一种双特异性抗体电荷异质性的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种双特异性抗体电荷异质性的检测方法，包括以下步骤：

【技术实现步骤摘要】
一种双特异性抗体电荷异质性的检测方法


[0001]本专利技术涉及双抗药物电荷异质性测定
，具体为一种双特异性抗体电荷异质性的检测方法
。

技术介绍

[0002]1960
年，纽约罗斯威尔公园纪念研究所的
Nisonoff
及其合作者首次提出了双特异性抗体
(BispecificAntibodys)
的原始概念，随着抗体工程和抗体生物学领域的里程碑进展，构建双特异性生物大分子抗癌药物发展迅速，其中双特异性抗体具有双靶点协同增效
、
毒副作用相对较小的优点，是国家重大新药创制研发方向之一
。
[0003]基于复杂的生化结构以及生产工艺，双特异性抗体的生产和储存过程中，也可能产生大量的修饰和降解，如氧化脱酰胺
、
糖基化
、
二硫键修饰
、
序列变异等，因此，抗体药物电荷异质性检测是整个生产工艺的关键质量属性
(CQA)。
[0004]由于在生产过程中，双抗蛋白药物结构复杂性和多样性的变化，因此选择一种灵敏度高
、
特异性强
、
重复性好的双抗蛋白药物电荷异质性杂质检测分析方法是控制和稳定双抗药物生产质量的有效手段
。
[0005]毛细管区带电泳分析速度快，进样量少，实验试剂成本低，可用于双抗的快速鉴别及电荷异质性分析中，但其同时也存在电渗流会因样品组成而变化，进而影响分离重复性的问题，对此，开发一种重复性好的毛细管区带电泳方法尤为重要
。

技术实现思路

[0006]本专利技术目的是提供一种双特异性抗体电荷异质性的检测方法，以解决上述
技术介绍
中的问题
。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种双特异性抗体电荷异质性的检测方法，包括以下步骤：
[0008]S1
，双抗蛋白预处理：
[0009]配置
10mM Tris
‑
HCl
缓冲溶液，缓冲溶液的
pH
值为
6.5
，使用
0.22
μ
m
滤膜过滤并超声，使用该溶液对双抗蛋白进行换液处理，制备样品；
[0010]S2
，毛细管电泳检测：
[0011]S21
，酸洗：
[0012]在
30psi
下用
0.1M HCl
冲洗
5min
；
[0013]S22
，水洗：
[0014]在
30psi
下用水冲洗
5min
；
[0015]S23
，分离缓冲液冲洗：
[0016]在
30psi
下用分离缓冲液冲洗
5min
；
[0017]S24
，进样：
[0018]在
0.5psi
下进样
10s
；
[0019]S25
，分离：
[0020]在
25KV
下正压分离
15min。
[0021]优选的，所述换液处理的处理条件为
11200rcf
，
4℃
，
≥10min/
次，换液倍数
≥3000
倍
。
[0022]优选的，所述
S1
中样品浓度
0.2
～
1mg/ml。
[0023]优选的，所述
S1
中样品的保存温度为
10℃。
[0024]优选的，所述
S2
中毛细管柱温度
25℃。
[0025]优选的，所述
S23
中分离缓冲液的成分为
500mM EACA、2mM TETA、0.05
％
HPMC
，所述分离缓冲液的
pH
值为
5.7。
[0026]优选的，所述
S2
中毛细管类型为非涂层毛细管柱
。
[0027]优选的，所述
S1
中缓冲溶液可以替换为甘氨酸盐酸盐或磷酸盐，浓度为5～
150mM
，所述分离缓冲液的
pH
值为
5.0
～
8.0。
[0028]本专利技术至少具备以下有益效果：
[0029]本专利技术提供的一种双特异性抗体电荷异质性的检测方法，使用
10mM Tris
‑
HCl
对双抗蛋白进行预处理，样品用量少
(
终浓度
0.2
～
1mg/ml)
，缩短了浓缩时间，操作简单，并且蛋白可达到完全分离，重复性好，降低谱带展宽效应，提高柱效，使用非涂层毛细管柱，降低成本
。
附图说明
[0030]图1为不同缓冲溶液条件下的分离效果；
[0031]图2为
10mM Tris
‑
HCl
缓冲溶液的重复性及中间精密度
。
具体实施方式
[0032]下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚
、
完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例
。
基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围
。
[0033]实施例1[0034]一种双特异性抗体电荷异质性的检测方法，包括以下步骤：
[0035]S1
，双抗蛋白预处理：
[0036]配置
10mM Tris
‑
HCl
缓冲溶液，缓冲溶液的
pH
值为
6.5
，使用
0.22
μ
m
滤膜过滤并超声，使用该溶液对双抗蛋白进行换液处理，处理条件为
11200rcf
，
4℃
，
≥10min/
次，换液倍数
≥3000
倍，制备样品，样品浓度
0.2
～
1mg/ml
；
[0037]S2
，毛细管电泳检测：
[0038]仪器准备：
PA800Plus
，
UV
检测器
214nm
，样品温度
10℃
，毛细管柱温度
25℃
；
[0039]毛细管类型：非涂层毛细管柱；
[0040]分离缓冲液：
500mM EACA、2mM TETA、0.05
％
(V/V)HPMC
，
pH5.7
；
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种双特异性抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1
，双抗蛋白预处理：配置
10mM Tris
‑
HCl
缓冲溶液，缓冲溶液的
pH
值为
6.5
，使用
0.22
μ
m
滤膜过滤并超声，使用该溶液对双抗蛋白进行换液处理，制备样品；
S2
，毛细管电泳检测：
S21
，酸洗：在
30psi
下用
0.1M HCl
冲洗
5min
；
S22
，水洗：在
30psi
下用水冲洗
5min
；
S23
，分离缓冲液冲洗：在
30psi
下用分离缓冲液冲洗
5min
；
S24
，进样：在
0.5psi
下进样
10s
；
S25
，分离：在
25KV
下正压分离
15min。2.
根据权利要求1所述的一种双特异性抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于：所述换液处理的处理条件为
11200rcf
，
4℃
，
≥10min/
次，换液倍数...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙利燕，赵焕荣，张海娟，狄春辉，
申请(专利权)人：北京力邦生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：