一种基于荧光ｄＵＴＰ的自动检测ＳＳＲ分子标记的方法技术

本发明专利技术提供了一种基于荧光ｄＵＴＰ的自动检测ＳＳＲ分子标记的方法，包括以下步骤：（１）配制ＰＣＲ反应体系：取１．０μＬ?１０×ｂｕｆｆｅｒ、ｄＮＴＰ?２５～５０μＭ、ＭｇＣｌ２２．０ｍＭ、前向引物０．５μＭ、后向引物０．５μＭ、Ｔａｑ酶１个单位、荧光ｄＵＴＰ１０ｐｍｏｌ和基因组ＤＮＡ?５ｎｇ混合，加超纯水补至１０μＬ；（２）进行降落ＰＣＲ：９４℃４ｍｉｎ；２０个循环：９４℃３０ｓ、７０～６０℃或者６６～５６℃３０ｓ且每个循环降低０．５℃、７２℃１ｍｉｎ；再２６个循环：９４℃３０ｓ、６０或者５６℃３０ｓ、７２℃１ｍｉｎ；最后７２℃１０ｍｉｎ，得ＰＣＲ产物；（３）取ＰＣＲ产物１．０μＬ加入９．３４μＬ超纯甲酰胺、０．１６μＬ分子量内标，９５℃５ｍｉｎ后放置冰上快速冷却，在测序仪上进行标记检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学领域，尤其涉及一种基于荧光dUTP在测序仪上自动检测 SSR分子标记的方法。
技术介绍
SSR(Simple sequence r印eats，简单序列重复，也称微卫星)是一类由几个碱基 串联重复而成的DNA序列，其长度一般较短(每单元长度在1 6bp之间)，广泛分布于基 因组的不同位置。不同遗传材料重复次数的可变性，导致了 SSR标记产生的基础。SSR标记 是当今流行的分子标记技术之一，其原理为根据SSR两端的保守的单拷贝序列设计一对 特异引物，通过PCR技术将其间的核心SSR序列扩增出来，利用电泳分析技术就可以获得其 长度多态性。为了满足高通量和准确性的需要，目前有条件的实验室都是通过测序仪进行 自动化的电泳检测。通过测序仪进行SSR分子标记自动检测的一大障碍是PCR产物必须具 有荧光，以便激光探头自动识别荧光信号。利用荧光dUTP进行SSR分子标记实验在教科书中尚未提及，至今只见报道 有 4 篇文献(文献 1 :Patrick K. Ε. M 等，“ Analysis of loss of heterozygosity inmicrodissected 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于荧光ｄＵＴＰ的自动检测ＳＳＲ分子标记的方法，其特征在于，包括以下步骤：　　（１）配制ＰＣＲ反应体系：取１．０μＬ　１０×ｂｕｆｆｅｒ、ｄＮＴＰ　２５～５０μＭ、ＭｇＣｌ↓［２］２．０ｍＭ、前向引物０．５μＭ、后向引物０．５μＭ、Ｔａｑ酶１个单位、荧光ｄＵＴＰ　１０ｐｍｏｌ和基因组ＤＮＡ　５ｎｇ混合，加超纯水补至１０μＬ；　　（２）进行降落ＰＣＲ：９４℃４ｍｉｎ；２０个循环：９４℃３０ｓ、７０～６０℃或者６６℃～５６℃３０ｓ且每个循环降低０．５℃、７２℃１ｍｉｎ；再２６个循环：９４℃３０ｓ、６０℃或者５６℃３０ｓ、７２℃１ｍｉｎ；最后７２℃１０ｍｉｎ，得ＰＣＲ产物；　　（３）取所述ＰＣＲ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：甘四明，李发根，翁启杰，李梅，周长品，于晓丽，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院热带林业研究所，
类型：发明
国别省市：81