一种制造技术

本发明专利技术提供了一种

【技术实现步骤摘要】
一种CD3、CD20双克隆抗体蛋白含量测定的检测方法


[0001]本专利技术涉及
CD3、CD20
双克隆抗体蛋白含量检测
，具体为一种
CD3、CD20
双克隆抗体蛋白含量测定的检测方法
。

技术介绍

[0002]目前常见的蛋白含量检测方式有酶联免疫吸附
(Elisa)
法
、
福林酚
(Lowry)
法
、
凯氏定氮
(Kjedahl)
法
、
双缩脲
(Biuret)
法
、
紫外吸收法
、
考马斯亮蓝
(Bradford)
法
、BCA
法，但对于双克隆抗体，由于其蛋白含量较低，所以以上方法均无法满足需求
。
[0003]Elisa
法
、
福林酚
(Lowry)
法和考马斯亮蓝
(Bradford)
法虽然检测灵敏度较高，但
Elisa
法检测过程中重复性较差，检测步骤繁琐，检测时间通常在
20h
以上；福林酚
(Lowry)
法和考马斯亮蓝
(Bradford)
法影响检测的干扰物质较多，对检测结果影响较大；凯氏定氮
(Kjedahl)
法检测灵敏度低适用于
0.2
～
1.0mg
氮，且检测时间为8～r/>10
小时；双缩脲
(Biuret)
法检测灵敏度低，适用于1～
10mg/ml
，且不同蛋白质显色相似；紫外吸收法较为灵敏，适用于
0.2
～
2mg/ml
，但所检样品低于
0.2mg/ml
时无法满足需求；
BCA
法检测灵敏度为
20
～
200
μ
g/ml
，但检测结果受到蛋白质内半胱氨酸，酪氨酸，色氨酸含量的影响
。
[0004]因此，对于上述现有检测方法均存在着不同程度的技术缺陷问题，本专利技术提出一种
CD3、CD20
双克隆抗体蛋白含量测定的检测方法
。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的是提供一种
CD3、CD20
双克隆抗体蛋白含量测定的检测方法，以解决上述
技术介绍
中的问题
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种
CD3、CD20
双克隆抗体蛋白含量测定的检测方法，包括以下步骤：
[0007]S1
，
CD3、CD20
双克隆抗体样品检测：
[0008]从
CD3、CD20
双克隆抗体样品溶液中取样，并将溶液通过色谱柱中，采用高效液相色谱进行检测；
[0009]其中，高效液相色谱条件包括：采用
C4
反相色谱柱；荧光检测器的激发波长：
280nm
；发射波长：
345nm
；流动相为流动相
A
与流动相
B
的混合溶液，所述流动相
A
为三氟乙酸水溶液，所述流动相
B
为三氟乙酸乙腈溶液；梯度洗脱；
[0010]S2
，标准曲线绘制：
[0011]利用高效液相色谱绘制色谱图曲线：绘制目标物的标准曲线，通过
HPLC
保留时间和目标峰值，对样品进行定量分析
。
[0012]优选的，所述流动相
A
为体积分数
0.05
％～
0.1
％的三氟乙酸水溶液；流动相
B
为体积分数
0.05
％～
0.1
％三氟乙酸乙腈溶液
。
[0013]优选的，所述流动相
A
为体积分数
0.05
％的三氟乙酸水溶液；流动相
B
为体积分数
0.05
％三氟乙酸乙腈溶液
。
[0014]优选的，所述流动相
A
与流动相
B
的优选初始体积配比为
(65
～
75)
：
(25
～
35)。
[0015]优选的，所述流动相
A
与流动相
B
的优选初始体积配比为
70
：
30。
[0016]优选的，所述流动相的流速为
0.8ml/min
～
1.2ml/min。
[0017]优选的，所述流动相的流速为
1.0ml/min。
[0018]优选的，所述色谱柱温度为
35℃
～
40℃。
[0019]优选的，所述色谱柱温度为
40℃。
[0020]本专利技术至少具备以下有益效果：
[0021](1)
本专利技术提供的一种
CD3、CD20
双克隆抗体蛋白含量测定的检测方法，通过不断优化检测条件，对
CD3、CD20
双克隆抗体进行检测，确定最佳液相色谱条件，绘制标准曲线，实现对
CD3、CD20
双克隆抗体定量分析，本专利技术标准曲线回归系数
R2值可达到
0.999
以上，最低检测浓度为4μ
g/ml
，能够准确快速有效检测
CD3、CD20
双克隆抗体，进样浓度更低，可以降低
CD3、CD20
双克隆抗体的消耗量，降低成本；
[0022](2)
本专利技术提供的一种
CD3、CD20
双克隆抗体蛋白含量测定的检测方法，专属性强，样品保留时间为
4.7min
；操作简单，对于蛋白量在标准曲线检测范围内的样品，无需进行处理，直接进行检测；检测时间短，每个样品检测时间为
13min。
附图说明
[0023]图1为
CD3、CD20
双克隆抗体的色谱的标准曲线图；
[0024]图2为其它条件不变，流动相
A
与动相
B
的初始体积配比为
75
：
25
条件下
CD3、CD20
双克隆抗体的色谱曲线图；
[0025]图3为其它条件不变，流速
0.8ml/min
下
CD3、CD20
双克隆抗体的色谱曲线图；
[0026]图4为其它条件不变，色谱柱温度
35℃
下
CD3、CD20
双克隆抗体的色谱曲线图
。
具体实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
CD3、CD20
双克隆抗体蛋白含量测定的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1
，
CD3、CD20
双克隆抗体样品检测：从
CD3、CD20
双克隆抗体样品溶液中取样，并将溶液通过色谱柱中，采用高效液相色谱进行检测；其中，高效液相色谱条件包括：采用
C4
反相色谱柱；荧光检测器的激发波长：
280nm
；发射波长：
345nm
；流动相为流动相
A
与流动相
B
的混合溶液，所述流动相
A
为三氟乙酸水溶液，所述流动相
B
为三氟乙酸乙腈溶液；梯度洗脱；
S2
，标准曲线绘制：利用高效液相色谱绘制色谱图曲线：绘制目标物的标准曲线，通过
HPLC
保留时间和目标峰值，对样品进行定量分析
。2.
根据权利要求1所述的一种
CD3、CD20
双克隆抗体蛋白含量测定的检测方法，其特征在于：所述流动相
A
为体积分数
0.05
％～
0.1
％的三氟乙酸水溶液；流动相
B
为体积分数
0.05
％～
0.1
％三氟乙酸乙腈溶液
。3.
根据权利要求2所述的一种
CD3、CD20
双克隆抗体蛋白含量测定的检测方法，其特征在于：所述流动相
A
为体积分数
0.05

【专利技术属性】
技术研发人员：孙利燕，赵焕荣，王烨，张海娟，狄春辉，
申请(专利权)人：北京力邦生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：