一种提高DNA片段和载体连接转化效率的方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种提高DNA片段和载体连接转化效率的方法及应用，包括以下步骤：S1，准备连接用的目的基因和载体，进行双酶切产生粘性末端；S2，在酶切后的载体中加入CIP酶进行去磷化；S3，将酶切后的目的基因和载体跑胶，胶液为质量百分比为1％琼脂糖胶，采用QIAGEN胶回收试剂盒，切胶回收目的基因片段和载体，切胶后在琼脂糖凝胶中加入3倍体积的缓冲液QG，50℃温度下加热10min溶解，每两分钟混匀一次，使胶完全溶解，添加1倍体积的异丙醇，放置室温，将溶解后的胶转移至QIAquick旋转柱，离心；本发明专利技术通过优化QIAGEN胶回收试剂盒回收方式，提高回收片段的质量；延长转化后stbl3感受态培养时间，可提高克隆数量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及dna片段和载体连接转化效率，具体为一种提高dna片段和载体连接转化效率的方法及应用。

技术介绍

1、基因克隆技术在生物学中发挥着重要作用，广泛应用于分子生物学、细胞生物学以及肿瘤生物学等领域，具有巨大的市场需求，传统的分子克隆实验包括：dna片段制备、载体线性化处理、dna片段与载体连接以及大肠杆菌感受态细胞转化等，然而，在各种操作中dna的质量也会对转化效率产生叠影响，例如，胶回收片段的质量有可能影响连接反应，连接不充分导致转化后阳性克隆概率很低，因此，在传统的分子克隆方法中，提高dna质量和提高转化后阳性菌的数量对克隆筛选至关重要。

2、由于质粒分子量小，稳定易于操作，安全可靠，容易纯化分离，因此是基因工程中最常用、最简单的载体，但在实际工作中，片段和载体的连接效率一直未能保证。

技术实现思路

1、本专利技术目的是提供一种提高dna片段和载体连接转化效率的方法及应用，以解决上述
技术介绍
中的问题。

2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术第一方面提供本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提高DNA片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种提高DNA片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，所述S3中胶溶解后要放置室温，再进行后续操作，有利于DNA的吸附和杂质的去除。

3.根据权利要求1所述的一种提高DNA片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，所述S4中片段500bp长度和载体9400bp长度时，连接摩尔比例为3：1。

4.根据权利要求1所述的一种提高DNA片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，所述S6中转化培养条件可以为补加带抗性培养基过夜培养。

<p>5.如权利要求1...

【技术特征摘要】

1.一种提高dna片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种提高dna片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，所述s3中胶溶解后要放置室温，再进行后续操作，有利于dna的吸附和杂质的去除。

3.根据权利要求1所述的一种提高dna片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙利燕，赵焕荣，王烨，张璇，
申请(专利权)人：北京力邦生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：