一种通过亚基定性、定量螺旋藻中藻蓝蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过亚基定性、定量螺旋藻中藻蓝蛋白的方法，本发明专利技术依据α、β亚基条带特征将藻蓝蛋白与其他蛋白鉴别，根据α亚基条带体积计算藻蓝蛋白含量；运用十二烷基硫酸钠聚丙酰胺凝胶电泳方法，通过考马斯亮蓝染色剂，将蛋白染色为可见条带，凝胶成像系统分析藻蓝蛋白α亚基条带发光量与藻蓝蛋白含量的线性关系，最终目的为给螺旋藻提供一种准确、快速、灵敏的定性定量方法。本发明专利技术不需分离纯化藻蓝蛋白，可以单一精准测定其含量，相较于其他电泳定量方法，本发明专利技术利用α亚基条带体积作为参照条件，比条带总体积为参照条件更加灵敏，准确。准确。准确。

【技术实现步骤摘要】
一种通过亚基定性、定量螺旋藻中藻蓝蛋白的方法


[0001]本专利技术涉及螺旋藻中藻蓝蛋白定性、定量领域，具体为一种通过亚基定性、定量螺旋藻中藻蓝蛋白的方法。

技术介绍

[0002]藻蓝蛋白是藻胆蛋白的一种，由呈蓝色的藻蓝素(藻胆素)与可溶性蛋白结合而成，藻胆蛋白作为蓝藻、红藻、隐藻和甲藻中存在的一种具有光合作用的辅助色蛋白，是由载体蛋白和生色团辅基组成。载体蛋白和生色团通过硫醚键链接，每分子藻蓝素含2条肽链(α和β),每条肽链含1个或多个共价键连接的发色团；藻蓝蛋白作为一种天然着色剂被广泛应用在化妆品、饮料、冰淇淋、口香糖和乳制品中。
[0003]现在所运用藻蓝蛋白的测定方法都为测定总蛋白含量，并不能单独定量、定性藻蓝蛋白，其他电泳方法并未用过双条带定性，为此提供一种通过亚基定性、定量螺旋藻中藻蓝蛋白的方法，此方法为首次利用藻蓝蛋白α，β条带特殊性定性；从而达到精准、高效、便捷定性、定量藻蓝蛋白的效果。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种通过亚基定性、定量螺旋藻中藻蓝蛋白的方法，以解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过亚基定性、定量螺旋藻中藻蓝蛋白的方法，其特征在于：包括以下步骤：S10：获取标准曲线：S101：制备不同已知藻蓝蛋白浓度的标准溶液，并独立的与样品制备液1:1混合；S102：将混合后溶液沸水浴1min，待冷却；S103：冷却后溶液上载到十二烷基硫酸钠聚丙酰胺凝胶中，每孔10μL并且在中间加样孔加入10μL的非预染蛋白Marker；S104：设置电流8mA，电泳15min，随后改为16mA，进行至前沿线到达底部绿线；S105：取出凝胶，用考马斯亮蓝染色液染色40min；S106：脱色液脱色5min；S107：净化水洗脱90min；S108：凝胶成像系统选择考马斯亮蓝模块，白光拍摄分析；S109：所得条带是分子量为14kDa的β亚基和21kDa的α亚基；S110：计算所需藻蓝蛋白α亚基条带体积，根据已知浓度与条带体积计算线性关系，验证偏差；S111：所得标准曲线用于浓度计算；S20：样品定性、定量；S201：将蛋白样品液与样品制备液1:1混合；S202：将混合后溶液沸水浴1min，待...

【专利技术属性】
技术研发人员：张俊杰，刘誉，王柯，段蕊，
申请(专利权)人：江苏省海洋资源开发研究院连云港，
类型：发明
国别省市：