【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于液相色谱-串联质谱(lc-ms/ms)检测，涉及一种基于lc-ms/ms同时测定阿米卡星和多粘菌素b的方法，尤其涉及基于lc-ms/ms同时测定血浆、血清中阿米卡星和多粘菌素b的方法。
技术介绍
1、阿米卡星(amikacin)是一种氨基糖苷类抗生素，常用于治疗严重的细菌感染，特别是对其他抗生素产生耐药性的细菌感染，如某些革兰阴性菌感染和肺结核治疗中的多药耐药菌株。多黏菌素b(polymyxin b，多黏菌素b1和b2，简称多黏菌素b)是一种多黏菌素类抗生素，用于治疗对其他抗生素产生耐药性的革兰阴性细菌感染，如产超广谱β-内酰胺酶(esbl)的细菌、卡班霉素耐药的细菌。它主要用于重症病情，包括肺炎、血流感染和皮肤感染。多黏菌素b通常通过静脉注射给药。由于其毒副作用，医生会严格控制用药剂量和监测患者反应。阿米卡星属于氨基糖苷类抗生素，而多黏菌素b1属于多黏菌素类抗生素。这两个抗生素属于不同的抗生素类别，具有不同的化学结构和作用机制。
2、阿米卡星和多黏菌素b是都属于最强效抗生素类别，通常仅在其他抗生素无法有效治疗感染或患者对其他抗生素产生耐药性时才会使用，作用非常强，同时副作用也大。因此，阿米卡星(amikacin)和多黏菌素b(polymyxin b)都是常用于重症监护病房(icu)的药物，用于治疗严重的细菌感染。由于其广谱抗生素活性和对一些多药耐药细菌的有效性，它们通常被用来处理各种最严重的感染。在这样的情况下，需要对病人的血药浓度进行密切监控，以便快速指导治疗方案的调整。这就要求在技术上，要能够实现
3、众所共知，要实现尽快检测的前提是在同一个方法中实现阿米卡星和多黏菌素b的同时测定。临床检测报告周期的英文缩写是"tat"，它代表"turnaround time"，意为报告的完成时间或处理周期。这是指从患者进行检测或样本采集到医疗机构最终提供检测结果的时间段。较短的tat通常对于紧急情况和及时的诊断非常重要。如果不能实现阿米卡星和多黏菌素b的同时测定，报告周期将至少延长4-8个小时以上，将极大的延误病人治疗方案的调整。
4、对于阿米卡星与多粘菌素b血药浓度的同时检测迫在眉睫。虽然大量的文章和专利提到了单独检测阿米卡星的方法、单独检测多黏菌素b的方法，但是系统检索目前已经发表的学术文章和专利申请，以及其他公开发表资料，均没有同时检测阿米卡星与多粘菌素b的方法。
5、
6、a.阿米卡星-大量的极性基团包围；
7、
8、b.多黏菌素b1-很长的碳链以及碳环；
9、
10、c.多黏菌素b2-很长的碳链以及碳环。
11、阿米卡星和多黏菌素同时测定常规方法和主要的困难总结如下：
12、1)阿米卡星结构式上有大量的极性基团，仅22个碳组成的碳骨架上，带有8个羟基，5个氨基(其中有4个伯胺和1个仲胺)，大量的极性基团带有很强的亲水性。多黏菌素b(b1和b2)都具有很长的碳骨架：55-56个碳，这么大的碳骨架带有很强的疏水性。色谱技术中最常用的c18色谱柱，c18色谱柱的填料通常由带有长碳链的十八烷基(c18)官能团的颗粒构成，其分离原理基于分子的疏水性质和相互作用。多黏菌素b是典型的疏水性化合物，适合使用c18色谱柱进行分离，目前的报道，分析多黏菌素b也均采用c18色谱柱进行分离。但是阿米卡星是典型的亲水性化合物，不适合采用c18色谱柱进行分离，在c18色谱柱上，阿米卡星表现出很强的极性，快速的从c18色谱柱上被洗脱，造成基质效应、干扰很大，如果勉强采用c18色谱柱分析阿米卡星的话，阿米卡星会表现出来出峰快，保留时间短等不利于生物样品分析的特点，典型色谱图见图1，保留时间仅为0.60分钟。
13、2)进一步，阿米卡星的结构上有大量的极性基团，和色谱柱上的填料会产生极强的相互作用，在吸附和解吸附的过程中，在色谱行为上会产生严重的拖尾，严重的拖尾峰造成检测结果不准确，以及产生干扰。但是阿米卡星和多黏菌素b性质相差比较大，如果只考虑阿米卡星的性质，在流动相里加入多种添加剂的话，很有可能会影响到多黏菌素b的准确检测。典型色谱图见图2，阿米卡星表现出和色谱填料强吸附。
14、3)阿米卡星和多黏菌素都需要测定给药后的谷浓度，因此对于检测灵敏度的要求较高，需要达到很低的检测下限，阿米卡星至少需要检测到500ng/ml的定量限，多黏菌素b1至少需要达到50ng/ml的定量限。阿米卡星和多黏菌素b需要同时测定，因此2种药物的前处理方法必须一致，才能实现同时达到所需要的的灵敏度要求。
15、4)阿米卡星结构上大量的极性基团，使得阿米卡星具有较高的亲和性，很容易吸附到色谱柱的填料表面上。并与色谱柱填料中的极性官能团之间会发生强烈的静电吸引力，这样的难题造成在高浓度样品进样后，再取空白样品进样，仍然能看到很高的阿米卡星的信号响应。这种问题会造成，在病人样品分析时，如果上一个样品是高浓度样品，将对下一个病人的样品产生极大的干扰并造成误判，造成很严重的影响。如果仅检测阿米卡星，可以通过多次注射空白样品的方式来逐渐减少干扰的发生，但是要实现阿米卡星和多黏菌素b的同时检测，多黏菌素b会被严重连累，导致分析流程和速度大大延长。
16、对现有专利文献检索，发现在先专利cn 114791470 a和cn 111830153 a建立了单独检测多黏菌素b的方法，但是这个方法没有办法用于检测阿米卡星，以在先专利报道的方法都没有办法实现血浆中阿米卡星和多黏菌素的同时检测，原因是这些方法对于阿米卡星都不能实现良好的保留和分离，导致基质效应高、血浆和血清中的干扰大，这些问题都会导致最终在病人样品中的检测结果不准确。在先专利cn 114923994 a建立了单独检测阿米卡星的方法，这个方法本身有比较多的问题，包括阿米卡星色谱严重拖尾，峰宽甚至达到了1分钟以上，将造成严重的残留和交叉污染，更不要说还要和多黏菌素b同时测定的问题。
17、综上所述，以目前传统分离技术，阿米卡星和多黏菌素很难实现同时分析，但是基于实际工作的需要，必须实现阿米卡星和多黏菌素b的同时分析。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术中阿米卡星与多粘菌素b1和多粘菌素b2不能同时检测的难题，提供一种基于lc-ms/ms同时测定人血浆、血清中阿米卡星和多粘菌素b的方法；本专利技术通过选择合适的色谱柱；进一步在前处理试剂和流动相中加入特定的添加剂，使阿米卡星和多黏菌素b1/b2可以在一次检测中被同时分析。本专利技术的检测方法具有高灵敏度、特异性、操作步骤简便等特点更适用于解决临床问题。
2、本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：
3、本专利技术提供一种同时检测血浆、血清中阿米卡星和多粘本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种同时检测血浆、血清中阿米卡星和多粘菌素B的方法，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内标溶液为含5％-10％甲酸的内标溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，多粘菌素B1与多粘菌素B2的内标为多粘菌素E；阿米卡星的内标为卡那霉素。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述内标溶液中含500-3000ng/mL的多粘菌素E和5-40μg/mL的卡那霉素。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，所述氨基柱为XBridge Amide液相色谱柱。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，色谱检测采用的流动相中添加了0.5％-5％的甲酸。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，流动相中，水相为含0.5-5％甲酸的水，有机相为含0.5-5％甲酸的乙腈/甲醇。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，梯度洗脱程序为：0-0.2min，80％有机相；0.2-3.5min，80％有机相-10％有机相；3.
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，质谱条件为在电喷雾电离正离子模式下，采用多反应监测的质谱扫描模式。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，具体质谱条件为：
...【技术特征摘要】
1.一种同时检测血浆、血清中阿米卡星和多粘菌素b的方法，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内标溶液为含5％-10％甲酸的内标溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，多粘菌素b1与多粘菌素b2的内标为多粘菌素e；阿米卡星的内标为卡那霉素。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述内标溶液中含500-3000ng/ml的多粘菌素e和5-40μg/ml的卡那霉素。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s2中，所述氨基柱为xbridge amide液相色谱柱。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s2中...
【专利技术属性】
技术研发人员：李文慧，张洁，谭晓杰，陈铭，郏征伟，徐永威，
申请(专利权)人：裕菁科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：
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