【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于标准品制备，具体涉及一种叶酸类物质冻干型标准品的制备方法和制得的叶酸类物质冻干型标准品、稳定化组合物及其用途。
技术介绍
1、叶酸(fa)是一种水溶性b族维生素，在核苷酸合成以及dna甲基化发生过程中提供一碳单位，具有促进细胞分裂、分化和修复作用，是胚胎发育必不可少的物质。缺乏叶酸不仅容易导致高同型半胱氨酸血症、神经管缺陷、巨幼细胞性贫血，还会增加心血管疾病和肿瘤患病风险。同时合成叶酸可能会干扰食物中天然存在的还原型叶酸的代谢，长期过量摄入可能会导致循环中出现未代谢叶酸、掩盖维生素b12缺乏的症状，以及促进结直肠肿瘤形成等。
2、市面上现有叶酸检测试剂盒检测方法主要有荧光免疫层析法、化学发光法、以及液相色谱-串联质谱法。不同检测方法因检测原理不同，导致检测灵敏度、专属性、线性范围等均存在一定差距。其中，液相色谱-串联质谱法可同时测定叶酸及其代谢物，且重现性好，可在线分析，逐渐成为临床检测叶酸的发展趋势。目前液质联用法的总叶酸(tfol)主要包括叶酸(fa)、5-甲酰基四氢叶酸(5fothf)、5-甲基四氢叶酸(5methf)。
3、叶酸准确定量的一个主要影响因素是叶酸结构的不稳定性。叶酸的母体化合物是由蝶啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸3种成分结合而成，化学结构式如图1所示。叶酸稳定性较差，光(长波紫外线、中波紫外线uva、uvb)、ph值、温度(热)、浓度、氧和氧化降解、单态氧、电子束等均可使其降解。且研究表明，酸性条件下，叶酸及其代谢物之间存在相互转化。
4、因此，叶酸的准确测定需要
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术的不足，提供了一种叶酸类物质冻干型标准品的制备方法和制得的叶酸类物质冻干型标准品、稳定化组合物及其用途。该制备方法制得的叶酸类物质冻干型标准品均匀性良好，具有高的储存稳定性，能够在低温条件下长期稳定储存，且复溶步骤简单，复溶后液体澄清。
2、具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本专利技术：
3、在第一个方面中，本专利技术提供了一种叶酸类物质冻干型标准品的制备方法，包括以下步骤：
4、(1)使用稳定化组合物将叶酸类物质的基础工作液稀释至系列梯度浓度标准溶液；
5、(2)采用真空冷冻干燥技术将步骤(1)得到的所需浓度的叶酸类物质标准溶液制成冻干粉，即得叶酸类物质冻干型标准品；
6、其中，所述稳定化组合物由以下重量份组分组成：抗氧化剂0.5-5份、增效剂二硫苏糖醇或三(2-羧乙基)膦盐酸盐0.5-5份、海藻糖1-10份、以及缓冲液，所述缓冲液补足至100份。
7、本专利技术中，所述叶酸类物质包括叶酸、5-甲基四氢叶酸、5-甲酰四氢叶酸中的一种或多种。
8、优选的，上述稳定化组合物中的抗氧化剂为硫代硫酸钠、半胱氨酸、焦亚硫酸钠、谷胱甘肽中的至少一种。
9、更优选的，上述稳定化组合物中的抗氧化剂为半胱氨酸。
10、优选的，上述稳定化组合物中的缓冲液为碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸二氢钠-氢氧化钠缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、pbs缓冲液或氢氧化钠缓冲液。
11、优选的，上述步骤(1)中，所述叶酸类物质与稳定化组合物的质量比为(0.0005-0.1):1。
12、优选的，上述步骤(2)的真空冷冻干燥技术包括以下步骤：
13、1)预冻干阶段：
14、冷冻干燥室温度-60℃～-40℃，产品预冻2～4h；
15、2)一次干燥阶段：
16、温度升高至-30℃～-35℃，真空条件下，保持1～3h→升温至-20～-30℃，保持1～3h→升温至-15～-25℃，保持4～7h→升温至-10～0℃，真空条件下，保持4～7h；
17、3)解析干燥阶段：
18、温度调节至10～20℃，真空条件下，保持6～8h。
19、优选的，上述步骤2)一次干燥阶段和步骤3)解析干燥阶段的真空度均为1～20帕。
20、在第二个方面中，本专利技术提供了一种叶酸类物质冻干型标准品，所述冻干型标准品是采用上述叶酸类物质冻干型标准品的制备方法制备获得。
21、在第三个方面中，本专利技术提供了一种稳定化组合物，所述稳定化组合物由以下重量份组分组成：抗氧化剂0.5-5份、增效剂二硫苏糖醇或三(2-羧乙基)膦盐酸盐0.5-5份、海藻糖1-10份、以及缓冲液，所述缓冲液补足至100份；
22、所述抗氧化剂为硫代硫酸钠、半胱氨酸、焦亚硫酸钠、谷胱甘肽中的至少一种；
23、所述缓冲液为碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸二氢钠-氢氧化钠缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、pbs缓冲液或氢氧化钠缓冲液。
24、在第四个方面中，本专利技术提供了一种上述稳定化组合物在制备叶酸类物质冻干型标准品中的用途。
25、本专利技术相对于现有技术，具有以下有益效果：
26、(1)本专利技术的稳定化组合物以海藻糖作为骨架及保护剂，在冻干过程中起到骨架支撑及防止活性成分发生变性的作用；半胱氨酸等抗氧化剂，在抗氧化过程中可以用作自由基清除剂，避免叶酸类物质的氧化；增效剂二硫苏糖醇或三(2-羧乙基)膦盐酸盐与抗氧化剂联合使用，可提高抗氧化效果，更好地阻止或延缓叶酸类物质氧化，提高叶酸类物质冻干型标准品的储存稳定性。经实验证明，本专利技术稳定化组合物中的抗氧化剂、增效剂二硫苏糖醇或三(2-羧乙基)膦盐酸盐和海藻糖之间协同增效，应用于制备叶酸类物质冻干型标准品的方法中，显著提高了叶酸类物质冻干型标准品的储存稳定性，延长了有效期。
27、(2)本专利技术制得的叶酸类物质冻干型标准品外观呈饼状，不粘瓶塞，且冻干型标准品均匀性良好，水分含量低，具有高的储存稳定性，能够在低温条件下长期稳定储存，且复溶步骤简单，复溶后液体澄清。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种叶酸类物质冻干型标准品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的叶酸类物质冻干型标准品的制备方法，其特征在于，所述叶酸类物质包括叶酸、5-甲基四氢叶酸、5-甲酰四氢叶酸中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的叶酸类物质冻干型标准品的制备方法，其特征在于，所述稳定化组合物中的抗氧化剂为硫代硫酸钠、半胱氨酸、焦亚硫酸钠、谷胱甘肽中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的叶酸类物质冻干型标准品的制备方法，其特征在于，所述稳定化组合物中的抗氧化剂为半胱氨酸。
5.根据权利要求1所述的叶酸类物质冻干型标准品的制备方法，其特征在于，所述稳定化组合物中的缓冲液为碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸二氢钠-氢氧化钠缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、PBS缓冲液或氢氧化钠缓冲液。
6.根据权利要求1所述的叶酸类物质冻干型标准品的制备方法，其特征在于，所述叶酸类物质与稳定化组合物的质量比为(0.0005-0.1):1。
7.根据权利要求1所述的叶
8.一种叶酸类物质冻干型标准品，其特征在于，其通过如权利要求1-7任一项所述的叶酸类物质冻干型标准品的制备方法制备获得。
9.一种稳定化组合物，其特征在于，所述稳定化组合物由以下重量份组分组成：抗氧化剂0.5-5份、增效剂二硫苏糖醇或三(2-羧乙基)膦盐酸盐0.5-5份、海藻糖1-10份、以及缓冲液，所述缓冲液补足至100份；
10.权利要求9所述的稳定化组合物在制备叶酸类物质冻干型标准品中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种叶酸类物质冻干型标准品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的叶酸类物质冻干型标准品的制备方法，其特征在于，所述叶酸类物质包括叶酸、5-甲基四氢叶酸、5-甲酰四氢叶酸中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的叶酸类物质冻干型标准品的制备方法，其特征在于，所述稳定化组合物中的抗氧化剂为硫代硫酸钠、半胱氨酸、焦亚硫酸钠、谷胱甘肽中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的叶酸类物质冻干型标准品的制备方法，其特征在于，所述稳定化组合物中的抗氧化剂为半胱氨酸。
5.根据权利要求1所述的叶酸类物质冻干型标准品的制备方法，其特征在于，所述稳定化组合物中的缓冲液为碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸二氢钠-氢氧化钠缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化...
【专利技术属性】
技术研发人员：关丽萍，祝彦如，张亚莲，王璐，孙晓宇，
申请(专利权)人：大连博源医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。