【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，具体涉及一种联合、快速、准确检测患者血液中igf-1和igfbp-3的试剂盒。
技术介绍
1、2型糖尿病是一种常见的慢性疾病，2型糖尿病患者的结直肠癌形成可能受到胰岛素-胰岛素样生长因子-1(igf-1)轴的影响。研究发现大部分2型糖尿病患者的igf-1水平较正常人高，而胰岛素样生长因子(igfbp)较正常人低，而高水平的igf-1、低水平的igfbp-3可能增加结直肠癌发生的风险。igf-1主要与igf结合蛋白中的igfbp-3结合实现对某些生理功能的调控。循环中大部分igf-1与igfbp(特别是igfbp-3)结合，因此，当循环中的igf-1与igfbp-3比例失衡时，将促使细胞增殖失控，进而导致恶变。
2、现有技术中已有igf-1和igfbp-3单独检测的试剂盒，检测方法为elisa法，但elisa是一种定性/半定量的方法，检测灵敏度低，检测时间通常为2～3小时，只适合疾病初期的定性诊断与大面积体检。化学发光免疫分析法的精密度和灵敏度要比酶联免疫分析高几个数量级，并且特异性强、方法稳定快速、线性范围宽、操作简单自动化程度高。大量研究表明化学发光免疫分析的阳性检出率明显优于酶联免疫分析。由于循环中90％的igf-1与igfbp-3以复合物的形式存在，因此传统方法在检测igf-1时会受到igfbp的干扰，导致出现假阳性结果。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种联合、快速、准确检测患者血液中igf-1和igfbp
2、为解决上述技术问题，本专利技术第一方面提供了一种igf-1和igfbp-3联合检测试剂盒，所述试剂盒由igf-1标准品、igfbp-3标准品、酶标记的igf-1抗体微珠、酶标记的igfbp-3抗体微珠、洗脱柱、发光底物、标准品稀释液组成。
3、进一步地，所述酶标记的igf-1抗体微珠可以是辣根过氧化物酶标记的igf-1抗体微珠、碱性磷酸酶标记的igf-1抗体微珠。
4、进一步地，所述酶标记的igfbp-3抗体微珠可以是辣根过氧化物酶标记的igfbp-3抗体微珠、碱性磷酸酶标记的igfbp-3抗体微珠。
5、进一步地，所述酶标记的igfbp-3抗体微珠的表面包裹着四氧化三铁。
6、进一步地，所述发光底物可以是鲁米诺及其衍生物、amppd、4-mup。
7、进一步地，当使用辣根过氧化物酶标记的igf-1抗体、辣根过氧化物酶标记的igfbp-3抗体时，应选择鲁米诺及其衍生物作为发光底物。
8、进一步地，当选择鲁米诺及其衍生物作为发光底物时，还应加入激发剂。
9、进一步地，所述激发剂为双氧水和一种氢氧化物碱的水溶液。
10、进一步地，所述氢氧化物碱可以是氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙。
11、进一步地，当选择鲁米诺及其衍生物作为发光底物时，还可以加入增强剂。所述增强剂可以是对碘苯酚、对苯基酚。
12、进一步地，当使用碱性磷酸酶标记的igf-1抗体、碱性磷酸酶标记的igfbp-3抗体时，应选择amppd、4-mup作为发光底物。
13、本专利技术第二方面提供一种igf-1和igfbp-3联合检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
14、使用标准品稀释液配制igf-1标准品和igfbp-3标准品的系列稀释液。将待测血清置于分选柱中，然后向试管中加入酶标记的igf-1抗体微珠和酶标记的igfbp-3抗体微珠，37℃下孵育50～70min，然后置于磁力架上孵育5～15min，分选出酶标记的igf-1抗体微珠igf-1复合物和酶标记的igfbp-3抗体微珠igfbp-3复合物并分别置于2支试管中，分别过洗脱柱得到纯化的酶标记的igf-1抗体微珠igf-1复合物和酶标记的igfbp-3抗体微珠igfbp-3复合物并分别置于2支试管中，然后向这2支试管中加入相应的发光底物，室温下避光放置5～10min后进行发光检测。
15、进一步地，所述igf-1标准品的系列稀释液至少应有4个浓度。
16、进一步地，所述igfbp-3标准品的系列稀释液至少应有4个浓度。
17、本专利技术第三方面提供一种igf-1和igfbp-3联合检测试剂盒的结果处理方法，包括以下步骤：以校准品浓度为横坐标，各浓度校准品对应的发光值为纵坐标，进行线性回归，得到回归方程和相关系数。
18、进一步地，将待测血清测得的发光值带入回归方程中，即得到igf-1和igfbp-3的浓度。
19、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供了一种用于2型糖尿病患者结直肠癌筛查的试剂盒，通过化学发光酶免疫分析法对igf-1和igfbp-3进行联合检测，不易出现加样错误，灵敏度高，特异性强，稳定性好，节约检测时间，自动化程度高，定量结果准确，使用本专利技术所述试剂盒获得的igf-1和igfbp-3比值还能用于判断2型糖尿病合并结直肠癌患者的术后复发情况。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于2型糖尿病患者并发结直肠癌筛查的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括IGF-1标准品、IGFBP-3标准品、酶标记的IGF-1抗体微珠、酶标记的IGFBP-3抗体微珠、洗脱柱、发光底物、标准品稀释液；其中酶标记的IGF-1抗体微珠表面未包裹其他材料，酶标记的IGFBP-3抗体微珠表面包裹着四氧化三铁。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标记的IGF-1抗体微珠选自辣根过氧化物酶标记的IGF-1抗体微珠、碱性磷酸酶标记的IGF-1抗体微珠中的一种。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标记的IGFBP-3抗体微珠选自碱性磷酸酶标记的IGFBP-3抗体微珠、辣根过氧化物酶标记的IGFBP-3抗体微珠中的一种。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述发光底物选自鲁米诺、异鲁米诺、AMPPD、4-MUP中的一种。
5.一种检测患者血液中IGF-1和IGFBP-3的试剂盒的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：使用标准品稀释液配制IGF-1标准品和IGFBP-3标准品的系列稀释液；将
6.一种IGF-1和IGFBP-3组合生物标志物在制备预测2型糖尿病患者并发结直肠癌试剂盒中的应用。
7.根据权利要求6所述的试剂盒应用，其特征在于，使用所述试剂盒检验血清中IGF-1和IGFBP-3的浓度，计算IGF-1与IGFBP-3比值。
8.根据权利要求7所述的试剂盒应用，其特征在于，所述试剂盒中IGF-1和IGFBP-3适用检验范围为4-100ng/mL。
...【技术特征摘要】
1.一种用于2型糖尿病患者并发结直肠癌筛查的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括igf-1标准品、igfbp-3标准品、酶标记的igf-1抗体微珠、酶标记的igfbp-3抗体微珠、洗脱柱、发光底物、标准品稀释液；其中酶标记的igf-1抗体微珠表面未包裹其他材料，酶标记的igfbp-3抗体微珠表面包裹着四氧化三铁。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标记的igf-1抗体微珠选自辣根过氧化物酶标记的igf-1抗体微珠、碱性磷酸酶标记的igf-1抗体微珠中的一种。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标记的igfbp-3抗体微珠选自碱性磷酸酶标记的igfbp-3抗体微珠、辣根过氧化物酶标记的igfbp-3抗体微珠中的一种。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述发光底物选自鲁米诺、异鲁米诺、amppd、4-mup中的一种。
5.一种检测患者血液中igf-1和igfbp-3的试剂盒的检测方法，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：秦俭，陈晓宇，朱州，吴友军，
申请(专利权)人：广西壮族自治区人民医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。