【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物检测领域，涉及一种检测动物双歧杆菌菌株的引物对、试剂盒及其检测方法。
技术介绍
1、动物双歧杆菌(bifidobacterium animalis)是革兰氏阳性多形态杆菌，呈y字形、v字形、弯曲状、刮勺状，其典型的形态特征是有分叉的杆菌，菌落光滑、凸圆、边缘完整、呈乳白色、闪光并有柔软质地。动物双歧杆菌不形成芽孢，无运动性，专性厌氧，最适生长温度为3～41℃；最适发酵温度为35～40℃；最低生长温度为25～28℃；最高生长温度为43～45℃；最适生长ph值为6.7～7.0，在ph4.5～5.0以下或ph值为8.0～8.5以上的环境都不生长，主要分布于人体肠道中，部分哺乳动物的消化道中也大量存在动物双歧杆菌。动物双歧杆菌作为一种益生菌，参与免疫、营养、消化和保护等一系列的生理过程，对保护人体健康具有重要的功能，已被用作发酵乳和发酵饮料等食品的发酵剂，尤其在发酵乳中应用较多。但是其是否真正添加以及是否能够存活于发酵乳制品和发酵饮料中则需要具备cnas资质的经认可的检测机构进行快速鉴定。传统的检测方法费时费力，通常需要3～5天才能确定。此外，传统的检测方法按照国标gb4789.34-2016的要求，所需的样品量至少为25g或25ml，因此检测的灵敏度通常＞4cfu/g或＞4cfu/ml。由上可知，传统的发酵乳制品或发酵饮料中动物双歧杆菌的检测方法的检测效率较低，检测成本较高。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种检测动物双歧杆菌菌株的引物对、试剂盒及其检测方
2、实现本专利技术的目的的技术方案如下：
3、特异性扩增动物双歧杆菌菌株的引物对，为核苷酸序列如seq id no.1所示的gyrb-l和核苷酸序列如seq id no.2所示的gyrb-r引物对。
4、本专利技术所述的gyrb-l和gyrb-r引物对所扩增的序列为gyrb基因，gyrb基因是一种编码dna螺旋酶b亚基的基因。
5、上述引物对在制备特异性扩增动物双歧杆菌菌株试剂盒中的应用。
6、本专利技术所述的动物双歧杆菌，包括动物双歧杆菌和动物双歧杆菌乳亚种。
7、用于特异性扩增动物双歧杆菌菌株的试剂盒，其包括核苷酸序列如seq id no.1所示的gyrb-l和核苷酸序列如seq id no.2所示的gyrb-r引物对。
8、进一步地，所述的试剂盒中还包括dntp、pcr缓冲液、mg2+、taq dna聚合酶和ddh2o中的一种或多种；更佳地，所述的试剂盒还包括基因组dna抽提试剂。
9、检测动物双歧杆菌菌株的方法，包括以下步骤：
10、(1)提取待检样品的基因组dna，以提取的基因组dna为模板，核苷酸序列如seq idno.1所示的gyrb-l和核苷酸序列如seq id no.2所示的gyrb-r引物对作为引物，进行pcr扩增；
11、(2)检测步骤(1)pcr扩增产物中是否在270bp位置存在单一扩增产物，如果存在270bp位置的单一扩增产物，则说明待检样品中含有动物双歧杆菌菌株，如果不存在270bp位置的单一扩增产物，则待检样品中不含有动物双歧杆菌。
12、步骤(1)中，待检样品为本领域常规的待检样品，较佳地为发酵乳制品或发酵饮料制品。
13、步骤(1)中，基因组dna的提取方法为本领域常规的提取方法；较佳地，为ctab法。
14、步骤(1)中，pcr扩增的反应体系为本领域常规的反应体系；较佳地，为1×pcr反应缓冲液，12.5mmol/l mg2+，0.25mmol/l dntp，0.2μm引物gyrb-l，0.2μm引物gyrb-r，taq酶0.04u/μl，待检样品的基因组dna11.6ng/μl。
15、步骤(1)中，pcr扩增的反应程序为本领域常规的反应程序；较佳地，为94℃预变性5min，之后开始以下循环，每个循环的程序为：94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s；循环共30个；循环结束后，72℃延伸10min，降温至12℃，结束。
16、步骤(2)中，检测方法为本领域常规的检测方法，可以观察所述扩增产物即可，例如凝胶电泳检测；较佳地，为1.5％-2.0％琼脂糖凝胶电泳检测；最佳地，为2.0％琼脂糖凝胶电泳检测。
17、与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
18、本专利技术的检测方法检测动物双歧杆菌，检测时间最快仅需24小时，提高了检测效率；简单易行，检测成本低；检测结果可靠，结果判定简单，可以特异性地判断是否为动物双歧杆菌。本专利技术为发酵乳制品或发酵饮料制品检测提供了一种简单快速灵敏的检测动物双歧杆菌的方法，对判别发酵乳制品或发酵饮料制品是否添加有动物双歧杆菌具有较大应用价值。
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1. 特异性扩增动物双歧杆菌菌株的引物对，其特征在于，为核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示的gyrB-L和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的gyrB-R引物对。
2.根据权利要求1所述的引物对在制备特异性扩增动物双歧杆菌菌株试剂盒中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的动物双歧杆菌为动物双歧杆菌或动物双歧杆菌乳亚种。
4. 用于特异性扩增动物双歧杆菌菌株的试剂盒，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQID NO.1所示的gyrB-L和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的gyrB-R引物对。
5. 根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括dNTP、PCR缓冲液、Mg2+、Taq DNA聚合酶和ddH2O中的一种或多种。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括基因组DNA抽提试剂。
7.检测动物双歧杆菌菌株的方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，待检样品为发酵乳制品或发酵饮料制品；基因组DNA的提取方法为
9. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，PCR扩增的反应体系为：1×PCR反应缓冲液，12.5 mmol/L Mg2+，0.25 mmol/L dNTP，0.2 μM引物gyrB-L，0.2 μM引物gyrB-R，Taq酶0.04 U/μL，待检样品的基因组DNA11.6 ng/μL；PCR扩增的反应程序为：94 ℃预变性5 min，之后开始以下循环，每个循环的程序为：94 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，72℃延伸30 s；循环共30个；循环结束后，72 ℃延伸10 min，降温至12 ℃，结束。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，检测方法为凝胶电泳检测；较佳地，为1.5％-2.0%琼脂糖凝胶电泳检测。
...【技术特征摘要】
1. 特异性扩增动物双歧杆菌菌株的引物对，其特征在于，为核苷酸序列如seq idno.1所示的gyrb-l和核苷酸序列如seq id no.2所示的gyrb-r引物对。
2.根据权利要求1所述的引物对在制备特异性扩增动物双歧杆菌菌株试剂盒中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的动物双歧杆菌为动物双歧杆菌或动物双歧杆菌乳亚种。
4. 用于特异性扩增动物双歧杆菌菌株的试剂盒，其特征在于，包括核苷酸序列如seqid no.1所示的gyrb-l和核苷酸序列如seq id no.2所示的gyrb-r引物对。
5. 根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括dntp、pcr缓冲液、mg2+、taq dna聚合酶和ddh2o中的一种或多种。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括基因组dna抽提试剂。
7.检测动物双歧杆菌菌株的方法，其特征在...
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