【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于水产养殖鱼苗培育，具体涉及一种翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法。
技术介绍
1、翘嘴鳜(siniperca chuatsi basilewsky)是一个典型的肉食性鱼类，具有凶猛的摄食习惯，它从第一次进食开始只捕食饵料鱼，拒食浮游动物。由于其肉质高，生长速度快，养殖利润高，深受市场欢迎，是我国主要养殖名贵水产种类，也被认为是亚洲内陆水产养殖有前景的养殖品种之一。
2、在培养翘嘴鳜过程中，翘嘴鳜仔鱼期是整个鱼类生活史中最关键的时期，然而由于鳜鱼的特殊食性，开口只摄食活饵料鱼，不同饵料鱼营养成分差异很大，严重影响了翘嘴鳜的品质。
技术实现思路
1、本专利技术提供的一种翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，解决了水产养殖研究领域中翘嘴鳜仔鱼期营养生理过程的难题，填补了翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的技术空白，可以将外源物质(营养物质、外源基因、dna片段、rna片段、蛋白或染料样品等)快速、批量简便的注射入鳜仔鱼卵黄囊内，确保翘嘴鳜的品质的同时，保证翘嘴鳜仔鱼的高存活率。
2、为了实现上述技术目的，本专利技术主要采用如下技术方案：
3、一种翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，包括如下步骤：
4、(1)制备翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射凹槽：用无菌水配制质量分数为1-2％的琼脂糖，加热融化后，将其冷却至45-55℃，然后倒入培养皿中并放置显微注射凹槽模具，待琼脂糖凝固后将凹槽模具轻轻取出，在培养皿中得到显微注射凹槽；
5、(2)制备翘嘴鳜仔
6、(3)配制翘嘴鳜仔鱼显微注射样品：以生理盐水或pbs缓冲液作为溶剂，溶解待注射的外源物质；
7、(4)显微注射翘嘴鳜仔鱼卵黄囊：在步骤(1)制备得到的显微注射凹槽中，将翘嘴鳜仔鱼从上到下排开，腹部朝向显微注射针，然后加入适量的水，没过翘嘴鳜仔鱼，将培养皿放入显微镜视野中，并确定步骤(2)制备得到的显微注射针针头和翘嘴鳜仔鱼在显微镜同一视野内，利用显微注射针将步骤(3)配置的注射样品注入卵黄囊内，然后再换下一尾翘嘴鳜仔鱼进行样品注射。
8、在本专利技术的较佳实施方式中，步骤(1)中，所述显微注射凹槽底部凸起部分的宽度和高度均为0.80mm，凸起条数为6条。
9、在本专利技术的较佳实施方式中，步骤(2)中，使用的毛细玻璃管为外径1mm、内径0.58mm的毛细玻璃管。
10、在本专利技术的较佳实施方式中，步骤(3)中，所述外源物质包括营养物质、外源基因、dna片段、rna片段、蛋白或染料样品中的一种或多种。
11、在本专利技术的较佳实施方式中，步骤(3)中，在配置显微注射样品时，还加入有终浓度为0.2％的酚红作为指示剂。
12、在本专利技术的较佳实施方式中，步骤(4)中，所述翘嘴鳜仔鱼为出膜8-12h的翘嘴鳜仔鱼，翘嘴鳜仔鱼受精卵在26℃水温中培育。
13、进一步的，步骤(4)中，所述显微注射凹槽中，每一排凹槽放置8-10尾翘嘴鳜仔鱼。
14、在本专利技术的较佳实施方式中，步骤(4)中，利用显微注射针将步骤(3)配置的注射样品注入卵黄囊内的方法具体包括如下步骤：用手动微操作仪调节显微注射针位置，确定腹部注射穿刺点，然后推入显微注射针，踩下氮气释放开关，等待1-2s，待样品溶液注入卵黄囊内液体扩散后，调节手动微操作仪，使显微注射针退出穿刺点的腹膜，完成注射。
15、在本专利技术的较佳实施方式中，所述翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法还包括步骤(5)培养显微注射后的翘嘴鳜仔鱼：待培养皿中所有翘嘴鳜仔鱼注射完毕后，将培养皿水平移出显微镜视野，将仔鱼放入爆气水体中进行培养。
16、进一步的，所述爆气水体水温为26℃。
17、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
18、本专利技术利用手动微操作仪和压力显微注射仪将注射外源物质(营养物质、外源基因、dna片段、rna片段、蛋白或染料样品等)从显微注射针中输送到翘嘴鳜仔鱼卵黄囊中，注射过程中，样品溶液的输送、吸持定位、注射针进针、腹膜穿刺、体内药液定量注射、注射针退出动物体内等显微操作过程，可以完全实现在立体显微镜的同一视野内的精确控制，实现微量液体的高精度注射，本专利技术操作方法简单、可批量注射、注射成功率高。
19、本专利技术通过将外源物质(营养物质、外源基因、dna片段、rna片段、蛋白或染料样品等)注射入翘嘴鳜仔鱼卵黄囊内，在确保翘嘴鳜的品质的同时，也保证了翘嘴鳜仔鱼的高存活率。
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1.一种翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述显微注射凹槽底部凸起部分的宽度和高度均为0.80mm，凸起条数为6条。
3.根据权利要求1所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，步骤(2)中，使用的毛细玻璃管为外径1mm、内径0.58mm的毛细玻璃管。
4.根据权利要求1所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述外源物质包括营养物质、外源基因、DNA片段、RNA片段、蛋白或染料样品中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，步骤(3)中，在配置显微注射样品时，还加入有终浓度为0.2％的酚红作为指示剂。
6.根据权利要求1所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述翘嘴鳜仔鱼为出膜8-12h的翘嘴鳜仔鱼，翘嘴鳜仔鱼受精卵在26℃水温中培育。
7.根据权利要求6所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于
8.根据权利要求1所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，步骤(4)中，利用显微注射针将步骤(3)配置的注射样品注入卵黄囊内的方法具体包括如下步骤：用手动微操作仪调节显微注射针位置，确定腹部注射穿刺点，然后推入显微注射针，踩下氮气释放开关，等待1-2s，待样品溶液注入卵黄囊内液体扩散后，调节手动微操作仪，使显微注射针退出穿刺点的腹膜，完成注射。
9.根据权利要求1所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，还包括步骤(5)培养显微注射后的翘嘴鳜仔鱼：待培养皿中所有翘嘴鳜仔鱼注射完毕后，将培养皿水平移出显微镜视野，将仔鱼放入爆气水体中进行培养。
10.根据权利要求9所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，所述爆气水体水温为26℃。
...【技术特征摘要】
1.一种翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述显微注射凹槽底部凸起部分的宽度和高度均为0.80mm，凸起条数为6条。
3.根据权利要求1所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，步骤(2)中，使用的毛细玻璃管为外径1mm、内径0.58mm的毛细玻璃管。
4.根据权利要求1所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述外源物质包括营养物质、外源基因、dna片段、rna片段、蛋白或染料样品中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，步骤(3)中，在配置显微注射样品时，还加入有终浓度为0.2％的酚红作为指示剂。
6.根据权利要求1所述的翘嘴鳜仔鱼卵黄囊显微注射的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述翘嘴鳜仔鱼为出膜8-12h的翘嘴鳜仔鱼，翘嘴鳜...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁旭方，彭迪，汪玉叶，钱舟明，丁立云，陆可，张其伟，武佳琪，汪亚平，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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