靶向CD5的膜表面工程化NK细胞的制备方法及药物组合物及应用技术

本发明专利技术涉及细胞免疫治疗领域，提供一种靶向CD5的膜表面工程化NK细胞的制备方法及药物组合物及应用。包括以下步骤：S1、所述NK细胞为从血液中提取单个核细胞，体外激活；S2、采用步骤S1获得的NK细胞与Ac4ManNAz溶液共培养24‑72小时，获得NK‑Ac4ManNAz；S3、制备DBCO‑PEG4‑NH2修饰的Anti‑CD5抗体，通过两步法酶促DBCO‑PEG4‑NH2修饰抗体Fc段；S4、制备DBCO‑PEG4‑NHS修饰的IL‑15细胞因子；S5、通过点击化学将步骤S3得到的Anti‑CD5抗体和步骤S4得到的IL‑15细胞因子共价偶联于步骤S2得到的NK‑Ac4ManNAz，获得NK‑CD5‑IL‑15细胞。优点：NK‑CD5‑IL‑15细胞在赋予NK细胞靶向杀伤T‑ALL肿瘤的同时，靶向递送IL‑15细胞因子，使靶向CD5的NK细胞具有体内扩增能力，二者协同增强NK细胞杀伤T‑ALL以及其他CD5+肿瘤的疗效，具有极大的临床应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞免疫治疗领域，更具体地，涉及一种靶向cd5的膜表面工程化nk细胞的制备方法及药物组合物及应用。

技术介绍

1、急性淋巴细胞白血病是儿童肿瘤中最为常见的恶性肿瘤之一，急性t淋巴细胞白血病(t cell acute lymphocyte leukemia,t-all)在其中约占10-15％。相较于b型急性淋巴细胞白血病(b cell acute lymphocyte leukemia,b-all)儿童t-all的治疗效果较差，复发难治t-all患者无事件生存率和总生存率低于25％。

2、抗原嵌合受体t细胞(chimeric antigen receptor t cell,car-t)在b型血液恶性肿瘤中取得了令人瞩目的疗效，但car-t在治疗复发难治t-all上存在t细胞功能异常、肿瘤污染、靶点重叠等问题，因此使用受到明显的限制。

3、自然杀伤细胞(natural killer cell,nk)可以非特异性识别和杀伤肿瘤细胞，且在抗肿瘤的同时没有明显gvhd反应，最重要的是nk细胞与t细胞在许多膜表面蛋白存在差异，这使本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种靶向CD5的膜表面工程化NK细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的靶向CD5的膜表面工程化NK细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤S1具体为：采集健康人外周血液，提取单个核细胞用Anti-CD16抗体、IL-2、IL-15、IL-18、IL-21细胞因子在体外激活12～15天此处，获得高纯度的NK细胞。

3.根据权利要求1所述的靶向CD5的膜表面工程化NK细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤S2具体为：采用步骤S1获得的NK细胞，配制细胞浓度为1×107-5×107/mL的NK细胞悬液；加入浓度为10-100μM的Ac4Man...

【技术特征摘要】

1.一种靶向cd5的膜表面工程化nk细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的靶向cd5的膜表面工程化nk细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤s1具体为：采集健康人外周血液，提取单个核细胞用anti-cd16抗体、il-2、il-15、il-18、il-21细胞因子在体外激活12～15天此处，获得高纯度的nk细胞。

3.根据权利要求1所述的靶向cd5的膜表面工程化nk细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤s2具体为：采用步骤s1获得的nk细胞，配制细胞浓度为1×107-5×107/ml的nk细胞悬液；加入浓度为10-100μm的ac4mannaz溶液，共培养24-72小时，获得nk-ac4mannaz。

4.根据权利要求1所述的靶向cd5的膜表面工程化nk细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤s3具体为：取pbs溶解anti-cd5抗体稀释至浓度0.8～1.5mg/ml，加入肽-n-糖苷酶f6～10unites，37℃过夜，超滤离心后，超滤后的液体再次溶解于0.8～1.5ml pbs，后再加入谷氨酰胺酶转氨酶6～10unites和8～15μl浓度为80～120mm的dbco-peg4-nh2，37℃过夜后，超滤离心去除多余物质，获得dbco-cd5抗体。

5.根据权利要求1所述的靶向cd5的膜表面工程化nk细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤s4具体为：将dbco-peg4-nhs溶解于二甲亚砜中，终浓度为80～120mm，pbs溶解il-15细胞因子至0.8～1.2μg/ml，取8～10μl溶解后的dbco-peg4-nhs与il-15细...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄松音，刘典典，姚燕丹，苏鸿君，杨洁文，
申请(专利权)人：中山大学孙逸仙纪念医院，
类型：发明
国别省市：