【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，涉及一种来自里氏木霉(trichoderma reesei)的纤维素二糖水解酶(cbh1)的突变体及其应用。
技术介绍
1、公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、利用纤维素降解酶(cbh)处理降解纤维素是纤维素高值化利用的主要方法之一。纤维素底物对cbh的催化降解存在抵抗力，是纤维素降解存在主要挑战之一。为了提高cbh的催化活性，目前可以采用定点突变、随机突变、loop改造、去除糖基化、底物催化通道改造等蛋白质工程手段进行。专利技术人经过研究发现，虽然目前通过蛋白工程改造，可以提高对cbh1催化活性，但是cbh1的催化活性仍有待进一步改进。
技术实现思路
1、为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶的突变体及其应用，本专利技术通过对来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶的理性设计，成功提高了纤维素二糖水解酶催化活性。
2、为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
3、一方面，一种来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶的突变体，来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶为trcel7a，所述突变体的突变位点为t97a和/或k166a。
4、另一方面，编码上述来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶的突变体的核酸。
5、第三方面，一种表达载体，其包括编码上述来自里氏木霉的纤维素二糖水
6、在一些实施例中，所述表达载体的骨架载体选自ptci载体，所述ptci载体是一种具有潮霉素抗性的整合载体。
7、第四方面，一种宿主细胞，其能够转化或转染上述表达载体。
8、在一些实施例中，所述宿主细胞为里氏木霉(t.reesei)。
9、所述宿主细胞的构建方法包括：将构建的表达载体转化如宿主细胞。
10、第五方面，一种来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶的突变体的制备方法，包括：培养上述宿主细胞，诱导所述宿主细胞对所述突变体进行表达。
11、第六方面，一种上述上述突变体、核酸、表达载体、宿主细胞或制备方法获得的产物在催化水解纤维素中的应用。
12、第七方面，一种生物制剂，包括上述突变体、核酸、表达载体、宿主细胞或制备方法获得的产物。
13、第八方面，一种催化水解微晶纤维素的方法，将上述生物制剂添加至含有微晶纤维素缓冲溶液中，在温度为40～50℃、ph为4.5～5.8的条件下进行催化水解。
14、在一些实施例中，催化水解的时间为12～72h。
15、本专利技术的有益效果为：
16、本专利技术通过将trcel7a蛋白的97位的苏氨酸突变为丙氨酸获得trcel7a-t97a突变体，通过将trcel7a蛋白的166位的赖氨酸突变为丙氨酸获得trcel7a-k166a突变体，与trcel7a蛋白相比，trcel7a-t97a、trcel7a-k166a突变体的纤维素二糖水解酶的催化活性得到了显著提高。经过催化活性研究表明，与trcel7a的相比，trcel7a-t97a突变体和trcel7a-k166a突变体在45℃反应12h条件下的催化活性分别提高了37％和68％。
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1.一种来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶的突变体，其特征是，来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶为TrCel7A，所述突变体的突变位点为T97A和/或K166A。
2.编码权利要求1所述的来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶的突变体的核酸。
3.一种表达载体，其特征是，其包括编码权利要求1所述的来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶的突变体的核酸。
4.如权利要求3所述的表达载体，其特征是，所述表达载体的骨架载体选自pTCI载体。
5.一种宿主细胞，其特征是，其能够转化或转染权利要求3或4所述的表达载体。
6.如权利要求5所述的宿主细胞，其特征是，所述宿主细胞为里氏木霉。
7.一种来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶的突变体的制备方法，其特征是，包括：培养权利要求5或6所述的宿主细胞，诱导所述宿主细胞对所述突变体进行表达。
8.一种权利要求1所述的突变体、权利要求2所述的核酸、权利要求3或4所述的表达载体、权利要求5或6所述的宿主细胞或权利要求7所述的制备方法获得的产物在催化水解纤维素中的应用。
9.一种生物制剂
10.一种催化水解微晶纤维素的方法，其特征是，将权利要求9所述的生物制剂添加至含有微晶纤维素缓冲溶液中，在温度为40～50℃、pH为4.5～5.8的条件下进行催化水解；优选地，催化水解的时间为12～72h。
...【技术特征摘要】
1.一种来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶的突变体，其特征是，来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶为trcel7a，所述突变体的突变位点为t97a和/或k166a。
2.编码权利要求1所述的来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶的突变体的核酸。
3.一种表达载体，其特征是，其包括编码权利要求1所述的来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶的突变体的核酸。
4.如权利要求3所述的表达载体，其特征是，所述表达载体的骨架载体选自ptci载体。
5.一种宿主细胞，其特征是，其能够转化或转染权利要求3或4所述的表达载体。
6.如权利要求5所述的宿主细胞，其特征是，所述宿主细胞为里氏木霉。
7.一种来自里氏木霉的纤维素二糖水解酶的突变体的制备方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：方诩，牛康乐，倪紫源，马维，吴志红，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：
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