【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及dna片段和载体连接转化效率，具体为一种提高dna片段和载体连接转化效率的方法及应用。
技术介绍
1、基因克隆技术在生物学中发挥着重要作用，广泛应用于分子生物学、细胞生物学以及肿瘤生物学等领域，具有巨大的市场需求，传统的分子克隆实验包括：dna片段制备、载体线性化处理、dna片段与载体连接以及大肠杆菌感受态细胞转化等，然而，在各种操作中dna的质量也会对转化效率产生叠影响，例如，胶回收片段的质量有可能影响连接反应，连接不充分导致转化后阳性克隆概率很低，因此，在传统的分子克隆方法中，提高dna质量和提高转化后阳性菌的数量对克隆筛选至关重要。
2、由于质粒分子量小，稳定易于操作，安全可靠，容易纯化分离，因此是基因工程中最常用、最简单的载体，但在实际工作中，片段和载体的连接效率一直未能保证。
技术实现思路
1、本专利技术目的是提供一种提高dna片段和载体连接转化效率的方法及应用，以解决上述
技术介绍
中的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术第一方面提供一种提高dna片段和载体连接转化效率的方法，包括以下步骤：
3、s1，准备连接用的目的基因和载体，进行双酶切产生粘性末端；
4、s2，在酶切后的载体中加入cip酶进行去磷化；
5、s3，将酶切后的目的基因和载体跑胶，胶液为质量百分比为1％琼脂糖胶，采用qiagen胶回收试剂盒，切胶回收目的基因片段和载体，切胶后在琼脂糖凝胶中加入3倍体积的缓冲
6、s4，按片段和载体比例为(3～9)：1进行条件摸索；
7、s5，室温20min，外加16℃过夜连接；
8、s6，转化连接产物5μl到50μl stbl3感受态细胞中，加250μl soc培养基32℃，225rpm培养1h，或者补加带抗性的培养基过夜培养；
9、s7，取培养后菌液进行涂板，挑取菌落形态大小均一的菌落进行培养32℃，225rpm过夜培养；
10、s8，选取载体中插入目的基因前后的序列设计引物，对挑取的单克隆进行pcr鉴定。
11、优选的，所述s3中胶溶解后要放置室温，再进行后续操作，有利于dna的吸附和杂质的去除。
12、优选的，所述s4中片段500bp长度和载体9400bp长度时，连接摩尔比例为3：1。
13、优选的，所述s6中转化培养条件可以为补加带抗性培养基过夜培养。
14、本专利技术第二方面提供一种本专利技术第一方面所述方法的应用，所述方法可用于提高dna片段和载体连接转化效率。
15、本专利技术至少具备以下有益效果：
16、(1)本专利技术提供的一种提高dna片段和载体连接转化效率的方法及应用，通过优化qiagen胶回收试剂盒回收方式，提高回收片段的质量；
17、(2)本专利技术提供的一种提高dna片段和载体连接转化效率的方法及应用，延长转化后stbl3感受态培养时间，可提高克隆数量。
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1.一种提高DNA片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种提高DNA片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，所述S3中胶溶解后要放置室温，再进行后续操作，有利于DNA的吸附和杂质的去除。
3.根据权利要求1所述的一种提高DNA片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，所述S4中片段500bp长度和载体9400bp长度时，连接摩尔比例为3：1。
4.根据权利要求1所述的一种提高DNA片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，所述S6中转化培养条件可以为补加带抗性培养基过夜培养。
5.如权利要求1～4任一项所述方法的应用，其特征在于，所述方法可用于提高DNA片段和载体连接转化效率。
【技术特征摘要】
1.一种提高dna片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种提高dna片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，所述s3中胶溶解后要放置室温，再进行后续操作，有利于dna的吸附和杂质的去除。
3.根据权利要求1所述的一种提高dna片段和载体连接转化效率的方法，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙利燕，赵焕荣，王烨，张璇，
申请(专利权)人：北京力邦生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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