【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多肽药物制备领域，具体涉及一种美拉诺坦-ii的液相合成方法。
技术介绍
1、性功能障碍(erectile dysfunction,ed)是男性的常见病、多发病。由美国亚利桑那大学医学院研究开发一种促黑素细胞激素的环肽类似物美拉诺坦-ii，可在不受任何刺激的情况下调节中枢神经系统，诱发勃起，治疗ed效果明显。美拉诺坦-ii是一种合成的环七肽，它含有acth和msh共同的黑皮质素受体结合区，是一种非特异性mcr激动剂，在器质性和心因性勃起功能障碍的男性中起作用，不仅仅适合男性，对女性亦有促进性欲的作用。美拉诺坦-ii常以恶心和打哈欠作为常见的副反应，其中严重恶心的发生率为15.3％。使用美拉诺坦-ii增加性欲的观察是新颖的，值得进一步研究，研究定位作用部位和受体亚型介导黑素瘤ii的作用可能会是靶向治疗ed。
2、美拉诺坦-ii的化学结构式如下所示：
3、
4、2006年，专利cn101195654b报道了使用固相多肽合成法制备美拉诺坦-ii的方法，该合成路线包含以下步骤：作者将asp和lys两个氨基酸所使用的侧链保护基为-ome和-tfa。首先，使用fmoc-linker amide am resin作为载体树脂，然后按照fmoc固相多肽合成法将氨基酸序列由c端向n端依次偶联，得到全保护线性美拉诺坦-ii。接下来，使用naoh的二氧六环溶液脱除氨基酸上的-ome和-tfa侧链保护基，在缩合剂存在的条件下直接在树脂上成环。最后，在三氟乙酸的条件下将多肽序列从树脂上裂解下来，并脱除所有氨
技术实现思路
1、基于以上现有存在的技术问题，本专利技术的目的在于提供一种美拉诺坦-ii的液相合成方法，该方法结合了经典液相多肽合成和固相多肽合成两个方法的优点，在偶联与脱保护反应过程中属于均相反应，可以通过tlc监测反应的进程，在后处理过程中仅需加入不良溶剂即可析出产物，大大缩短了合成工艺的周期。
2、为实现上述技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、本专利技术提供一种美拉诺坦-ii的液相合成方法，包含以下步骤：
4、s1：在疏水性标签tag载体上偶联fmoc-lys(boc)-cooh制备c末端连有疏水性标签保护的赖氨酸，其结构为fmoc-lys(boc)-tag，然后脱除n端fmoc保护基，得到nh2-lys(boc)-tag；
5、s2：使用经典液相多肽合成法制备保护的中间体四肽片段，其氨基酸序列为：r1-his(r2)-d-phe-arg(r3)-trp-r4，r1、r2、r3和r4均为保护基。
6、s3：在步骤s1所得nh2-lys(boc)-tag基础上，使用fmoc化学合成法依次与保护的中间体四肽片段、fmoc-asp(otbu)-cooh和ac-nle-cooh进行偶联得到c末端连有疏水性标签载体的全保护线性美拉诺坦-ii；
7、s4：将步骤s3所得全保护线性美拉诺坦-ii在tfa裂解液条件下脱除c末端疏水性标签和氨基酸侧链保护基得到脱保护线性美拉诺坦-ii，进一步在缩合剂存在下发生偶联环化反应得到美拉诺坦-ii粗品，经色谱纯化得到美拉诺坦-ii纯品。
8、进一步地，步骤s1中，所述疏水性标签tag载体为双(4-二十二烷氧基苯基)甲胺，主要通过以4,4'-二(二十二烷氧基)二苯甲酮和1-溴二十二烷为原料依次经过烷基化、还原、取代和脱保护反应制备而成。
9、进一步地，步骤s1中，所述nh2-lys(boc)-tag的制备方法为：
10、(1)将疏水性标签tag载体溶解于反应溶剂中，依次加入fmoc-lys(boc)-cooh、添加剂、缩合剂和碱，在0℃条件下反应0.5～1h，移至室温继续反应，tlc监测反应终点，反应结束后，减压浓缩反应液，向残余物中加入不良溶剂析出产物，得到fmoc-lys(boc)-tag；
11、(2)将上述制备的fmoc-lys(boc)-tag溶解于反应溶剂中，加入脱fmoc保护液，tlc监测反应终点，反应结束后，减压浓缩反应液，向残余物中加入不良溶剂析出产物，得到nh2-lys(boc)-tag。
12、进一步地，所述的添加剂为hobt、6-no2-hobt、6-cf3-hobt、hoat、6-cl-hobt、6-hoat、4-hoat、hodhat、hodhad、hosu、honb、hoct、hopy、hobi、hoi、6-cl-hobi、oxyma中的一种或几种。添加剂优选为hobt、hoat、hosu、honb中的一种。
13、进一步地，所述的缩合剂为下列中的至少一种：碳二亚胺类dcc、dic、edci、cic、bmc、bec、cpc中的一种或几种；四甲基铵盐类hbtu、tbtu、tdtu、hdtu、tdatu、hdatu、tptu、hptu、tstu、hstu、tpftu、hpftu、cf3-hbtu、hatu、tatu、hattu、hott、totu、hotu中的一种或几种；磷盐类bop、brop、pyclop、pybrop、clop、pybop、aop、pyaop、pyoxm、pynop、pyfop、pyfnbop、pyclok中的一种或几种。缩合剂优选为dic、edci、cic、tbtu、hbtu、pybop中的一种或几种。
14、进一步地，所述碱为nmm、dipea、et3n、na2co3中的一种或几种。碱优选为nmm、dipea中的一种。
15、进一步地，所述步骤(1)中疏水性标签tag、fmoc保护的氨基酸或片段、缩合剂、添加剂与碱摩尔比为1：1.1～3：1.1～3：1.1～3：2～8。
16、更进一步地，优选疏水性标签tag、fmoc保护的氨基酸或片段、缩合剂、添加剂与碱摩尔比为1：1.1～1.5：1.2～1.5：1.2～1.5：2.4～3。
17、进一步地，所述步骤(1)或(2)中反应溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、三氯甲烷中的一种或几种，优选反应溶剂为二氯甲烷或三氯甲烷；不良溶剂为甲醇、乙腈、水中的一种或几种，优选不良溶剂为甲醇或乙腈。
18、进一步地，所述步骤(2)中脱fmoc保护液为哌啶、二乙胺和dbu中的一种或几种。
19、进一步地，步骤s2中，所述氨基酸或肽片段序列的n端、c端和侧链基团均使用保护基进行保护，具体情况如下：
20、(本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种美拉诺坦-II的液相合成方法，其特征在于，包含以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种美拉诺坦-II的液相合成方法，其特征在于，步骤S1中所述疏水性标签Tag载体结构为双(4-二十二烷氧基苯基)甲胺。
3.如权利要求1所述的一种美拉诺坦-II的液相合成方法，其特征在于，步骤S1中NH2-Lys(Boc)-Tag的制备方法具体为：
4.如权利要求3所述的一种美拉诺坦-II的液相合成方法，其特征在于，步骤(1)或(2)中所述的反应溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、三氯甲烷中的一种或几种；不良溶剂为甲醇、乙腈、水中的一种或几种；脱Fmoc保护液为哌啶、二乙胺和DBU中的一种或几种；添加剂为HOBt、6-NO2-HOBt、6-CF3-HOBt、HOAt、6-Cl-HOBt、6-HOAt、4-HOAt、HODhat、HODhad、HOSu、HONB、HOCt、HOPy、HOBI、HOI、6-Cl-HOBI、Oxyma中的一种或几种；
5.如权利要求1所述的一种美拉诺坦-II的液相合成方法，其特征在于，步骤S2中所述保护的中间体四肽片段是采用经典
6.如权利要求5所述的一种美拉诺坦-II的液相合成方法，其特征在于，所述保护的中间体四肽片段是采用经典液相逐一缩合法合成，使用保护的氨基酸原料分别为His、D-Phe、Arg和Trp，由C端向N端依次偶联，得到全保护的中间体四肽片段，接着分别脱除主链两端保护基，并在N端接上一个Fmoc保护基，得到目标保护的中间体四肽片段；
7.如权利要求1所述的一种美拉诺坦-II的液相合成方法，其特征在于，步骤S3中所述的Fmoc化学合成法指的是在化合物NH2-Lys(Boc)-Tag基础上，依次与Fmoc保护的氨基酸或片段重复发生偶联与脱保护反应制备C末端连有疏水性标签载体的全保护线性美拉诺坦-II，采用通用偶联反应，其过程为：将NH2-Lys(Boc)-Tag溶解于反应溶剂中，依次向体系内加入Fmoc保护的氨基酸或片段、缩合剂、添加剂和碱进行反应，反应结束后向体系内加入不良溶剂析出产物；采用通用脱保护反应，其过程为：将偶联后的产物溶解于反应溶剂中，加入脱Fmoc保护液进行反应，反应结束后向体系内加入不良溶剂析出产物；
8.如权利要求1所述的一种美拉诺坦-II的液相合成方法，其特征在于，步骤S4中脱除C末端疏水性标签和氨基酸侧链保护基的方法为：向反应体系中加入TFA裂解液体系，在室温下反应2～5h，反应结束后浓缩反应液，向体系加入不良溶剂析晶，抽滤，洗涤得到脱保护线性美拉诺坦-II粗品。
9.如权利要求8所述的一种美拉诺坦-II的液相合成方法，其特征在于，所述的裂解液种类为三氟乙酸、茴香硫醚、三异丙基硅烷和水的混合溶液，其中体积比依次为87～95：2～5：2～5：2～5；所述的不良溶剂为乙醚、甲基叔丁基醚、异丙醚中的一种或几种。
10.如权利要求1所述的一种美拉诺坦-II的液相合成方法，其特征在于，步骤S4中脱保护线性美拉诺坦-II通过在缩合剂存在下发生偶联环化反应得到美拉诺坦-II粗品，经色谱纯化得到美拉诺坦-II纯品，其中缩合剂为碳二亚胺类、磷盐类、四甲基铵盐类中的一种或几种。
...【技术特征摘要】
1.一种美拉诺坦-ii的液相合成方法，其特征在于，包含以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种美拉诺坦-ii的液相合成方法，其特征在于，步骤s1中所述疏水性标签tag载体结构为双(4-二十二烷氧基苯基)甲胺。
3.如权利要求1所述的一种美拉诺坦-ii的液相合成方法，其特征在于，步骤s1中nh2-lys(boc)-tag的制备方法具体为：
4.如权利要求3所述的一种美拉诺坦-ii的液相合成方法，其特征在于，步骤(1)或(2)中所述的反应溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、三氯甲烷中的一种或几种；不良溶剂为甲醇、乙腈、水中的一种或几种；脱fmoc保护液为哌啶、二乙胺和dbu中的一种或几种；添加剂为hobt、6-no2-hobt、6-cf3-hobt、hoat、6-cl-hobt、6-hoat、4-hoat、hodhat、hodhad、hosu、honb、hoct、hopy、hobi、hoi、6-cl-hobi、oxyma中的一种或几种；
5.如权利要求1所述的一种美拉诺坦-ii的液相合成方法，其特征在于，步骤s2中所述保护的中间体四肽片段是采用经典液相逐一缩合法或片段缩合法偶联合成，氨基酸或肽片段序列的n端、c端和侧链基团均使用保护基进行保护，具体情况如下：
6.如权利要求5所述的一种美拉诺坦-ii的液相合成方法，其特征在于，所述保护的中间体四肽片段是采用经典液相逐一缩合法合成，使用保护的氨基酸原料分别为his、d-phe、arg和trp，由c端向n端依次偶联，得到全保护的中间体四肽片段，接着分别脱除主链两端保护基，并在n端接上一个fmoc保护基，得到目标保护的中间...
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