【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物，尤其是一种具有抗真菌性病原菌作用的耐冷芽孢杆菌及应用。
技术介绍
1、谷物作物的真菌感染对全球粮食和经济作物安全构成重大风险，因为粮食产量和质量下降，以及动物饲料和人类消费产品受到污染。为了对抗真菌疾病，我们需要了解病原体如何在宿主的恶劣环境中适应和生存，以及如何调节宿主的防御反应以防止疾病。其中棉花黄萎病和小麦赤霉病为常见且难以防治的真菌性病害。
2、黄萎病是一个严重的植物病害，造成巨大的损失在多种作物。提高植物抗黄萎病是世界范围的一个关键的挑战。在棉花黄萎病是由于dahliae-secreted asp f2-like蛋白质vdal引起叶片萎蔫造成的，进而影响棉花生长发育；小麦镰刀菌素头枯萎病(fhb)是由小麦赤霉病菌引起的，是一种破坏性疾病，是影响小麦产量的主要病害。在过去几十年中小麦赤霉病菌由于其毒力形式的增加，防治条件变得更加严苛。
3、类芽孢杆菌属(p.macquariensis)，其可以通过生物固氮，磷酸盐增溶作用，植物激素吲哚-3-乙酸(iaa)的生产以及铁载体的释放来促进铁的生长，从而直接促进作物的生长。它们还可以提供针对昆虫食草动物和植物病原体(包括细菌，真菌，线虫和病毒)的保护。这是通过生产各种抗微生物剂和杀虫剂，以及触发植物的超敏防御反应(称为诱导的系统抗性(isr))来实现的。有研究表明，类芽孢杆菌属(p.macquariensis)具有防治引起番茄枯萎病的番茄尖孢镰刀菌的潜力。其产生细胞外有机化合物和粗酶可以抑制番茄尖孢霉分生孢子萌发。
4、耐
技术实现思路
1、针对现有技术问题，本专利技术提供了一株具有抗真菌性病原菌作用的耐冷芽孢杆菌及其应用。
2、本专利技术技术方案包括：
3、首先，本申请专利技术人经过采集、筛选获得一株耐冷芽孢杆菌(bacilluspsychrodurans)，编号cod，01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：cgmcc no.28117。
4、该菌株cod，01分离自山东省滨州市博兴县庞家镇乡村振兴产业示范中心大棚土壤中，通过形态分析及测序分析发现，该菌株与耐冷芽孢杆菌有最高同源相似性，最高相似性为99.99％，可以确定该菌株为耐冷芽孢杆菌(bacillus psychrodurans)。
5、所述的耐冷芽孢杆菌cod，01在固体平板上菌落观察菌落形态呈圆形，中央微凸起，直径约1mm，中心突起黄色，周围奶油色不透明，表面光滑湿润，边缘规则，无晕环。耐冷菌是生活在低温环境下的一类微生物，在0～5℃可生长繁殖，最高生长温度一般在30℃左右。该耐冷芽孢杆菌cod，01在30℃恒温的条件下，在lb固体培养基中培养12h达到对数末期。
6、经研究发现，所述的耐冷芽孢杆菌cod，01具有抗真菌性病原菌作用，可分泌性表达脂肪酶。
7、第二方面，本专利技术提供了所述耐冷芽孢杆菌cod，01的发酵方法：
8、将耐冷芽孢杆菌cod，01按照5％-15％的接种量接种至lb培养基中，在28-35℃、180-200rpm条件下培养12-24h得到种子液；按照3％-8％的接种量将种子液转接至发酵培养基中发酵。
9、所述耐冷芽孢杆菌cod，01的发酵培养基配方为：麦芽糊精5-7％、豆粕5-7％(过100目筛)、玉米浆干粉0.04-0.06％、碳酸钙0.2-0.4％、磷酸氢二钾0.1-0.2％、磷酸二氢钾0.1-0.2％、硫酸锰0.01-0.03％、硫酸镁0.1-0.2％、中性蛋白酶0.1-0.3％、消泡剂0.03-0.06％，ph 7.4-7.6。
10、优选的，所述耐冷芽孢杆菌cod，01的发酵培养基配方为：麦芽糊精6％、豆粕6.5％(过100目筛)、玉米浆干粉0.05％、碳酸钙0.3％、磷酸氢二钾0.1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸锰0.02％、硫酸镁0.1％、中性蛋白酶0.2％、消泡剂(298)0.05％，ph 7.4-7.6。
11、优选的，所述耐冷芽孢杆菌cod，01的发酵培养基处理方法为：将豆粕、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾在90℃条件下预热1h，蛋白酶加入到培养基中，45℃酶解2h(过100目筛)，100℃灭酶10min，随后加入其余成分121℃灭菌30min制成发酵培养基。
12、第三方面，本专利技术提供所述耐冷芽孢杆菌cod，01在防治农作物真菌性病害方面的应用。
13、优选的，所述的真菌性病害包括黄萎病、赤霉病等。
14、第四方面，本专利技术提供所述的耐冷芽孢杆菌cod，01在制备防治农作物真菌性病害的农药制剂或肥料方面的应用。
15、更进一步的，本专利技术提供所述耐冷芽孢杆菌cod，01在抗真菌性病害方面的应用方法：
16、将含有耐冷芽孢杆菌cod，01的菌剂喷施或灌溉农作物。
17、优选的，所述菌剂可以为液体菌剂也可以为固体菌剂。所述菌剂可以直接为发酵液，也可以为发酵液进一步的制剂。
18、优选的，所述菌剂中耐冷芽孢杆菌cod，01的菌量为1-9×109cfu/ml。
19、更优选的，使用时，将菌剂按体积稀释，其优选稀释倍数为1-200倍，更优稀释倍数为10-30倍，最优稀释倍数为20倍。
20、综上所述，本专利技术所述耐冷芽孢杆菌cod，01在不同温度发酵培养后，30℃发酵培养72h后，其脂肪酶酶活达到最高；且随着发酵时间延长，不同温度培养下的耐冷芽孢杆菌脂肪酶酶活逐渐增强，且在72h后均逐渐降低。所述耐冷芽孢杆菌在培养72h后脂肪酶酶活较现有技术bacillus flexus(弯曲芽孢杆菌，cgmcc no.1.8095)、bacillus simplexstrain(简单芽孢杆菌，cgmcc no.1.7412)、bacillus subtilis(枯草芽孢杆菌，cgmccno.1.15792)相比更高；且随着发酵时间延长，不同菌种随培养时间增长脂肪酶酶活逐渐增强，随后逐渐降低。本专利技术所述耐冷芽孢杆菌cod，01能够抑制真菌性病原菌的生长繁殖，对真菌性病害有非常显著的防治效果，尤其是黄萎病、赤霉病等。
21、生物保藏信息
22、保藏时间：2023年08月07日
23、保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；
24、保藏编号：cgmcc no.28117；
25、保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；
26、分类命名：耐冷芽孢杆菌(bacillus psychrodurans)。
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1.一株耐冷芽孢杆菌(Bacillus psychrodurans)，其特征在于，编号COD，01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：
2.耐冷芽孢杆菌COD，01在防治农作物真菌性病害方面的应用。
3.根据权利要求2所述的耐冷芽孢杆菌COD，01在防治农作物真菌性病害方面的应用，其特征在于，所述的真菌性病害包括黄萎病、赤霉病。
4.耐冷芽孢杆菌COD，01在制备防治农作物真菌性病害的农药制剂或肥料方面的应用。
5.耐冷芽孢杆菌COD，01在抗真菌性病害方面的应用方法，其特征在于，将含有耐冷芽孢杆菌COD，01的菌剂喷施或灌溉农作物。
6.根据权利要求5所述的耐冷芽孢杆菌COD，01在抗真菌性病害方面的应用方法，其特征在于，所述菌剂中耐冷芽孢杆菌COD，01的菌量为1-9×109cfu/mL。
7.根据权利要求5所述的耐冷芽孢杆菌COD，01在抗真菌性病害方面的应用方法，其特征在于，使用时，将菌剂按体积稀释，稀释倍数为1-200倍。
8.根据权利要求5所述的耐冷芽孢杆菌
9.根据权利要求5所述的耐冷芽孢杆菌COD，01在抗真菌性病害方面的应用方法，其特征在于，使用时，将菌剂按体积稀释，稀释倍数为20倍。
10.耐冷芽孢杆菌COD，01的发酵方法，其特征在于，将耐冷芽孢杆菌COD，01按照5％-15％的接种量接种至LB培养基中，在28-35℃、180-200rpm条件下培养12-24h得到种子液；按照3％-8％的接种量将种子液转接至发酵培养基中发酵；所述耐冷芽孢杆菌COD，01的发酵培养基配方为：麦芽糊精5-7％、豆粕5-7％、玉米浆干粉0.04-0.06％、碳酸钙0.2-0.4％、磷酸氢二钾0.1-0.2％、磷酸二氢钾0.1-0.2％、硫酸锰0.01-0.03％、硫酸镁0.1-0.2％、中性蛋白酶0.1-0.3％、消泡剂0.03-0.06％，pH 7.4-7.6。
...【技术特征摘要】
1.一株耐冷芽孢杆菌(bacillus psychrodurans)，其特征在于，编号cod，01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：
2.耐冷芽孢杆菌cod，01在防治农作物真菌性病害方面的应用。
3.根据权利要求2所述的耐冷芽孢杆菌cod，01在防治农作物真菌性病害方面的应用，其特征在于，所述的真菌性病害包括黄萎病、赤霉病。
4.耐冷芽孢杆菌cod，01在制备防治农作物真菌性病害的农药制剂或肥料方面的应用。
5.耐冷芽孢杆菌cod，01在抗真菌性病害方面的应用方法，其特征在于，将含有耐冷芽孢杆菌cod，01的菌剂喷施或灌溉农作物。
6.根据权利要求5所述的耐冷芽孢杆菌cod，01在抗真菌性病害方面的应用方法，其特征在于，所述菌剂中耐冷芽孢杆菌cod，01的菌量为1-9×109cfu/ml。
7.根据权利要求5所述的耐冷芽孢杆菌cod，01在抗真菌性病害方面的应用方法，其特征在于，使用时，将菌剂按体积稀...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓洁，王程璐，刘海玉，盖赛伦，成道泉，王殿海，王祥传，王世洲，夏国杰，刘文龙，
申请(专利权)人：山东京博农化科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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