【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物制品，具体涉及一种交叉反应性提高、抗原谱拓展的重组o型口蹄疫疫苗毒株及其构建方法和应用。
技术介绍
1、口蹄疫(foot-and-mouth disease，fmd)是猪、牛和羊等70多种偶蹄动物感染的一种烈性传染病。目前，我国对fmd的防控主要采取以灭活疫苗免疫为主的综合防控措施，尽管灭活疫苗在预防、控制和净化fmd方面发挥了非常重要的作用，但口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,fmdv)血清型多，基因和抗原高度易变，使fmd很难防控。
2、近年来，我国主要流行a型和o型fmd，其中a型fmd趋于控制，而o型fmdv依然是危害我国畜牧养殖业最严重的血清型。系统进化树分析显示我国当前流行的o型fmdv主要分为古典中国(cathay)、中东-南亚型(me-sa)、东南亚型(sea)三种拓扑型。其中cathay拓扑型fmdv株主要引起猪发病，自1970年首次发现，2010年后很少出现，但2016年以来，cathay拓扑型毒株引发的fmd逐渐增多，并已经成为危害我国养猪业最重要的基因型。三个拓扑型中cathay拓扑型流行毒株抗原变异最大，已经遗传进化为四个分支：旧猪毒、新猪毒-1、新猪毒-2、新猪毒-3，其中旧猪毒分支的病毒株免疫原性普遍较强(如o/zk/93，os99)，而新猪毒2和3分支的免疫原性较弱，很难筛选新的疫苗株，且新猪毒-3分支的毒株抗原变异最大，现用疫苗株与其抗原不匹配，迫切需要筛选新的疫苗株。
3、fmdv粒子由结构蛋白vp4、vp2、vp3
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种交叉反应性提高、抗原谱拓展的重组o型口蹄疫疫苗毒株，在嵌合口蹄疫病毒vp1结构蛋白中插入口蹄疫cathay拓扑型流行株vp1蛋白g-h环抗原表位得到，该g-h环抗原表位的插入显著提高了重组病毒对当前流行的cathay拓扑型口蹄疫病毒的交叉反应性，拓展了重组口蹄疫病毒的抗原谱。
2、本专利技术提供了一种重组o型口蹄疫疫苗毒株，在口蹄疫病毒株rhn/turvp1的基础上对vp1结构蛋白进行以下改造：重组表达插入有cathay拓扑型fmdv o/gxcx/cha/2018病毒株vp1中g-h环基因的fmdv o/tur/5/2009株vp1结构蛋白。
3、优选的，所述cathay拓扑型fmdv o/gxcx/cha/2018病毒株vp1中g-h环的氨基酸序列如seq id no:1所示。
4、优选的，所述cathay拓扑型fmdv o/gxcx/cha/2018病毒株vp1中g-h环基因插入在fmdv o/tur/5/2009株vp1结构蛋白g-h环的rgd上游或下游处。
5、优选的，所述插入有cathay拓扑型fmdv o/gxcx/cha/2018病毒株vp1中g-h环的fmdv o/tur/5/2009株vp1结构蛋白的氨基酸序列如seq id no:3所示。
6、本专利技术提供了所述重组o型口蹄疫疫苗毒株的构建方法，包括以下步骤：
7、将cathay拓扑型fmdv o/gxcx/cha/2018病毒株vp1中g-h环基因序列合成至psk-z123/turvp1半长质粒中，得到重组半长质粒；
8、从所述重组半长质粒中回收含重组vp1基因的5400bp的基因片段；
9、将所述含重组vp1基因的5400bp的基因片段克隆至fmdv重组全长质粒pofs/turvp1中，得到重组质粒pqud；
10、将所述重组质粒pqud进行病毒拯救，得到o型口蹄疫疫苗毒株。
11、优选的，所述cathay拓扑型fmdv o/gxcx/cha/2018病毒株vp1中g-h环基因的核苷酸序列如seq id no:2所示。
12、优选的，所述重组vp1基因的核苷酸序列如seq id no:4所示。
13、本专利技术提供了所述重组o型口蹄疫疫苗毒株或所述构建方法得到的重组o型口蹄疫疫苗毒株在制备抗原谱扩展的o型口蹄疫疫苗中的应用。
14、优选的，所述o型口蹄疫疫苗的抗原谱包括以下至少一种类型的流行株：panasia、mya98、ind-2001和cathay。
15、本专利技术提供了一种重组o型口蹄疫疫苗毒株，在口蹄疫病毒株rhn/turvp1的基础上对vp1结构蛋白进行以下改造：重组表达插入有cathay拓扑型fmdv o/gxcx/cha/2018病毒株vp1中g-h环基因的fmdv o/tur/5/2009株vp1结构蛋白。本专利技术利用反向遗传学手段在基因工程的fmdv vp1基因中插入cathay拓扑型流行毒株24个氨基酸长g-h环抗原表位基因，再克隆至fmdv全长质粒pofs/turvp1中，得到重组全长质粒。线化的重组全长质粒转染表达t7 rna聚合酶的细胞中拯救得到重组病毒rhn/turvp1/gxgh24。结果表明，该重组病毒遗传稳定，g-h环的插入轻微的影响了重组病毒的复制性能，但显著(p<0.05)提高了重组病毒对cathay拓扑型流行病毒的交叉反应性，拓展了fmdv的抗原谱。因此，本专利技术构建的重组病毒有潜力做o型fmd疫苗候选株，用于我国当前流行的所有o型fmd的有效防控。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种重组O型口蹄疫疫苗毒株，其特征在于，在口蹄疫病毒株rHN/TURVP1的基础上对VP1结构蛋白进行以下改造：重组表达插入有Cathay拓扑型FMDV O/GXCX/CHA/2018病毒株VP1中G-H环基因的FMDV O/TUR/5/2009株VP1结构蛋白。
2.根据权利要求1所述重组O型口蹄疫疫苗毒株，其特征在于，所述Cathay拓扑型FMDVO/GXCX/CHA/2018病毒株VP1中G-H环的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.根据权利要求1所述重组O型口蹄疫疫苗毒株，其特征在于，所述Cathay拓扑型FMDVO/GXCX/CHA/2018病毒株VP1中G-H环插入在FMDV O/TUR/5/2009株VP1结构蛋白G-H环的RGD上游或下游处。
4.根据权利要求1～3中任意一项所述重组O型口蹄疫疫苗毒株，其特征在于，所述插入有Cathay拓扑型FMDV O/GXCX/CHA/2018病毒株VP1中G-H环基因的FMDV O/TUR/5/2009株VP1结构蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
5
6.根据权利要求5所述构建方法，其特征在于，所述Cathay拓扑型FMDV O/GXCX/CHA/2018病毒株VP1中G-H环核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
7.根据权利要求5所述构建方法，其特征在于，所述重组VP1基因的核苷酸序列如SEQID NO:4所示。
8.权利要求1～4中任意一项所述重组O型口蹄疫疫苗毒株或权利要求5～7中任意一项所述构建方法得到的重组O型口蹄疫疫苗毒株在制备抗原谱扩展的O型口蹄疫疫苗中的应用。
9.根据权利要求8所述应用，其特征在于，所述重组O型口蹄疫疫苗的抗原谱包括以下至少一种类型的流行株：PanAsia、Mya98、Ind-2001和Cathay。
10.一种抗原谱扩展的O型口蹄疫疫苗，其特征在于，包括权利要求1～4中任意一项所述重组O型口蹄疫疫苗毒株或权利要求5～7中任意一项所述构建方法得到的重组O型口蹄疫疫苗毒株和佐剂。
...【技术特征摘要】
1.一种重组o型口蹄疫疫苗毒株，其特征在于，在口蹄疫病毒株rhn/turvp1的基础上对vp1结构蛋白进行以下改造：重组表达插入有cathay拓扑型fmdv o/gxcx/cha/2018病毒株vp1中g-h环基因的fmdv o/tur/5/2009株vp1结构蛋白。
2.根据权利要求1所述重组o型口蹄疫疫苗毒株，其特征在于，所述cathay拓扑型fmdvo/gxcx/cha/2018病毒株vp1中g-h环的氨基酸序列如seq id no:1所示。
3.根据权利要求1所述重组o型口蹄疫疫苗毒株，其特征在于，所述cathay拓扑型fmdvo/gxcx/cha/2018病毒株vp1中g-h环插入在fmdv o/tur/5/2009株vp1结构蛋白g-h环的rgd上游或下游处。
4.根据权利要求1～3中任意一项所述重组o型口蹄疫疫苗毒株，其特征在于，所述插入有cathay拓扑型fmdv o/gxcx/cha/2018病毒株vp1中g-h环基因的fmdv o/tur/5/2009株vp1结构蛋白的氨基酸序列如seq id...
【专利技术属性】
技术研发人员：李平花，卢曾军，张克强，刘峰，马雪青，孙普，李冬，曹轶梅，白兴文，付元芳，李坤，袁红，刘在新，章兴赜，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。