段、编码该双特异性抗体或该双特异性抗体片段的dna、包含该dna的载体、生产该双特异性抗体或该双特异性抗体片段的杂交瘤和转化株、该双特异性抗体或该双特异性抗体片段的制造方法、包含该双特异性抗体或双特异性抗体片段的治疗和诊断药物、使用该双特异性抗体或双特异性抗体片段的治疗和诊断方法、以及包含该双特异性抗体或该双特异性抗体片段的检测或测定用试剂。

技术介绍

1、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony-stimulatingfactor，gm-csf)是由127个氨基酸残基组成的约22kda的糖蛋白，它是作用于髓系祖细胞，促进分化和增殖的因子。对于永久造血而言并不是必须的，但对于肺泡巨噬细胞的分化是不可或缺的。

2、实际上，在利用gm-csf敲除动物的分析中，已有报道称，中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞等血细胞虽然是正常的，但仍发现肺泡巨噬细胞的成熟障碍，肺表面活性物质处理产生异常(非专利文献1)。

3、gm-csf通过与在细胞膜上表达的gm-csf受体特异性结合来发挥其的生理作用。gm-csf受体在中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和这些细胞的祖细胞中表达。gm-csf受体是由α链(cd116)和βc链(commonβ链，cd131)这两种亚基构成的异源多聚体。

4、cd116和cd131均为单次跨膜蛋白，属于细胞因子受体超家族。cd116

5、cd131的胞内区上结合有作为信号转导分子的jak2，jak2/stat5途径、ras/map激酶途径、pi-3激酶途径被jak2和cd131胞内区酪氨酸残基的磷酸化激活，作用于细胞的存活及增殖、分化和激活。

6、在稳态状态下，cd116和cd131分别存在于细胞膜上。当cd116和cd131用作gm-csf受体时，首先，gm-csf与cd116特异性结合。仅cd116时，对gm-csf的亲和力低，但加入cd131后，则以高亲和力结合，形成复合物，这表明由特殊的激活机制进行信号转导。图1中示意性示出该机制。

7、如图1所示，cd131在稳态状态下形成了二聚物，cd131分子分别经过与gm-csf和cd116结合而形成六聚物。但是，在六聚物的状态下，cd131的跨膜区的距离为左右，jak2之间的距离远，信号无法流通。此外，通过该六聚物两个组合形成十二聚物，使得十二聚物中的cd131的跨膜区间的距离为左右，jak2之前的距离变短，从而可以实现相互磷酸化，jak2和cd131胞内区酪氨酸残基产生磷酸化，实现信号转导(非专利文献2、3)。

8、目前，有报道称，有疾病是因在患者体内对于gm-csf产生过剩的自体抗体，导致gm-csf被中和，从而发病的。例如，在获得性肺泡蛋白沉积症中，发现了高频率且高浓度的抗gm-csf自体抗体(非专利文献4、5)。肺泡蛋白沉积症是一种肺表面活性物质在肺泡腔内异常沉积导致呼吸困难的疾病，一般认为，gm-csf被自体抗体中和，抑制肺泡巨噬细胞的分化，从而导致肺表面活性物质的处理产生了异常。另外，有报道指出，克罗恩病中也发现了抗gm-csf自体抗体，其参与了发病(非专利文献6、7)。

9、重组gm-csf制剂在欧洲、北美、澳洲等在20世纪90年代被批准作为医药品销售，它被用作针对癌症化疗后的骨髓抑制、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、骨髓移植后促进定植等的皮下注射剂。具有来自大肠杆菌的molgramostim和来自酵母的sargramostim这两种制剂，两者未发现显著的活性差异(非专利文献8)。尝试了使用这些制剂来治疗肺泡蛋白沉积症和克罗恩病，特别是对于肺泡蛋白沉积症，报道称具有治疗效果(非专利文献9、10)。

10、已有报道指出通过gm-csf分子的氨基酸改造来降低自体抗体所导致的中和的示例，但其效果甚微(非专利文献11)。另外，作为虽然具有与gm-csf同样经由gm-csf受体来接收信号的性质，但作为分子与gm-csf完全不同的gm-csf模拟物，已报道了通过接头连接受体结合肽的研究(专利文献1)。

11、现有技术文献

12、专利文献

13、专利文献1：国际公开第2018/227142号

14、专利文献2：国际公开第2017/021540号

15、非专利文献

16、非专利文献1：proc.natl.acad.sci.usa,91,5592-5596(1994)

17、非专利文献2：cell,134,496-507(2008)

18、非专利文献3：cytokine,74,247-258(2015)

19、非专利文献4：j.exp.med.,190,875-880(1999)

20、非专利文献5：blood,113,2547-2556(2009)

21、非专利文献6：gastroenterology,136,1261-1271(2009)

22、非专利文献7：inflamm.bowel dis.,19,1671-1680(2013)

23、非专利文献8：eur j haematol.,55,348-356(1995)

24、非专利文献9：n engl j med.,381,923-932(2019)

25、非专利文献10：n engl j med.,352,2193-2201(2005)

26、非专利文献11：protein eng des sel.,28,461-466(2015)

27、非专利文献12：blood,103,1089-1098(2004)

28、非专利文献13：ebiomedicine,30,730-743(2015)

技术实现思路

1、专利技术要解决的问题

2、过去一直研究的gm-csf受体结合肽中存在药效不充分的课题，考虑其原因在于，由于gm-csf受体结合肽来自gm-csf序列，因此会被患者的自体抗体中和。考虑到针对gm-csf的自体抗体是针对gm-csf的各种表位所产生的(非专利文献12)，因此认为难以通过给药肽的分子改造来解决患者的自体抗体对gm-csf受体肽的中和。

3、另一方面，还表明了，不仅是对于促红细胞生成素受体和生长激素受体之类的由同型二聚物组成的受体，对于白细胞介素2(il-2)受体、成纤维细胞生长因子(fgf)受体和β-klotho蛋白复合物等由异源二聚物(多聚物)组成的受体，也可以通过使用双特异性抗体来获得激动剂(非专利文献13、专利文献2)。但是，目前对于gm-csf受体激动剂尚未进行报道。如上所述，由于gm-cs本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其包含第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域，

2.根据权利要求1所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

4.根据权利要求1～3中任一项所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

5.根据权利要求1～4中任一项所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

6.根据权利要求1～5中任一项所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

7.根据权利要求1～6中任一项所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

8.根据权利要求1～7中任一项所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

9.根据权利要求1～8中任一项所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

10.根据权利要求1～9中任一项所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

11.根据权利要求10所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

12.根据权利要求

13.根据权利要求10所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

14.根据权利要求11～13中任一项所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

15.根据权利要求1～14中任一项所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

16.根据权利要求1～15中任一项所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

17.根据权利要求13或14所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

18.根据权利要求17所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段，其中，

19.一种DNA，其编码权利要求1～18中任一项所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段。

20.一种重组体载体，其含有权利要求19所述的DNA。

21.一种转化株，其通过将权利要求20所述的重组体载体导入宿主细胞而得到。

22.一种GM-CSF参与的疾病的治疗和/或诊断药物，其含有权利要求1～18中任一项所述的双特异性抗体或该双特异性抗体片段作为有效成分。

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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】