【技术实现步骤摘要】
本申请属于动物基因工程领域，具体涉及一种kiaa1191基因不表达的异种移植供体猪及制备方法。
技术介绍
1、来自不同物种供体的器官、组织和细胞的异种移植可以有效解决人供体的短缺。异种移植相对于自体移植、同种移植更有利之处包括在可预测的非紧急基础上供应、在控制环境中产生和可在移植前用于表征和研究。在诸多文献中得到证实在异种移植供体动物模型中，猪已成为异种移植领域中大多数研究的焦点，因为猪与人共享许多解剖和生理特征。猪也具有相对短的妊娠期，可以在无病原体环境中育种，并且可能不呈现与通常不用作食物来源的动物有关的相同伦理问题。但目前的研究结果中，在将猪的器官移植到人体时会出现比自体移植、同种移植更加严重的多的免疫排斥反应，因为存在很多未知的引起免疫排斥的风险因子，影响猪的组织或器官植入后的长期存活，包括引起排斥反应的异源基因。
2、目前关于kiaa1191基因研究如下：kiaa1191是一种依赖于napdh的氧化还原酶，在参与氧化时可以产生ros。同时作为坏死性凋亡的核心因子，kiaa1191高表达会上调rip1，rip3和cyld的表达，rip1和rip3之间的相互作用增强了活性氧(ros)的产生以执行坏死性凋亡。同时rip1可以促进iκb激酶的募集和激活，从而激活mapk通路。在mapk通路中，mapk1和mapk3也被kiaa1191激活。因此，估计kiaa1191可能与坏死性凋亡有关。
技术实现思路
1、本专利技术研究发现kiaa1191基因能引起异种免疫排斥风险，
2、本专利技术所述的kiaa1191基因不表达可以通过基因敲除、基因敲入、点突变；缺失突变以及它们的组合实现。
3、本专利技术所述的kiaa1191基因不表达可以通过基因沉默实现。
4、本专利技术所述的基因敲除通过crispr-cas9基因敲除系统实现，所述的系统包括kiaa1191基因敲除载体，包括载体一和载体二，所述的载体一连接有sg rna1，所述的sgrna1特异性靶向序列为ggttcttccatagccttacc；所述的载体二连接有sgrna2，所述的sgrna2特异性靶向序列为tggacatcc cagtgatagaa。
5、本专利技术所述的kiaa1191基因敲除载体的构建方法：
6、合成所述的sgrna1的编码基因的核苷酸序列如seq id no.1所示，其互补链如seqid no.2所示，再将单链的sgrna的dna序列分别经过退火后形成sgrna1寡核苷酸链；然后将该寡聚核苷酸连入px330质粒载体中；
7、合成所述的sgrna2的编码基因的核苷酸序列如seq id no.3所示，其互补链如seqid no.4所示，再将单链的sgrna的dna序列分别经过退火后形成sgrna2寡核苷酸链；然后将该寡聚核苷酸连入px330质粒载体中。
8、本专利技术所述的kiaa1191基因敲除载体导入转化细胞，所述的转化细胞用于制备异种移植用供体猪，所述的供体猪的器官、组织或细胞中kiaa1191基因不表达。
9、本专利技术还提供一种异种移植供体制备方法，包括将所述的转化细胞移植到脱核的卵细胞来形成核移植卵，再将所述的核移植卵移植到代孕母的输卵管。
10、本专利技术还提供一种延迟、减少或防止人接受者中对异种移植器官或组织排斥、分离或不良反应的方法，所述的方法包括所述的方法包括对供体猪的组织或是器官的kiaa1191基因进行遗传修饰，使供体猪或供体猪的组织、器官的kiaa1191基因不表达。
11、本专利技术所述的异种移植供体的器官包括肝、肺、肾或皮肤。
12、本专利技术所述的异种移植供体的组织包括神经。
13、有益效果如下：
14、本专利技术首次发现kiaa1191基因能引起异种免疫排斥风险，根据此提供一种异种移植供体，通过基因敲除或是基因沉默实现异种移植供体的kiaa1191基因不表达，kiaa1191基因不表达的可有效降低供体组织和/或器官细胞与人接受者igg和igm的结合能力，提高供体组织和/或器官细胞抵抗人接受者补体介导的细胞毒性的能力，可以延长供体组织和/或器在异种移植后的生存时间。
15、本专利技术还利用crispr/cas9系统设计双sgrna敲除kiaa1191基因，获得的基因敲除细胞系可作为体细胞核移植的供体，并验证了kiaa1191敲除后可有效降低猪肾细胞与人igg和igm的结合能力，提高猪肾细胞抵抗人补体介导的细胞毒性的能力，并为深度挖掘kiaa1191基因生物学功能提供有利的研究工具。本专利技术所确定的风险因子kiaa1191基因的敲除增加了异种细胞存活的机率，进一步提高了异种移植的可行性。
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1.一种异种移植供体猪，其特征在于，所述的供体猪的KIAA1191基因不表达。
2.如权利要求1所述的异种移植供体猪，其特征在于，所述的异种移植供体猪的器官、组织或细胞的接受者为人。
3.如权利要求1所述的异种移植供体猪，其特征在于，所述的KIAA1191基因不表达通过基因敲除、基因敲入、点突变；缺失突变以及它们的组合实现，或通过基因沉默实现。
4.一种KIAA1191基因敲除载体，其特征在于，所述的KIAA1191基因敲除载体包括载体一和载体二：所述的载体一连接有sgRNA1，其特异性靶向序列为GGTTCTTCCATAGCCTTACC；所述的载体二连接有sgRNA2，其特异性靶向序列为TGGACATCCCAGTGATAGAA。
5.一种转化细胞，其特征在于，所述的转化细胞导入有如权利要求4所述的KIAA1191基因敲除载体，所述的转化细胞用于制备异种移植用供体猪，所述的供体猪的KIAA1191基因不表达。
6.一种异种移植用转基因供体猪的制备方法，包括：将如权利要求5所述的转化细胞移植到脱核的卵细胞来形成核移植卵，将所
7.一种延迟、减少或防止人接受者中对异种移植组织排斥、分离或不良反应的方法，其特征在于，所述的方法包括对供体猪的组织或是器官KIAA1191基因进行遗传修饰，使供体猪的组织或是器官KIAA1191基因不表达。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述的器官包括肝、肺、肾或皮肤。
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述的组织包括神经。
...【技术特征摘要】
1.一种异种移植供体猪，其特征在于，所述的供体猪的kiaa1191基因不表达。
2.如权利要求1所述的异种移植供体猪，其特征在于，所述的异种移植供体猪的器官、组织或细胞的接受者为人。
3.如权利要求1所述的异种移植供体猪，其特征在于，所述的kiaa1191基因不表达通过基因敲除、基因敲入、点突变；缺失突变以及它们的组合实现，或通过基因沉默实现。
4.一种kiaa1191基因敲除载体，其特征在于，所述的kiaa1191基因敲除载体包括载体一和载体二：所述的载体一连接有sgrna1，其特异性靶向序列为ggttcttccatagccttacc；所述的载体二连接有sgrna2，其特异性靶向序列为tggacatcccagtgatagaa。
5.一种转化细胞，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳红生，袁泓明，逄大欣，王子茹，
申请(专利权)人：吉林大学重庆研究院，
类型：发明
国别省市：
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