【技术实现步骤摘要】
本申请涉及微生态检测，更具体地说，它涉及一种基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法。
技术介绍
1、女性阴道微生态系统是人体微生态系统的组成之一，由阴道内的微生物菌群、内分泌调节系统、阴道解剖结构和局部免疫系统共同组成。形态学检测主要包含菌群密集度、多样性、优势菌、病原微生物、各项疾病疾病评分、炎症细胞等形态学指标，而综合评价阴道微生态状况。阴道中的有形成分主要包括滴虫等原虫、革兰氏阴性小杆菌、革兰氏阳性球菌、革兰氏阴性大杆菌、革兰氏阳性大杆菌、革兰氏阴性球菌、白细胞、上皮细胞等。由于临床医生对生殖道感染发病机制的远期危害认知不充分，不诊不治；因临床表面不特异、检测方法不恰当而依据经验导致的乱诊乱治，或者由于诊断不确切，盲目应用抗“炎”治疗，从而导致目前生殖道感染性疾病的正确诊断率低、抗菌药物和你使用率低、治愈率低和复发率高，即三低一高的诊疗现状，因此精准诊断和治疗生殖道感染具有重要的临床意义。
2、传统的阴道微生态镜检流程(即人工检测方式)：棉签从阴道刮取分泌物，并在清洁载玻片上均匀涂抹，自然干燥固定后，进行革兰氏染色，显微镜下检查阴道菌群，但这样存在样本涂抹不均匀，部分视野是无效视野，影响结果判读，从而影响检测结果。
3、针对上述中的相关技术，专利技术人认为提高样本在玻片上的均匀性，对阴道微生态检测结果的准确性至关重要。
技术实现思路
1、为了提高样本在玻片上的均匀性，从而提高阴道微生态检测结果的准确性，本申请提供一种基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法。
2、本申请提供的一种基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，采用如下的技术方案：一种基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，包括以下步骤：
3、样品前处理：取样后将样品涮洗在保存液中，保存液可保证细胞形态病原菌的革兰氏染色阴阳性不变；
4、自动制片：将样本混匀并定量吸取后滴加在玻片上，样本自然沉降的同时通过水平移动滴加结合旋转离心，使样本均匀铺满样本区域；其中水平移动滴加既可为规则画法也可为不规则画法，例如三角形、椭圆、六芒星、八芒星等。
5、自动干燥：将玻片移动到安装槽位，采用ptc加热或鼓风干燥完成；
6、自动染色：对干燥后的玻片进行染色；
7、镜油滴加：样本玻片染色并烘干完成后，对样本玻片滴加镜油，以便于后续显微图像的扫描；出片：将样本玻片通过真空吸附的方式搬运至显微镜或其他设备上进行后续阅片、检测等操作。
8、通过采用上述技术方案，本申请以液体薄层技术为基础，把样本放在保存液中进行处理后，并结合自然沉降式的方法对样本混匀后进行自动定量抽取和自动定量滴加，通过自动化的控制使样本在载玻片上完成离心动作以使样本可以铺展均匀，提高样本在玻片上的均匀性，从而提高阴道微生态检测结果的准确性；之后进行干燥和全自动革兰氏染色。采用该纸片后，样本在载玻片上能实现在特定区域内的均匀铺展，并在特定区域内的样本染色效果一致，且制片过程中实现了自动化；制片后的玻片样本在显微成像下特征明显，易于识别。
9、在一个具体的可实施方案中，所述自动制片时，水平移动滴加与离心运动交替进行。
10、通过采用上述技术方案，将水平移动滴加与旋转离心进行有效结合，可进一步提高样品在玻片上的均匀性。
11、在一个具体的可实施方案中，所述自动制片时，所述玻片上设置有圆形区域作为样本区域。
12、通过采用上述技术方案，圆形区域更有利于样本在玻片上的固定和定量，在离心时不容易飞溅出去而确保样本的定量和试验结果的准确性。
13、在一个具体的可实施方案中，所述自动制片时，玻片经过前处理，具体处理工艺包括以下步骤：
14、(1)将玻片加热至50-120℃，并降压至﹣80-﹣100kpa；
15、(2)将配制好的氨基硅烷溶液进行蒸发，维持反应5-40min，蒸汽与玻片接触后自动吸附并沉积后恢复正常常压即可。
16、通过采用上述技术方案，利用化学气相沉积技术，操作过程简便，利用该工艺生产的玻片表面可湿性及粘附性稳定、均一，携带的正电荷与组织或细胞表面形成牢固的共价键；通过该方法获得的玻片可长期，稳定，有效的应用于液基细胞处理过程中，不会发生组织切片或细胞的脱落，确保了病理诊断结果的准确性及可靠性。
17、在一个具体的可实施方案中，所述样品前处理中，所述保存液为碱性，且包括以下重量份的原料：乙醇20-40份、粘液解离剂0.05-0.2份、碱性物质0.001-0.01份、抗凝剂0.05-0.2份和防腐剂0.05-0.5份，余量为水。
18、通过采用上述技术方案，保存液主要成分为乙醇，不含甲醇、异丙醇有毒有害成分，无毒无害环保；细胞保存率高，常温下可保存时间长，细胞形态完好，胞浆与细胞核分解清楚、层次分明，胞浆与细胞核透亮性非常好，核质清洗，而且能更好地保存细胞内核酸的完整；
19、更重要的是，本申请保存液通过添加碱性物质可以使阴道微生态表面富含足量阴离子，与硅烷化处理后表面带有大量阳离子的玻片具有很好的粘附能力，有利于细胞富集，可以有效减少漏检现象，提高检测的准确性。在一个具体的可实施方案中，所述碱金属碳酸盐为碳酸钠、碳酸钾和碳酸钙中的一种。
20、在一个具体的可实施方案中，所述碱性物质为氢氧化钠或氢氧化钾中的一种或两种。
21、在一个具体的可实施方案中，所述粘液解离剂为n－乙酰基－l－半胱氨酸、二硫苏糖醇及三(2－羰基乙基)磷盐酸盐中的一种或任意两种。
22、通过采用上述技术方案，粘液解离剂能有效软化细胞粘液，可使样本中被粘液粘附的细胞分离出来，避免细胞堆积。
23、在一个具体的可实施方案中，所述抗凝剂为乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钾中的一种或多种。
24、通过采用上述技术方案，抗凝剂用于螯合溶液中引入的重金属离子，防止细胞凝聚，保持保存液细胞形态和核酸的完整。
25、在一个具体的可实施方案中，所述防腐剂为苯氧乙醇、苯甲酸钠、苯酚中的一种。
26、通过采用上述技术方案，保存液中添加防腐剂能有效一直霉菌、细菌或其他病原体增生，有利于细胞保存。
27、综上所述，本申请具有以下有益效果：
28、1、本申请通过采用水平移动滴加结合旋转离心使得样本均匀铺展在玻片上，提高样本在玻片上的均匀性，从而提高阴道微生态检测结果的准确性；
29、2、本申请通过对玻片进行前处理，使得玻片携带正电荷，可以组织或细胞表面形成牢固的共价键，不会发生组织切片或细胞的脱落，确保了阴道微生态检测结果的准确性；
30、3、本申请通过在保存液中添加碱性物质，可以使阴道微生态表面富含足量阴离子，与硅烷化处理后表面带有大量阳离子的玻片具有很好的粘附能力，有利于细胞富集，可以有效减少漏检现象，提高检测的准确性。
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1.一种基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，其特征在于：所述自动制片时，水平移动滴加与离心运动交替进行。
3.根据权利要求1所述的基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，其特征在于：所述自动制片时，所述玻片上设置有圆形区域作为样本区域。
4.根据权利要求1所述的基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，其特征在于：所述自动制片时，玻片经过前处理，具体处理工艺包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，其特征在于：所述样品前处理中，所述保存液为碱性，且包括以下重量份的原料：乙醇20-40份、粘液解离剂0.05-0.2份、碱性物质0.001-0.01份、抗凝剂0.05-0.2份和防腐剂0.05-0.5份，余量为水。
6.根据权利要求5所述的基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，其特征在于：所述碱性物质为氢氧化钠或氢氧化钾中的一种或两种。
7.根据权利要求5所述的基于液基薄层技术的阴道微生态检测方
8.根据权利要求5所述的基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，其特征在于：所述抗凝剂为乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钾中的一种或多种。
9.根据权利要求5所述的基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，其特征在于：所述防腐剂为苯氧乙醇、苯甲酸钠、苯酚中的一种。
...【技术特征摘要】
1.一种基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，其特征在于：所述自动制片时，水平移动滴加与离心运动交替进行。
3.根据权利要求1所述的基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，其特征在于：所述自动制片时，所述玻片上设置有圆形区域作为样本区域。
4.根据权利要求1所述的基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，其特征在于：所述自动制片时，玻片经过前处理，具体处理工艺包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的基于液基薄层技术的阴道微生态检测方法，其特征在于：所述样品前处理中，所述保存液为碱性，且包括以下重量份的原料：乙醇20-40份、粘液解离剂0.05-0.2份、碱性物质0....
【专利技术属性】
技术研发人员：徐书宽，冯立昂，郭梦琳，汪汝亮，王明辉，王天成，
申请(专利权)人：苏州图灵微生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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