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检测霍乱弧菌O1及O139群的ERA引物探针组合物及试剂盒制造技术

技术编号:40611128 阅读:4 留言:0更新日期:2024-03-12 22:19
本发明专利技术公开了一种检测霍乱弧菌O1及O139群的ERA引物探针组合物,包括引物对,所述引物对的序列如SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2所示,还包括探针,所述探针的序列为:5‑ttcagtaaga tatgcaatcc tcagggta/iFAMdT/c/idSp//iBHQ1dT/tcatcctt tcaatcg‑C3Spacer‑3。还公开了其在制备检测霍乱弧菌O1及O139群的试剂中的应用,以及检测霍乱弧菌O1及O139群的试剂盒和方法。本发明专利技术的有益效果是操作简便、检验耗时少,不需要复杂昂贵的设备和实验室,可应用于快速检测霍乱弧菌O1及O139群核酸的试剂或试剂盒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种霍乱弧菌o1及o139群的era引物探针组合物及试剂盒,属于细菌检测。


技术介绍

1、霍乱是由霍乱弧菌(vibrio cholerae)o1群或o139群引起的急性肠道传染病,具有发病急、传播快、波及面广的特点,是我国《传染病防治法》规定的两种甲类传染病之一。

2、霍乱弧菌根据菌体(o)抗原的不同,可分出200个以上的o血清群,但仅发现o1群和o139群的霍乱弧菌能引发霍乱。

3、霍乱患者有腹泻症状,尤其是剧烈的无痛性水样腹泻,应马上到医院就诊,并做霍乱弧菌的培养检查。与霍乱感染者一起就餐或密切接触的人也应采集粪便或肛拭检查,以确定是否感染。在霍乱疫区内或近日去过霍乱疫区,出现腹泻,应及时到医院就诊并留粪便作霍乱细菌学检查。

4、霍乱弧菌可采用菌体分离培养、pcr检测或抗原检测等方法进行检测,菌体分离培养耗时长、pcr检测需要专业实验室和设备、抗原检测灵敏度略低。因此,建立一种简单、快速、灵敏检测霍乱弧菌o1群和o139群的检测方法,对于霍乱检出及应对能力有重要意义。

5、本专利技术提供的检测霍乱弧菌o1及o139群核酸的era引物探针组合,可以不需要昂贵的全自动荧光pcr仪,利用恒温设备即可简单、快速地检测霍乱弧菌o1及o139群。


技术实现思路

1、本专利技术的目的是提供一种霍乱弧菌o1及o139群的era引物探针组合物,能够快速检测霍乱弧菌o1及o139群。

2、本专利技术采用的技术方案为:

3、一种检测霍乱弧菌o1及o139群的era引物探针组合物,包括引物对,所述引物对的序列如seq id no:1及seq id no:2所示,还包括探针,所述探针的序列为:5-ttcagtaagatatgcaatcc tcagggta/ifamdt/c/idsp//ibhq1dt/tcatcctt tcaatcg-c3 spacer-3,

4、探针的修饰信息解释如下:

5、/ifamdt/,5’端第29个碱基t标记有fam荧光报告基团;

6、/idsp/,3’端第17碱基替换为四氢呋喃;

7、/ibhq1dt/,3’端第16碱基t标记有bhq1荧光淬灭基团;

8、探针的3’端标记有c3 spacer基团。

9、本专利技术还公开了上述的era引物探针组合物在制备检测霍乱弧菌o1及o139群的试剂中的应用。

10、本专利技术还公开了一种检测霍乱弧菌o1及o139群的试剂盒,包含上述的era引物探针组合物。

11、本专利技术还公开了一种检测霍乱弧菌o1及o139群的方法,其步骤包括:

12、(1)提取样本中的核酸;

13、(2)提取的样本核酸为模板,加入上述的引物探针组合,以及酶促重组等温扩增试剂,进行酶促重组等温扩增反应,在反应过程中检测反应液的荧光信号,绘制成扩增曲线,根据扩增曲线的ct值,判断样本中是否存在霍乱弧菌o1及o139群,如果存在特异性的扩增曲线,且扩增曲线的ct值小于30,则认为样本中存在霍乱弧菌o1及o139群。

14、优选的,步骤(2)中的酶促重组等温扩增反应在恒温荧光检测仪中进行。

15、优选的,步骤(2)中酶促重组等温扩增反应的温度为40℃,反应时间15分钟,每隔30s检测一次荧光信号。

16、本专利技术的有益效果是操作简便、检验耗时少,不需要复杂昂贵的设备和实验室,可应用于快速检测霍乱弧菌o1及o139群核酸的试剂或试剂盒。

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【技术保护点】

1.一种检测霍乱弧菌O1及O139群的ERA引物探针组合物,其特征在于包括引物对,所述引物对的序列如SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2所示,还包括探针,所述探针的序列为:5-ttcagtaaga tatgcaatcc tcagggta/iFAMdT/c/idSp//iBHQ1dT/tcatcctttcaatcg-C3Spacer-3。

2.根据权利要求1所述的ERA引物探针组合物在制备检测霍乱弧菌O1及O139群的试剂中的应用。

3.一种检测霍乱弧菌O1及O139群的试剂盒,其特征在于包含权利要求1所述的ERA引物探针组合物。

4.一种检测霍乱弧菌O1及O139群的方法,其特征在于其步骤包括:

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:步骤(2)中的酶促重组等温扩增反应在恒温荧光检测仪中进行。

6.根据权利要求4或5所述的方法,其特征在于:步骤(2)中酶促重组等温扩增反应的温度为40℃,反应时间15分钟,每隔30s检测一次荧光信号。

【技术特征摘要】

1.一种检测霍乱弧菌o1及o139群的era引物探针组合物,其特征在于包括引物对,所述引物对的序列如seq id no:1及seq id no:2所示,还包括探针,所述探针的序列为:5-ttcagtaaga tatgcaatcc tcagggta/ifamdt/c/idsp//ibhq1dt/tcatcctttcaatcg-c3spacer-3。

2.根据权利要求1所述的era引物探针组合物在制备检测霍乱弧菌o1及o139群的试剂中的应用。<...

【专利技术属性】
技术研发人员:张陆明张勇黄健
申请(专利权)人:江苏普若维生物技术有限责任公司
类型:发明
国别省市:

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