猪源性小肠粘膜下基质材料中活性蛋白的表征方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及猪源性细胞外基质材料中活性蛋白的检测方法，方法包括：（1）将猪小肠粘膜下细胞外基质材料处理得到凝胶化的产物，离心分离出上清液与沉淀；2）将沉淀重悬于1

【技术实现步骤摘要】
猪源性小肠粘膜下基质材料中活性蛋白的表征方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种猪源性小肠粘膜下基质材料中活性蛋白的表征方法和应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]细胞外基质材料是一类来源于猪、牛等动物心包、小肠粘膜下组织经生物、化学和物理脱细胞工艺处理得到的生物医用材料，具有可吸收特性、免疫原性低、超微结构与人体组织相近等优点。经处理的细胞外基质材料中主要含有胶原蛋白、蛋白多糖和氨基多糖等生物化学成分，有利于细胞粘附、力学传导、募集生长因子和促进组织重塑能力。其中，总蛋白与胶原蛋白差值大概是15%。与植入体内后最后转归为组织纤维疤痕修复的惰性材料（如不可降解的金属、陶瓷和塑料以及常规的可降解合成高分子材料等）不同，细胞外基质材料具有独特的物理、化学和生物学特性。例如，具有较高的比表面积、对机体无毒且容易代谢的降解产物、与组织重塑和再生相匹配的降解性能等。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪源性小肠粘膜下基质材料中活性蛋白的表征方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将猪小肠粘膜下细胞外基质材料采用高速低温匀质法进行处理，得到均匀匀浆，向匀浆中加入胃蛋白酶和盐酸溶液温育搅拌诱导凝胶化，得到凝胶化的产物；调节凝胶化的产物的pH至7.4，离心分离出上清液与沉淀；（2）将所述沉淀重悬于1
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PBS溶液中，得到沉淀悬浮液，将所述沉淀悬浮液剧烈振荡后均匀化处理，得到均匀化的沉淀，保存备用；（3）将所述上清液冻干，得到冻干产物，将所述冻干产物再水化，将水化后的产物离心获得澄清溶液，吸取澄清溶液，稀释至体积与所述上清液体积相同，保存备用；（4）将所述凝胶化的产物、所述均匀化的沉淀以及所述澄清溶液通过蛋白检测试剂盒对总蛋白含量进行检测；（5）将所述均匀化的沉淀以及所述澄清溶液用丙酮沉淀法提取蛋白，复溶后进行聚丙酰胺凝胶电泳，对所述均匀化的沉淀以及所述澄清溶液中的蛋白进行定性定量检测；（6）将所述均匀化的沉淀以及所述澄清溶液分别通过液质联用进行分析，得到蛋白质谱分析结果。2.如权利要求1所述的表征方法，其特征在于，步骤（1）中将猪小肠粘膜下细胞外基质材料采用高速低温匀质法进行处理，得到均匀匀浆的具体步骤为：将猪小肠粘膜下细胞外基质材料剪碎，置于匀质仪器中，在转速6500
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8000r/min下，采用液氮冷却研磨至均匀匀浆。3.如权利要求1所述的表征方法，其特征在于，步骤（1）中胃蛋白酶的浓度为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：刘成虎，孙晓霞，林振华，阮文婷，屈秋锦，王国伟，
申请(专利权)人：山东省医疗器械和药品包装检验研究院，
类型：发明
国别省市：