【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中医药，具体涉及一种穿心莲二萜内酯类化合物及其提取方法和应用。
技术介绍
1、炎症是机体对于损伤性刺激的防御反应，能够调节机体免疫而清除病原体以减少细胞损伤并能启动组织修复功能自主修复受损组织。当巨噬细胞受到外来病原微生物入侵时，会启动分泌可释放肿瘤坏死因子-α(tnf-α)、白细胞介素-6(il-6)和白细胞介素-1β(il-1β)家族细胞因子等促炎因子、no以及调节炎症的相关蛋白来引发炎症和免疫应答。
2、no是一种血管内皮发现的小分子，急慢性炎症的发生均与其相关。no能通过抑制t细胞和b细胞增殖，调节多种炎症反应的细胞因子等来产生炎症，穿心莲的多种抗炎作用均与对no的调节作用有关。当免疫细胞遭受微生物内毒素、炎症介质等刺激时，会生成大量的诱导型no合成酶(induced no synthase，inos)，产生no进行免疫应答，因此抑制no生成是计算化合物抗炎活性的直接指标。
3、地塞米松是本领域较为常见的抗炎药物，地塞米松能够减轻和防止组织对炎症的反应，从而减轻炎症的表现。但是，随着时代的发展，地塞米松的抗炎效果已经很难满足患病人群的需求。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种穿心莲二萜内酯类化合物及其提取方法和应用。本专利技术提供的穿心莲二萜内酯类化合物具有良好的抗炎效果，可在制备抗炎药物中应用。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种穿心莲二萜内酯类化合
4、
5、本专利技术提供了上述技术方案所述穿心莲二萜内酯类化合物的提取方法，式1～式6所示结构的穿心莲二萜内酯类化合物的提取方法包括以下步骤：
6、采用第一溶剂对穿心莲进行提取，得到提取液；去除所述提取液中的溶剂，得到第一浸膏；所述第一溶剂包括甲醇水溶液或丙酮；
7、将所述第一浸膏与水混悬，采用石油醚进行萃取，收集水萃取液；去除所述水萃取液中的溶剂，得到第二浸膏；
8、将所述第二浸膏与甲醇混合后依次进行第一硅胶柱层析分离和第二硅胶柱层析分离，分别得到第一混合物和第二混合物；所述第一硅胶柱层析分离和第二硅胶柱层析分离所用流动相独立为二氯甲烷和甲醇；
9、将所述第一混合物依次进行第一反相色谱分离、第二反相色谱分离和第三反相色谱分离，得到第三混合物；所述第一反相色谱分离、第二反相色谱分离和第三反相色谱分离所用流动相独立包括流动相a和流动相b，所述流动相a为甲醇，所述流动相b为水；
10、将所述第三混合物进行第一高效液相色谱分离，分别得到具有式1、式2、式3、式4、式5和式6所示结构的穿心莲二萜内酯类化合物；所述第一高效液相色谱分离所用流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为乙腈，所述流动相b为水；
11、式7所示结构的穿心莲二萜内酯类化合物的提取方法包括以下步骤：
12、将所述第二混合物进行重结晶，得到第四混合物；
13、将所述第四混合物进行第二高效液相色谱分离，得到具有式7所示结构的穿心莲二萜内酯类化合物；所述第二高效液相色谱分离所用流动相为乙腈和水的混合液。
14、优选地，所述第一溶剂包括甲醇水溶液或丙酮；所述提取的次数为2～4次；每次提取的温度独立为20～30℃，每次提取的时间独立为20～30h，每次提取的料液比独立为1～1.5kg：3～4.5l。
15、优选地，所述第一硅胶柱层析分离为梯度洗脱，所述第一硅胶柱层析分离所用二氯甲烷和甲醇的体积比为50～1：1。
16、优选地，所述第一硅胶柱层析分离所用二氯甲烷和甲醇的体积比依次为50：1、25：1和20：1；所述第一硅胶柱层析分离后，收集二氯甲烷和甲醇的体积比为20：1时洗脱的洗脱液。
17、优选地，所述第二硅胶柱层析分离为梯度洗脱，所述第二硅胶柱层析分离所用二氯甲烷和甲醇的体积比为20～1：1。
18、优选地，所述第二硅胶柱层析分离所用二氯甲烷和甲醇的体积比依次为20：1、15：1和10：1；所述第二硅胶柱层析分离后，收集二氯甲烷和甲醇的体积比为15：1和10：1时洗脱的洗脱液。
19、优选地，所述第一反相色谱分离、第二反相色谱分离和第三反相色谱分离所用色谱柱为ods色谱柱；所述第一反相色谱分离、第二反相色谱分离和第三反相色谱分离的洗脱方式为梯度洗脱；
20、所述第一反相色谱分离的梯度洗脱程序为：
21、0.00～2.00h，流动相a的体积分数保持为40％；
22、2.00～2.01h，流动相a的体积分数从40％匀速增至60％；
23、2.01～4.00h，流动相a的体积分数保持为60％；
24、4.00～4.01h，流动相a的体积分数从60％匀速增至80％；
25、4.01～5.50h，流动相a的体积分数为80％；
26、5.50～5.51h，流动相a的体积分数从80％匀速增至100％；
27、5.51～6.00h，流动相a的体积分数保持为100％；
28、所述第二反相色谱分离和第三反相色谱分离的梯度洗脱程序为：
29、0.00～2.00h，流动相a的体积分数保持为0％；
30、2.00～2.01h，流动相a的体积分数从0％匀速增至60％；
31、2.01～4.00h，流动相a的体积分数保持为60％；
32、4.00～4.01h，流动相a的体积分数从60％匀速增至80％；
33、4.01～5.50h，流动相a的体积分数为80％；
34、5.50～5.51h，流动相a的体积分数从80％匀速增至100％；
35、5.51～6.00h，流动相a的体积分数保持为100％。
36、优选地，所述第一高效液相色谱分离和第二高效液相色谱分离所用色谱柱为反相c18硅胶基质色谱柱；所述第一高效液相色谱分离所用流动相中乙腈的体积分数为25～40％；所述第二高效液相色谱分离所用流动相中乙腈的体积分数为35～40％；所述第一高效液相色谱分离和第二高效液相色谱分离的洗脱方式为等度洗脱。
37、本专利技术提供了上述技术方案所述穿心莲二萜内酯类化合物在制备抗炎药物中的应用。
38、本专利技术提供的穿心莲二萜内酯类化合物具有式1～式7任一所示结构，结构新颖。本专利技术所述穿心莲二萜内酯类化合物具有良好的抗炎效果，且对细菌脂多糖(lps)诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(raw264.7细胞)炎症模型中no、白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子-α(tnf-α)和白细胞介素-1β(il-1β)分泌具有很好的下调作用，还对诱导型一氧化氮合成酶(inos)和环氧合酶-2(cox-2)蛋白的表达具有良好的抑制作用，还具有浓度效应，可用于制备抗炎药物。实施例显示，本专利技术提供的穿心莲二萜内酯类化合物具有较好的体外本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种穿心莲二萜内酯类化合物，具有式1～式7任一所示结构：
2.权利要求1所述穿心莲二萜内酯类化合物的提取方法，式1～式6所示结构的穿心莲二萜内酯类化合物的提取方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述提取的次数为2～4次；每次提取的温度独立为20～30℃，每次提取的时间独立为20～30h，每次提取的料液比独立为1～1.5kg：3～4.5L。
4.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述第一硅胶柱层析分离为梯度洗脱，所述第一硅胶柱层析分离所用二氯甲烷和甲醇的体积比为50～1：1。
5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，所述第一硅胶柱层析分离所用二氯甲烷和甲醇的体积比依次为50：1、25：1和20：1；所述第一硅胶柱层析分离后，收集二氯甲烷和甲醇的体积比为20：1时洗脱的洗脱液。
6.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述第二硅胶柱层析分离为梯度洗脱，所述第二硅胶柱层析分离所用二氯甲烷和甲醇的体积比为20～1：1。
7.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于
8.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述第一反相色谱分离、第二反相色谱分离和第三反相色谱分离所用色谱柱为ODS色谱柱；所述第一反相色谱分离、第二反相色谱分离和第三反相色谱分离的洗脱方式为梯度洗脱；
9.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述第一高效液相色谱分离和第二高效液相色谱分离所用色谱柱为反相C18硅胶基质色谱柱；所述第一高效液相色谱分离所用流动相中乙腈的体积分数为25～40％；所述第二高效液相色谱分离所用流动相中乙腈的体积分数为35～40％；所述第一高效液相色谱分离和第二高效液相色谱分离的洗脱方式为等度洗脱。
10.权利要求1所述穿心莲二萜内酯类化合物在制备抗炎药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种穿心莲二萜内酯类化合物，具有式1～式7任一所示结构：
2.权利要求1所述穿心莲二萜内酯类化合物的提取方法，式1～式6所示结构的穿心莲二萜内酯类化合物的提取方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述提取的次数为2～4次；每次提取的温度独立为20～30℃，每次提取的时间独立为20～30h，每次提取的料液比独立为1～1.5kg：3～4.5l。
4.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述第一硅胶柱层析分离为梯度洗脱，所述第一硅胶柱层析分离所用二氯甲烷和甲醇的体积比为50～1：1。
5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，所述第一硅胶柱层析分离所用二氯甲烷和甲醇的体积比依次为50：1、25：1和20：1；所述第一硅胶柱层析分离后，收集二氯甲烷和甲醇的体积比为20：1时洗脱的洗脱液。
6.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述第二硅胶柱层析分离为梯度洗脱，所述第二硅胶柱层析分离所用二氯甲烷...
【专利技术属性】
技术研发人员：郁阳，刘劲松，汪洋，王桂春，王国凯，孙云鹏，
申请(专利权)人：安徽中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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