【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及e型肝炎病毒感染的检测方法、用于该方法的e型肝炎病毒感染检测用抗原多肽和试剂盒。
技术介绍
1、e型肝炎是由e型肝炎病毒(hev：hepatitis e virus)引起的急性或重症的肝炎，其死亡率据说高达a型肝炎的约10倍，也有妊娠期妇女中的死亡率达20％这样的报告。已知e型肝炎主要在印度、亚洲、非洲、中南美等发散地流行，即使在除此以外的地域，近年随着食物多样化，也有报告强烈怀疑由被hev污染的食物(例如，猪、野猪、鹿等的食用肉)的非加热经口摄取造成的发病的事例。另外，也散在地发现输血后感染、肝炎的再活化的例子，因此在受检者中调查hev感染的有无的检查的需要逐年提高。
2、以往，受检者中的hev感染的检测采取通过pcr的手法检测受检者的血清中的hev基因的方法。然而，血清中的hev基因仅在hev感染后约2周～1个月的有限期间内能够检测，因此该期间外的检测是困难的。
3、另外，由于感染了的人或动物分泌的hev的浓度低，因而使用抗e型肝炎病毒抗体(抗hev抗体)直接检测hev也是困难的。因此，现在被临床应用的方法的主流是通过用以hev为基础合成的抗原多肽、重组抗原检测受检者中的抗hev抗体，从而间接地检测hev感染的方法。抗hev抗体例如对于iga类或igm类，在e型肝炎病毒感染之后持续到约2～5个月。
4、作为这样的方法、在其中应用的试剂，例如，市售有用于用使用了固相化有重组hev抗原多肽的板和标记抗人iga抗体的2步elisa检测iga类抗hev抗体的试剂盒，非专利文献1中记载
5、另外，也市售有用于用使用了标记重组hev抗原多肽和抗人igm抗体的固相化板的2步elisa检测igm类抗hev抗体的试剂盒，日本特表2004-525613号公报(专利文献1)中记载了hev感染诊断用试剂盒，包含相当于基因1型的hev基因的orf2(ddbj accession no.：d11092)所编码的氨基酸序列的序列的394～606位的多肽片段。
6、现有技术文献
7、专利文献
8、专利文献1：日本特表2004-525613号公报
9、非专利文献
10、非专利文献1：mizuo h.et al.，j.clin.microbopl.，vol.40，no.9，2002年，p.3209-3218
技术实现思路
1、专利技术要解决的课题
2、然而，本专利技术者们对于现在在日本被临床应用的e型肝炎病毒感染检测用试剂盒进行了进一步验证，结果确认了多个用上述的现有的试剂盒不能检测的样本，发现了使用这些试剂盒的方法的抗hev抗体的检测灵敏度尚不充分。
3、本专利技术是鉴于上述本专利技术者们所发现的课题而提出的，目的在于提供能够比现有的方法高灵敏度地检测抗e型肝炎病毒抗体的e型肝炎病毒感染的检测方法、用于该方法的e型肝炎病毒感染检测用抗原多肽和试剂盒。
4、用于解决课题的手段
5、本专利技术者们发现，通过间接地检测hev感染的方法、即在通过用hev抗原检测抗hev抗体来检测hev感染的方法中，特别使用位于由编码hev的衣壳蛋白(capsid protein)的orf2所编码的氨基酸的c末端侧的e2s结构域作为hev抗原多肽，并且将该多肽的长度缩短为200残基以下，从而即使对于用现有的试剂盒不能检测抗hev抗体的样本，也能够高灵敏度地检测，从而完成了本专利技术，所述现有的试剂盒是使用由基因4型的hev基因的orf2(ddbj/genbank/embl accession no.：ab082545)所编码的氨基酸的111～660位作为hev抗原多肽的试剂盒、使用由基因1型的hev基因的orf2(ddbj accession no.：d11092)所编码的氨基酸的394～606位作为hev抗原多肽的试剂盒。通过该见解得到的本专利技术的方案如下。
6、[1]
7、e型肝炎病毒感染的检测方法，包括以选自下述(1a)～(1c)、(2a)～(2c)、(3a)～(3c)、和(4a)～(4c)中的至少1种多肽作为抗原多肽来检测试样中的抗e型肝炎病毒抗体的检测工序。
8、(1a)由包含序列号1所记载的氨基酸序列中的28～175位的氨基酸、且全长为序列号1所记载的氨基酸序列中的200个残基以下的氨基酸序列组成的多肽
9、(1b)由在包含序列号1所记载的氨基酸序列中的28～175位的氨基酸、且全长为序列号1所记载的氨基酸序列中的200个残基以下的氨基酸序列中替换、缺失、插入和/或添加了1个或多个氨基酸的氨基酸序列组成的多肽
10、(1c)由与包含序列号1所记载的氨基酸序列中的28～175位的氨基酸、且全长为序列号1所记载的氨基酸序列中的200个残基以下的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列组成的多肽
11、(2a)由包含序列号2所记载的氨基酸序列中的28～175位的氨基酸、且全长为序列号2所记载的氨基酸序列中的200个残基以下的氨基酸序列组成的多肽
12、(2b)由在包含序列号2所记载的氨基酸序列中的28～175位的氨基酸、且全长为序列号2所记载的氨基酸序列中的200个残基以下的氨基酸序列中替换、缺失、插入和/或添加了1个或多个氨基酸的氨基酸序列组成的多肽
13、(2c)由与包含序列号2所记载的氨基酸序列中的28～175位的氨基酸、且全长为序列号2所记载的氨基酸序列中的200个残基以下的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列组成的多肽
14、(3a)由包含序列号3所记载的氨基酸序列中的28～175位的氨基酸、且全长为序列号3所记载的氨基酸序列中的200个残基以下的氨基酸序列组成的多肽
15、(3b)由在包含序列号3所记载的氨基酸序列中的28～175位的氨基酸、且全长为序列号3所记载的氨基酸序列中的200个残基以下的氨基酸序列中替换、缺失、插入和/或添加了1个或多个氨基酸的氨基酸序列组成的多肽
16、(3c)由与包含序列号3所记载的氨基酸序列中的28～175位的氨基酸、且全长为序列号3所记载的氨基酸序列中的200个残基以下的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列组成的多肽
17、(4a)由包含序列号4所记载的氨基酸序列中的28～175位的氨基酸、且全长为序列号4所记载的氨基酸序列中的200个残基以下的氨基酸序列组成的多肽
18、(4b)由在包含序列号4所记载的氨基酸序列中的28～175位的氨基酸、且全长为序列号4所记载的氨基酸序列中的200个残基以下的氨基酸序列中替换、缺失、插入和/或添加了1个或多个氨基酸的氨基酸序列组成的多肽
19、(4c)由与包含序列号4本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.E型肝炎病毒感染的检测方法，包括以选自下述(1a)～(1c)、(2a)～(2c)、(3a)～(3c)和(4a)～(4c)中的至少1种多肽作为抗原多肽来检测试样中的抗E型肝炎病毒抗体的检测工序，
2.根据权利要求1所述的E型肝炎病毒感染的检测方法，以选自所述(3a)～(3c)中的至少1种多肽、与选自所述(1a)～(1c)、(2a)～(2c)和(4a)～(4c)中的至少1种多肽的组合作为所述抗原多肽。
3.根据权利要求1所述的E型肝炎病毒感染的检测方法，以由选自所述(3a)～(3c)中的任意1种多肽、与选自所述(1a)～(1c)、(2a)～(2c)和(4a)～(4c)中的任意1种多肽组成的二聚体作为所述抗原多肽。
4.根据权利要求1所述的E型肝炎病毒感染的检测方法，所述抗E型肝炎病毒抗体的同种型为IgM。
5.根据权利要求1所述的E型肝炎病毒感染的检测方法，
6.E型肝炎病毒感染检测用抗原多肽，是用于权利要求1所述的E型肝炎病毒感染的检测方法的抗原多肽，并且是选自下述(1a)～(1c)、(2a)～(2c)、(3a)～(3
7.根据权利要求6所述的E型肝炎病毒感染检测用抗原多肽，是选自所述(3a)～(3c)中的至少1种多肽、与选自所述(1a)～(1c)、(2a)～(2c)和(4a)～(4c)中的至少1种多肽的组合。
8.根据权利要求6所述的抗原多肽，是由选自所述(3a)～(3c)中的任意1种多肽、与选自所述(1a)～(1c)、(2a)～(2c)和(4a)～(4c)中的任意1种多肽组成的二聚体。
9.根据权利要求6所述的抗原多肽，是经标记物质标记的标记体。
10.E型肝炎病毒感染检测用试剂盒，是用于权利要求1所述的E型肝炎病毒感染的检测方法的试剂盒，包含权利要求6～9中的任一项所述的抗原多肽。
11.根据权利要求10所述的E型肝炎病毒感染检测用试剂盒，进一步包含具备非水溶性载体和能与抗E型肝炎病毒抗体结合的探针分子的捕捉体。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.e型肝炎病毒感染的检测方法，包括以选自下述(1a)～(1c)、(2a)～(2c)、(3a)～(3c)和(4a)～(4c)中的至少1种多肽作为抗原多肽来检测试样中的抗e型肝炎病毒抗体的检测工序，
2.根据权利要求1所述的e型肝炎病毒感染的检测方法，以选自所述(3a)～(3c)中的至少1种多肽、与选自所述(1a)～(1c)、(2a)～(2c)和(4a)～(4c)中的至少1种多肽的组合作为所述抗原多肽。
3.根据权利要求1所述的e型肝炎病毒感染的检测方法，以由选自所述(3a)～(3c)中的任意1种多肽、与选自所述(1a)～(1c)、(2a)～(2c)和(4a)～(4c)中的任意1种多肽组成的二聚体作为所述抗原多肽。
4.根据权利要求1所述的e型肝炎病毒感染的检测方法，所述抗e型肝炎病毒抗体的同种型为igm。
5.根据权利要求1所述的e型肝炎病毒感染的检测方法，
6.e型肝炎病毒感染检测用抗原多肽，是用于权利要求1所述的e型肝炎病毒感染的...
【专利技术属性】
技术研发人员：槙昇，森健一，八木慎太郎，
申请(专利权)人：株式会社先端生命科学研究所，
类型：发明
国别省市：
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