【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物材料，具体涉及一种人凝血ixa因子的dna适配体、解毒剂及应用。
技术介绍
1、核酸适配体通常是通过指数富集的配体进化技术(selex技术)从特定的寡核苷酸文库中筛选出来的核糖核酸/脱氧核糖核酸分子，对靶标具有高特异性和高亲和力。
2、在凝血级联反应中，凝血因子按照一定顺序被激活，最终使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。核酸适配体对靶标具有高亲和力，可通过与靶标蛋白结合而抑制蛋白的功能。基于此，已经开发了诸多凝血因子的核酸适配体用于发挥抗凝作用。
3、凝血ixa因子参与了内源性凝血途径，在凝血级联中发挥着至关重要的作用。与dna相比，rna在血浆中稳定性差，且价格昂贵。人凝血ixa因子(hfixa)的rna适配体虽然通过修饰提高了其血浆稳定性，但制备难、价格十分昂贵。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种人凝血ixa因子的dna适配体、解毒剂及应用，以解决现有rna适配体虽然能通过修饰提高其血浆稳定性，但制备难、价格十分昂贵的问题。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种人凝血ixa因子的dna适配体，所述dna适配体为seq 5(seq id no.4)、seq 11(seq id no.6)、seq 5-1t(seq id no.9)、seq 5-2tm(seq id no.10)、seq 11-1t(seqidno.11)和seq 11-2tm(seq id no.12)中的至少一种。
4、其中，seq id no.9seq 5-1t单链核酸(50nt)：
5、gtagggccacgtccctctatgagtcggcacgatgccaggcacctccctac；
6、seq id no.10seq 5-2tm单链核酸(50nt)：
7、gcggggccacgtccctctatgagtcggcacgatgccaggcacctccccgc；
8、seq id no.11seq 11-1t单链核酸(50nt)：
9、gtaggccgcccacttaagcgcacgcgtcgacgatttcgcacagtccctac；
10、seq id no.12seq 11-2tm单链核酸(50nt)：
11、gccggccgcccacttaagcgcacgcgtcgacgatttcgcacagtcccggc。
12、优选的，所述dna适配体为单链核酸，退火形成特定的二级结构。
13、优选的，所述dna适配体为seq 1(seq id no.1)、seq 2(seq id no.2)、seq 3(seqid no.3)、seq 5(seq id no.4)、seq 8(seq id no.5)、seq 11(seq id no.6)、seq 18(seqid no.7)和seq 31(seq id no.8)中的至少一种。
14、其中，seq id no.1seq 1单链核酸(80nt)：attggcactccacgcataggcct accggattaaaagctctctaacggaatgtgtgagcgtcctatgcgtgctaccgtgaa；
15、seq id no.2seq 2单链核酸(80nt)：attggcactccacgcataggggcatccg ccggccactgctctcaagtcgatacttcgcgtcctatgcgtgctaccgtgaa；
16、seq id no.3seq 3单链核酸(80nt)：attggcactccacgcataggtctcgtgg ggtcggcggtgggcactcgtggggcataatgacctatgcgtgctaccgtgaa；
17、seq id no.4seq 5单链核酸(80nt)：attggcactccacgcatagggccacgtc cctctatgagtcggcacgatgccaggcacctccctatgcgtgctaccgtgaa；
18、seq id no.5seq 8单链核酸(80nt)：attggcactccacgcatagggtgaacgc gtcttcagaaaagcgtctctaggatgtcccgacctatgcgtgctaccgtgaa；
19、seq id no.6seq 11单链核酸(80nt)：attggcactccacgcataggccgcccac ttaagcgcacgcgtcgacgatttcgcacagtccctatgcgtgctaccgtgaa；
20、seq id no.7seq 18单链核酸(80nt)：attggcactccacgcatagggtgttcg cctgcgttggggagagtctttagtgtcggtgggcctatgcgtgctaccgtgaa；
21、seq id no.8seq 31单链核酸(80nt)：attggcactccacgcataggtcataca cggtagattgggtgccacgggggtgccattatgcctatgcgtgctaccgtgaa。
22、优选的，所述dna适配体的退火缓冲液为(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)(hepes)、氯化钠、氯化钙和醋酸镁的混合溶液。
23、优选的，所述dna适配体的退火缓冲液为20mm(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)(hepes)、150mm氯化钠、2mm氯化钙和1mm醋酸镁的混合溶液。
24、优选的，所述dna适配体的退火缓冲液的ph值为6～8。
25、优选的，所述dna适配体的退火缓冲液的ph值为7.4。
26、优选的，所述dna适配体的退火程序为：95℃孵育5min，65℃孵育30min，50℃孵育30min，37℃孵育30min，25℃孵育30min，4℃孵育2h以上。
27、优选的，所述dna适配体的退火程序为：或95℃到4℃一天内慢退火(自然降温至室温，再冷却至4℃)；
28、优选的，所述dna适配体的退火程序为：95℃孵育10min，室温孵育5min以上，冰上孵育5min以上。
29、本专利技术还提供一种如本专利技术所述的人凝血ixa因子的dna适配体的解毒剂，所述解毒剂的核苷酸序列如seq id no.13和/或seq id no.14所示。
30、其中，seq id no.13seq 5-2b单链核酸(33nt)：cctggcatcgtgccgactcatagagggacgtgg；
31、seq id no.14seq 11-2b单链核酸(31nt)：cgaaatcgtcgacgcgtgcgcttaagtgggc。
32、本专利技术还提供一种如本专利技术所述人凝血ixa因子的dna适配体的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.人凝血IXa因子的DNA适配体，其特征在于，所述DNA适配体为Seq 5 （SEQ ID No.4）、Seq 11（SEQ ID No.6）、Seq 5-1t（SEQ ID No.9）、Seq 5-2tm、Seq 11-1t和Seq 11-2tm（SEQID No.12）中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的人凝血IXa因子的DNA适配体，其特征在于，所述DNA适配体为单链核酸，退火形成特定的二级结构。
3.根据权利要求2所述的人凝血IXa因子的DNA适配体，其特征在于，所述DNA适配体为Seq 1（SEQ ID No.1）、Seq 2（SEQ ID No.2）、Seq 3（SEQ ID No.3）、Seq 5（SEQ ID No.4）、Seq 8（SEQ ID No.5）、Seq 11（SEQ ID No.6）、Seq 18（SEQ ID No.7）和Seq 31（SEQ IDNo.8）中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的人凝血IXa因子的DNA适配体，其特征在于，所述DNA适配体的退火缓冲液为(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)
5.根据权利要求4所述的人凝血IXa因子的DNA适配体，其特征在于，所述DNA适配体的退火缓冲液的pH值为6~8。
6.根据权利要求4所述的人凝血IXa因子的DNA适配体，其特征在于，所述DNA适配体的退火程序为：95 ℃孵育5 min，65 ℃孵育30 min，50 ℃孵育30 min，37 ℃孵育30 min，25℃孵育30 min，4 ℃孵育2 h以上；
7.一种如权利要求1至权利要求6任一项所述人凝血IXa因子的DNA适配体的解毒剂，其特征在于，所述解毒剂的核苷酸序列如SEQ ID No.13和/或SEQ ID No.14所示。
8.一种如权利要求1至权利要求6任一项所述人凝血IXa因子的DNA适配体的应用，其特征在于，所述DNA适配体在制备抑制凝血制剂中的应用。
9.一种如权利要求1至权利要求6任一项所述人凝血IXa因子的DNA适配体的应用，其特征在于，所述DNA适配体在制备抗凝制剂、检测人凝血IXa因子中的应用。
10.一种如权利要求7所述人凝血IXa因子的DNA适配体的解毒剂的应用，其特征在于，所述解毒剂在恢复凝血中的应用。
...【技术特征摘要】
1.人凝血ixa因子的dna适配体，其特征在于，所述dna适配体为seq 5 （seq id no.4）、seq 11（seq id no.6）、seq 5-1t（seq id no.9）、seq 5-2tm、seq 11-1t和seq 11-2tm（seqid no.12）中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的人凝血ixa因子的dna适配体，其特征在于，所述dna适配体为单链核酸，退火形成特定的二级结构。
3.根据权利要求2所述的人凝血ixa因子的dna适配体，其特征在于，所述dna适配体为seq 1（seq id no.1）、seq 2（seq id no.2）、seq 3（seq id no.3）、seq 5（seq id no.4）、seq 8（seq id no.5）、seq 11（seq id no.6）、seq 18（seq id no.7）和seq 31（seq idno.8）中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的人凝血ixa因子的dna适配体，其特征在于，所述dna适配体的退火缓冲液为(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)（hepes）、氯化钠、氯化钙和醋酸镁的混...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨婧诗，杜潇，方亮，左华，龙梦飞，晋锦，
申请(专利权)人：四川省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：
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