【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗体领域，具体涉及一种针对白介素家族成员的新型纳米抗体及其产品和应用。
技术介绍
1、白细胞介素17(il-17)细胞因子家族由6个成员组成，命名为il-17a-f，通过二硫键组装成活性细胞因子同源二聚体。此外，相近的成员，如il-17a和il-17f，通常在细胞中共表达，可以形成异源二聚体细胞因子il-17a/f(il-17af)。il-17a的失调表达引起自身免疫性疾病，例如银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎和非放射学检查轴性脊柱炎等。
2、该家族中最具代表性的成员il-17a，在机体受感染或损伤处，迁移过来的淋巴细胞会分泌il-17a。il-17a一方面会诱导炎症因子以及趋化因子的表达，从而招募更多的免疫细胞到达炎症部位加剧机体的炎症反应，另一方面，il-17a还会诱导一些组织修复相关因子的表达从而加速机体的恢复。虽然il-17a在宿主抗感染和组织修复过程中起到扩大免疫防御反应保护自身机体的作用，但是，在很多自身免疫病病人和肿瘤病人当中，il-17a又是高表达的，由于它可以诱导很多炎症因子的表达，过高的il-17a水平对于疾病的病理发展起到恶化作用。在自身免疫病治疗中，传统治疗存在起效较慢、依从性差等缺点，il-17a缺失或者抗体中和il-17a，可以有效的抑制多种自身免疫病病理程度。
3、单域抗体(singledomain antibody，sdab)，又称纳米抗体(nanobody)，纳米抗体只包含一个重链可变区(vhh)和ch2、ch3区，相比于普通的抗体，纳米抗
4、单域抗体因具备传统抗体不具备的小分子质量和强穿透性的优势，被认为在疾病诊断与治疗、病原检测、药物残留分析、环境监测等领域具有巨大的应用潜力，在基因工程与adc药物研发、体外诊断技术(胶体金法、酶联免疫吸附法、电化学发光法)、肿瘤及免疫学研究等方面也已取得一些新的研究。
5、专利cn 114920838 a使用生物基因工程技术筛选出特异性针对il17a的单域抗体，抗体亲和力较好，并且能阻断特定细胞释放细胞因子，通过原核表达及真核表达均具有良好的结合活性，具有一定的成药性。目前针对il-17a的治疗性抗体正处于研发之中，仍需开发其他的抗体应用于临床研究，鉴于以上单域抗体的优势，研发il17a单域抗体能够克服传统抗体的缺点，具有广阔的应用前景。
6、本专利技术系专利技术人针对自主开发的抗il-17a抗体所提出的专利申请。
7、除本专利技术请求保护的抗体外，专利技术人同时开发出另外8个抗体，基于专利法单一性的相关规定，对9个不同抗体分别请求保护。
8、专利技术人还根据这9个抗体开发了12个串联抗体，基于专利法单一性的相关规定，对12个不同的串联抗体分别请求保护。
9、专利技术人还根据这12个串联抗体，开发了基因修饰干细胞技术，基于专利法单一性的相关规定，对3个不同的基因修饰干细胞以及3项不同的应用分别请求保护。
10、为便于理解本专利技术，可选地参阅本项目其他系列申请文本。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种靶向il-17a的特异性抗体及其用途。该单域抗体易表达，亲和力和阻断效果好，稳定性强。
2、术语：
3、本专利技术中，单域抗体(纳米抗体)为其互补决定区是单域多肽的一部分的抗体。因此，单域抗体包含单个互补决定区。单域抗体为仅有重链的抗体，该抗体天然不包含轻链，衍生自常规抗体的单域抗体和工程化抗体。单域抗体可以衍生自任何物种，包括小鼠、人、骆驼、美洲驼、山羊、兔和牛。例如，天然存在的vhh分子可以衍生自骆驼科物种(例如骆驼、单峰骆驼、美洲驼和原驼)提供的抗体。像完整的抗体一样，单域抗体能够选择性地结合特定抗原。单域抗体可以仅含有免疫球蛋白链的可变结构域，该结构域具有cdr1、cdr2和cdr3以及框架区。
4、本专利技术中，抗il-17a的单域抗体不仅包括完整的单域抗体，还包括所述抗il-17a的单域抗体的片段、衍生物和类似物。其中，片段、衍生物和类似物含义相同，均是指基本上保持本专利技术抗体相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术的多肽片段、衍生物或类似物可以是有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列，或与fc标签形成的融合蛋白)。
5、本专利技术中，cdr(complementarity-determining regions，cdr)叫做互补决定区或互补决定簇。它位于免疫球蛋白的超变区，超变区是抗体的抗原结合位，与抗原决定簇的结构互补。一般包括cdr1、cdr2、cdr3。本领域技术人员应当理解的是，除非另有规定，否则术语给定抗体或其区(例如可变区)的“cdr”及“互补决定区”应理解为涵盖如通过本专利技术描述的上述已知方案中的任何一种界定的互补决定区。虽然本公开请求保护的范围是基于imgt定义规则所示出的序列，但是根据其他cdr定义规则所对应的氨基酸序列也应当落在本专利技术的保护范围中。
6、本专利技术中，可变区指免疫球蛋白轻链和重链靠近n端氨基酸序列变化较大的区域称为可变区。
7、本专利技术中，序列同源性表示两个(核苷酸或氨基酸)序列在比对中在相同位置处具有相同残基的程度，并且通常表示为百分数。优选地，同源性在被比较的序列的整体长度上确定。因此，具有完全相同序列的两个拷贝具有100％同源性。在一些实施例中，与前述序列相比仅仅替换一个或少数几个氨基酸的序列，例如，包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个保守氨基酸取代，也可以实现专利技术目的。这些变异形式包括但并不限于：一个或多个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在c末端和/或n末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。实际上，在确定两个氨基酸序列之间的序列同源性程度或在确定单域抗体中的cdr1、cdr2和cdr3组合时，技术人员可以考虑所谓的“保守”氨基酸取代，在取代情况下，所述取代将优选为保守氨基酸取代。所述保守氨基酸，其通常可以被描述为氨基酸残基被具有相似化学结构的另一个氨基酸残基替代的氨基酸取代，并且该取代对多肽的功能、活性或其它生物学性质几乎没有或基本上没有影响。所述保守氨基酸取代在本领域是通用本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体，其特征在于，所述的抗体的氨基酸序列包含下述(a)和/或(b)：
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述的氨基酸序列包含：通过在SEQ IDNO.1-SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰或取代中的一种或多种方式获得的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述的氨基酸序列包含：与SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸差异的氨基酸序列。
4.一种抗体，其特征在于，所述的抗体的氨基酸序列包含下述(a)和/或(b)：
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于，所述的氨基酸序列包含：通过在SEQ IDNO.4-SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰或取代中的一种或多种方式获得的氨基酸序列。
6.根据权利要求5所述的抗体，其特征在于，所述的氨基酸序列包含：与SEQ ID NO.4-SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12
7.一种抗体，其特征在于，所述的抗体的氨基酸序列包含下述(a)和(b)：
8.一种抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列包含：
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
10.根据权利要求8或9所述的抗体，其特征在于，所述FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，所述FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
11.根据权利要求10所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的氨基酸序列如SEQ IDNO.8所示。
12.根据权利要求1-11任一项所述的抗体，其特征在于，所述的抗体为单域抗体。
13.根据权利要求1-12任一项所述的抗体，其特征在于，所述的抗体为抗IL-17A抗体。
14.根据权利要求1-14任意一项所述的抗体，其特征在于，包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
15.一种多克隆抗体，其特征在于，包含权利要求1-14所述的抗体。
16.一种重组蛋白，其特征在于，包含权利要求1-14所述的抗体。
17.根据权利要求16所述的重组蛋白，其特征在于，还包括协助其表达和/或分泌，或延长其在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段；
18.根据权利要求17所述的重组蛋白，其特征在于，所述生物活性蛋白或其功能片段为人免疫球蛋白Fc结构域，优选人IgG的Fc结构域，如人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的Fc结构域，更优选人IgG1的Fc结构域。
19.一种抗体制剂，其特征在于，所述抗体制剂包括权利要求1-14所述的抗体。
20.根据权利要求19所述的抗体制剂，其特征在于，所述抗体制剂还包括药学上可接受的载剂。
21.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-14任一项所述的抗体或权利要求15所述的多克隆抗体或权利要求16-18任一项所述的重组蛋白或权利要求19-20任一项所述的抗体制剂。
22.一种抗体药物偶联物，其特征在于，其包括下述(a)和(b)：
23.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1-14任一项所述的抗体或权利要求15所述的多克隆抗体或权利要求16-18任一项所述的重组蛋白。
24.一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体包含权利要求23所述的核酸分子。
25.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞的基因组整合有权利要求22所述的核酸分子；或包含权利要求24所述的表达载体。
26.一种药物组合物，其特征在于：所述的药物组合包含权利要求1-14任一项所述的抗体或权利要求15所述的多克隆抗体或权利要求16-18任一项所述的重组蛋白或权利要求19-20任一项所述的抗体制剂或权利要求22所述的抗体药物偶联物或权利要求23所述的核酸分子或权利要求24所述的表达载体或权利要求25所...
【技术特征摘要】
1.一种抗体，其特征在于，所述的抗体的氨基酸序列包含下述(a)和/或(b)：
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述的氨基酸序列包含：通过在seq idno.1-seq id no.3所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰或取代中的一种或多种方式获得的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述的氨基酸序列包含：与seq id no.1-seq id no.3所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸差异的氨基酸序列。
4.一种抗体，其特征在于，所述的抗体的氨基酸序列包含下述(a)和/或(b)：
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于，所述的氨基酸序列包含：通过在seq idno.4-seq id no.7所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰或取代中的一种或多种方式获得的氨基酸序列。
6.根据权利要求5所述的抗体，其特征在于，所述的氨基酸序列包含：与seq id no.4-seq id no.7所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38个氨基酸差异的氨基酸序列。
7.一种抗体，其特征在于，所述的抗体的氨基酸序列包含下述(a)和(b)：
8.一种抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列包含：
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述hcdr1的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述hcdr2的氨基酸序列如seq id no.2所示，所述hcdr3的氨基酸序列如seq id no.3所示。
10.根据权利要求8或9所述的抗体，其特征在于，所述fr1的氨基酸序列如seq id no.4所示，所述fr2的氨基酸序列如seq id no.5所示，所述fr3的氨基酸序列如seq id no.6所示，所述fr4的氨基酸序列如seq id no.7所示。
11.根据权利要求10所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的氨基酸序列如seq idno.8所示。
12.根据权利要求1-11任一项所述的抗体，其特征在于，所述的抗体为单域抗体。
13.根据权利要求1-12任一项所述的抗体，其特征在于，所述的抗体为抗il-17a抗体。
14.根据权利要求1-14任意一项所述的抗体，其特征在于，包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
15.一种多克隆抗体，其特征在于，包含权利要求1-14所述的抗体。
16.一种重组蛋白，其特征在于，包含权利要求1-14所述的抗体。
17.根据权利要求16所述的重组蛋白，其特征在于，还包括协助其表达和/或分泌，或延长其在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段；
18.根据权利要求17所述的重组蛋白，其特征在于，所述生物活性蛋白或其功能片段为人免疫球蛋白fc结构域，优选人igg的fc结构域，如人igg1、igg2、igg3、igg4的fc结构域，更优选人igg1的fc结构域。
19.一种抗体制剂，其特征在于，所述抗体制剂包括权利要求1-14所述的抗体。
20.根据权利要求19所述的抗体制剂，其特征在于，所述抗体制剂还包括药学上可接受的载剂。
21.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-14任一项所述的抗体或权利要求15所述的多克隆抗体或权利要求16-18任一项所述的重组蛋白或权利要求19-20任一项所述的抗体制剂。
22.一种抗体药物偶联物，其特征在于，其包括下述(a)和(b)：
23.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1-14任一项所述的抗体或权利要求15所述的多克隆抗体或权利要求16-18任一项所述的重组蛋白。
24.一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体包含权利要求23所述的核酸分子。
25.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞的基因组整合有权利要求22所述的核酸分子；或包含权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘拥军，刘广洋，李欣，陈瑶瑶，龙浩淼，苗丽，
申请(专利权)人：北京贝来药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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