【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别是涉及一种gph片段偏向性较强的胶原酶制剂及其制备方法。
技术介绍
1、胶原蛋白是由约20种氨基酸以gly-x-y的重复序列组成的三螺旋结构，其中主要发挥作用的是甘氨酸-脯氨酸-羟脯氨酸(即gph)。甘氨酸是组成胶原蛋白肽链的重要氨基酸，能够稳定胶原蛋白的分子结构；脯氨酸是胶原蛋白组成的氨基酸之一，可促进人体生产胶原蛋白；羟脯氨酸是胶原蛋白特征性的氨基酸，能帮助体内胶原蛋白的重建及弹性蛋白的再生和更新。由此可见，补充胶原蛋白的核心成分gph才能真正意义上发挥作用。
2、胶原水解后可以得到由上述三个氨基酸组成的小肽，具有多种生物活性和较高的应用价值；胶原水解出来的胶原三肽具有保湿、滋养、亮肤、紧致、防皱等功能，主要应用于化妆品行业和食品工业领域。
3、而现有技术中通常使用酶解法将胶原蛋白酶解制备胶原三肽，例如，中国专利cn114634549a公开了一种胶原三肽产品及其制法和应用，所述胶原三肽含有至少一端为碱性氨基酸的三肽，碱性氨基酸的三肽的分子式包括gly-x-arg,gly-x-his和gly-x-lys，其中，x为氨基酸；以胶原三肽的总重量为基准，碱性氨基酸的含量不低于10％该专利技术还提供了制备胶原三肽的方法，包括向胶原蛋白中加水，溶液的ph值为5-8，加入胶原蛋白重量0.5-5％的复合蛋白酶：在45-60℃酶解2-6小时；复合蛋白酶包括无花果蛋白酶和生姜蛋白酶；调整酶解液ph值为7-8.5，加入胶原蛋白重量1-8％的发酵剂，在30-42℃发酵2-4小时：发酵剂包含汉逊式德巴利
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种gph片段偏向性较强的胶原酶制剂及其制备方法，解决了现有技术中酶制剂长期储存后稳定性差、活性低的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种gph片段偏向性较强的胶原酶制剂，包括以下组成成分：碱性蛋白酶、脯氨酸内切蛋白酶、木瓜蛋白酶、稳定剂、抗氧剂、防腐剂、缓冲剂和保护剂，其中稳定剂包括可溶性镁盐，缓冲剂为缓冲能力在ph为4.0～10.0的缓冲液。
3、优选的，各原料的重量份数为：碱性蛋白酶1-50份、脯氨酸内切蛋白酶1-50份、木瓜蛋白酶1-50份、稳定剂2-15份、抗氧剂1-5份、防腐剂0.1-1份、缓冲剂1-5份和保护剂1-80份。
4、优选的，可溶性镁盐包括氯化镁、醋酸镁、硫酸镁、柠檬酸镁、甘氨酸镁中至少的一种。
5、优选的，抗氧剂为抗坏血酸、抗坏血酸钠、抗坏血酸钙、d-异抗坏血酸、d-异抗坏血酸钠、磷脂、乳酸钠中的一种或多种。
6、优选的，防腐剂为山梨酸钾、苯甲酸钠或溶菌酶中的一种或几种。
7、优选的，缓冲液包括乙酸-乙酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、tris-盐酸缓冲液、hepes缓冲液中的至少一种。
8、优选的，保护剂以重量百分比计包括20-40％甘油、20-40％糖类物质和30-50％甘露醇。
9、优选的，糖类物质为蔗糖、海藻糖、麦芽糖中的一种或多种。
10、一种gph片段偏向性较强的胶原酶制剂的制备方法，按照配比称取原料，先将碱性蛋白酶、脯氨酸内切蛋白酶和木瓜蛋白酶混合，然后梯度加入稳定剂、抗氧剂、防腐剂、缓冲剂和保护剂，混合30-50min，得到酶制剂混合液，之后将酶制剂混合液进行冷冻干燥。
11、优选的，冷冻干燥为将酶制剂混合液于-45℃～-35℃下冻结1～5h，再置于真空冷冻干燥机中并于-10℃～0℃下干燥5～10h，之后以5～10℃/min的速率逐步升温至25℃～35℃并保持2～5h完成冷冻干燥。
12、本专利技术的有益效果：
13、(1)本专利技术中通过使用碱性蛋白酶、脯氨酸内切蛋白酶和木瓜蛋白酶相互复配，特异性的酶解胶原蛋白，使得水解度高；水解速率快；切出来的三肽中gph含量高。
14、(2)本专利技术通过在酶制剂中引入稳定剂可溶性镁盐，镁离子用于保证酶制剂在使用时酶能够发挥最高活力，并且在储存时能够维持酶活力的稳定性。通过引入防腐剂用于在酶制剂的存储过程中抑制微生物的生长、繁殖，从而避免微生物生长繁殖所导致的杂酶污染问题。通过引入抗氧剂抑制或延缓酶的氧化降解，延长酶的寿命。通过引入缓冲剂用于达到维持酶制剂在一个较为稳定的ph环境下，保证催化活力不受影响的效果。
15、(3)本专利技术酶制剂中的保护剂是由糖类物质、甘油和甘露醇一起使用，可以使得酶的蛋白结构免遭破坏，能够最大限定地保持酶的理化组成和生物活性，减少酶的失活率，延长有效时间，使该酶制剂的效果更加显著和持久，实现对酶的良好保护。
16、下面通过附图和实施例，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种GPH片段偏向性较强的胶原酶制剂，其特征在于：包括以下组成成分：碱性蛋白酶、脯氨酸内切蛋白酶、木瓜蛋白酶、稳定剂、抗氧剂、防腐剂、缓冲剂和保护剂，其中稳定剂包括可溶性镁盐，缓冲剂为缓冲能力在pH为4.0～10.0的缓冲液。
2.根据权利要求1所述的一种GPH片段偏向性较强的胶原酶制剂，其特征在于：各原料的重量份数为：碱性蛋白酶1-50份、脯氨酸内切蛋白酶1-50份、木瓜蛋白酶1-50份、稳定剂2-15份、抗氧剂1-5份、防腐剂0.1-1份、缓冲剂1-5份和保护剂1-80份。
3.根据权利要求1所述的一种GPH片段偏向性较强的胶原酶制剂，其特征在于：可溶性镁盐包括氯化镁、醋酸镁、硫酸镁、柠檬酸镁、甘氨酸镁中至少的一种。
4.根据权利要求1所述的一种GPH片段偏向性较强的胶原酶制剂，其特征在于：抗氧剂为抗坏血酸、抗坏血酸钠、抗坏血酸钙、D-异抗坏血酸、D-异抗坏血酸钠、磷脂、乳酸钠中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的一种GPH片段偏向性较强的胶原酶制剂，其特征在于：防腐剂为山梨酸钾、苯甲酸钠或溶菌酶中的一种或几种。
...【技术特征摘要】
1.一种gph片段偏向性较强的胶原酶制剂，其特征在于：包括以下组成成分：碱性蛋白酶、脯氨酸内切蛋白酶、木瓜蛋白酶、稳定剂、抗氧剂、防腐剂、缓冲剂和保护剂，其中稳定剂包括可溶性镁盐，缓冲剂为缓冲能力在ph为4.0～10.0的缓冲液。
2.根据权利要求1所述的一种gph片段偏向性较强的胶原酶制剂，其特征在于：各原料的重量份数为：碱性蛋白酶1-50份、脯氨酸内切蛋白酶1-50份、木瓜蛋白酶1-50份、稳定剂2-15份、抗氧剂1-5份、防腐剂0.1-1份、缓冲剂1-5份和保护剂1-80份。
3.根据权利要求1所述的一种gph片段偏向性较强的胶原酶制剂，其特征在于：可溶性镁盐包括氯化镁、醋酸镁、硫酸镁、柠檬酸镁、甘氨酸镁中至少的一种。
4.根据权利要求1所述的一种gph片段偏向性较强的胶原酶制剂，其特征在于：抗氧剂为抗坏血酸、抗坏血酸钠、抗坏血酸钙、d-异抗坏血酸、d-异抗坏血酸钠、磷脂、乳酸钠中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的一种gph片段偏向性较强的胶原酶制剂，其特征在于：防腐剂为山梨酸钾、苯甲酸钠或溶菌酶中的一种或几种。
6.根据权利要求1所述的一种gph片段偏向性较强的胶原酶制剂，其特征在于：缓冲液包括乙酸-乙酸钠缓冲...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵子方，郭红星，刘赛赛，李立，周尽学，
申请(专利权)人：海南华研胶原科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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